特殊染色、免疫组化技术结合用于肿瘤病理诊断中的价值

陈惠芹

（厦门大学附属第一医院杏林分院病理科，福建 厦门 361002）

肿瘤为临床常见疾病，近年来人们生活习惯不断改变，饮食结构逐渐调整，不良行为习惯逐渐暴露，导致患病人数越来越多，且呈现出年轻化趋势。本病早期症状不典型，确诊后多数为中晚期，导致最佳治疗时机被错过。临床诊断肿瘤的主要方法为病理诊断，如活检穿刺诊断，此为金标准，虽然可以明确病灶分期与类型等，但该方法具备有创伤性，导致患者痛苦感明显，有较差的依从性，因此临床迫切寻找一种理想的诊断方法。磁共振、CT为临床常用诊断方法，虽然可以确诊但是有较高概率导致漏诊或误诊。近年来临床大量实践证实免疫组化技术病理诊断肿瘤临床价值较高[1-3]，且该技术将抗原修复技术、敏感检测系统及自动免疫染色系统等充分融合，故而广受临床关注。另有文献称该技术联合特殊染色病理诊断肿瘤临床价值更高，便于临床制定诊治方案[4]。基于此选取70例患者，详述特殊染色联合免疫组化技术病理诊断肿瘤的临床价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选取2016年8月至2017年8月于我院就诊的肿瘤患者70例，均经影像学检查、手术病理等确诊为恶性肿瘤。其中男性39例，男性31例，年龄为36～78岁，平均年龄为（49.2±8.3）岁；肿瘤类型：转移性肿瘤35例，原发性肝癌15例，血管瘤8例，内胆管瘤12例。

1.2 方法：所有患者先行活检穿刺诊断，结合病灶位置与类型开展针对性穿刺活检，于超声引导下开展，将病变组织取出后比较于标准组织，而后使用免疫组化技术联合PAS特殊染色、网状纤维染色：①免疫组化技术：试剂主要有中性福尔马林固定液、脱水液、透明液、浸蜡液、MaxVisionTM试剂盒、DAB试剂盒。取组织块大小2 cm×1.5 cm×（0.2～0.3 cm）。加固定液固定6～8 h，过度固定可降低抗原的活性。经脱水、透明、浸蜡包埋过程，切片厚度为2～3 μm，应用防脱载玻片。特殊染色组织只需用普通载玻片。免疫组化染色处理切片组织，常规切片脱蜡后用柠檬酸抗原修复液高压抗原修复法修复，将配制好的柠檬酸抗原修复液加入压力锅中，放置于电磁炉上大功率加热至沸腾，将切片至于耐高温深色架上，放入已沸修复液中，盖锅盖，扣压力阀，继续加热至压力阀开始喷气，计时2 min，而后将压力锅移离电磁炉，室温自然冷却。PBS冲洗2×3 min，加入Glypican-3抗体，室温孵育60 min，PBS冲洗3×4 min，除去PBS液滴加1滴即用型MaxVisionTM试剂，室温孵育15 min后PBS冲洗3×3 min，除去PBS液滴加DAB显色液，显微镜下观察3 min，水洗，水冲返蓝，酒精透明，用树胶封固。同时开展特殊染色处理，二甲苯脱蜡至水处理切片组织，分别行PAS特殊染色、网状纤维染色。

1.3 判定标准：免疫组化技术处理后用GLypican-3判定结果，阳性标准为染色成棕黄色。特殊染色阳性标准按照阳性细胞数目与染色强度之乘积，前者＜1%为0分，1%～9%为1分，10%～33%为2分，34%～66%为3分，＞66%为4分；后者主要依据阳性细胞染色强度，无为0分，弱为1分，中等强度为2分，强着色为3分。得出乘积后按照如下标准判定：0分为阴性，1～4分为1+，5～8分为2+，9～12分为3+[5]。

