未成熟血小板的性能评价及在血小板减少性疾病中的应用

邱 凯，刘志伟，黄丽春，孙德华

(南方医科大学南方医院检验科,广州 510515)

未成熟血小板(IPF)是骨髓巨核细胞新近释放入外周血的血小板，不含核或DNA成分，却含有少量的mRNA和粗面内质网，保留了合成少量蛋白质的能力，它是血循环中最年轻的血小板。IPF体现了骨髓巨核细胞的血小板生成状态，能反映骨髓的血小板生成能力。Sysmex XN-20全自动血细胞分析仪在检测全血时PLT-F通道可检测出未成熟血小板分数(IPF%)和未成熟血小板绝对值(IPF#),本研究对其进行性能验证和建立参考区间，并探讨其在血小板减少性疾病中的临床应用价值。现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料

1.1.1健康对照组 2016年5月6日至8日对广州市240例健康成人的标本进行检查，年龄18～35岁，其中男120例、中位年龄29岁；女120例、中位年龄28岁；体检正常(体检内容包括血常规、尿常规、肝肾功能、血糖、血脂、X线胸片、B超、心电图等)。

1.1.2疾病组 选择选取2016年3-6月南方医院血液科和小儿科门诊及住院患者111例，其中特发性血小板减少性紫癜(ITP)组24例、再生障碍性贫血(AA)组21例、急性淋巴细胞白血病(ALL)组25例、急性非淋巴细胞白血病(AML)组28例、骨髓增生异常综合征(MDS)组13例。ITP组、AA组均为初诊尚未治疗的患者，全部病例诊断符合血液病诊断及疗效标准。

1.2方法

1.2.1标本采集 采集所有研究对象静脉血，乙二胺四乙酸二钾抗凝，4 h以内完成检测。检测所有研究对象的IPF%和IPF#。

1.2.2仪器与试剂 Sysmex XN-20血细胞分析仪及原厂配套试剂(日本Sysmex公司)。试验前用Sysmex XN CAL PF对PLT-F进行校准。试验中按仪器操作程序进行检测调试，配套e-check高、中、低值质控物进行测试，所有分析用参数结果均在要求范围内。

1.2.4建立参考区间 对240例健康成人的标本结果进行统计分析计算参考区间。

1.3统计学处理

1.3.1数据极值的处理 按照NCCLS C28-A2[3]文件的D/R规则判断极值是否为同质个体。D=全部数据最大(小)-临近最大(小)值，R=全部数据最大值-全部数据最小值。若D/R<1/3 则保留极值，证明来源于同质个体，若D/R>1/3则去除极值，以同样方法再对临近极值进行处理。若有离群点被剔除后，应即将其他数据补上。

2 结 果

2.1Sysmex XN-20检测性能评价分析

2.1.1精密度 批内精密度结果见表1，批间精密度IPF%的CV值为1.8%、IPF#的CV值为3.7%，批内及批