1.4 统计学方法：应用软件SPSS19.0对上述数据开展统计学分析，[n（%）]表示计数资料，卡方检验开展样本率比较，差异有统计学意义用P＜0.05表示。

2 结 果

两种方法诊断结果比较及联合诊断阳性率分析，见表1。

表1 两种方法诊断结果比较及联合诊断阳性率分析（n=70）

3 讨 论

免疫组化技术类似于特殊染色与电镜观察，在诊断疑难病例时该技术应用广泛。免疫组化染色对肿瘤患者开展病理诊断的基础在于HE切片，需前面细致观察HE切片后结合抗体条件与实验室实际需求筛查实验期间所需抗体，以准确诊断。在光镜缺乏的情况下需深入观察HE切片以了解肿瘤组织，若仅依靠免疫组化技术病理诊断肿瘤则可能导致误诊。在判定结果时要基于细胞形态学，但不能忽视临床医师的工作经验。比如在诊断淋巴瘤时强调免疫组化、临床资料及形态学特征的融合，免疫组化技术的使用目的在于补充形态学价值，但无法取代形态学作用，一般而言免疫组化主要是用来明确细胞来源及分化程度，而临床诊断肿瘤的重要指标为形态学[6-7]。

在实验室病理诊断期间还要合理选择抗体，一般实验室抗体主要有上皮类、软组织类、神经内分泌细胞类、淋巴细胞类等抗体，在选择时要尽量节约成本，结合实际要求合理选择。人体肿瘤类型较多且形态各异，结合肿瘤大小与形态有上皮样细胞、多形性肿瘤细胞、大细胞、梭形细胞等类型，因此在选择抗体时还需与肿瘤类型相结合。在判定诊断结果时要注意的是各种抗体均可能出现异样表达现象，因此要结合影像学检查、临床症状及医师经验等合理诊断。本组结果表明免疫组化诊断阳性率为92.8%，阳性率较高，但还是存在无法明确判断肿瘤具体病理状况的现象，为提高诊断准确率临床还会与特殊染色联合使用。如网状纤维染色，机体各个器官组织中均存在网状纤维，通过染色可对病变组织网状纤维疏密、数量、粗细及是否塌陷、断裂等变化予以观察，有利于临床判断疾病程度、性质及发展情况，还有利于评估治疗转归[8]。本组结果表明PAS特殊染色为2.0%，网状纤维染色为91.4%，联合检测为100.0%，说明特殊染色联合免疫组化技术病理诊断肿瘤准确率高，有推广价值。

[1] 李瑞珍,韩庆功,梁莹莹,等.特殊染色对犬恶性纤维组织细胞瘤的鉴别诊断[J].河南农业科学,2015,44(7)：139-142.

[2] 付璐璐,谷春会,张静文,等.宫颈癌病理诊断的免疫组化技术的最新研究进展[J].中国妇幼保健,2014,29(36)：6176-6178.

[3] 罗教秀,储兵,曹晓珊,等.原位杂交与免疫组化技术用于评价化疗后结直肠癌患者MLH1、MSH2和hMSH6表达水平的对比研究[J].中南医学科学杂志,2017,45(2)：150-152,164.

[4] 郭琦,余英豪.前列腺癌中TMPRSS2-ERG融合基因和ERG蛋白表达及其意义[J].临床与实验病理学杂志,2014,30(10)：1099-1103.

[5] 孙玉倩,李瑞珍,宋高杰,等.特殊染色法对仔猪先天性黑色素瘤的鉴别[J].动物医学进展,2015,36(5)：128-131.

[6] 王晓燕,高俊岩,王艳霞,等.网状纤维染色在临床病理诊断中的应用及技术[J].中国医药导报,2016,13(9)：72-75.

[7] 聂艳红,王红霞,刘慧,等.网状纤维染色及P504S在胰腺实性假乳头状瘤鉴别诊断中的价值[J].临床与实验病理学杂志,2016,32(7)：799-801.

[8] 杨伟平,吴文乔,邹宗楷,等.快速网状纤维染色在术中快速冷冻切片病理诊断中的应用[J].临床与实验病理学杂志,2016,32(10)：1181-1182.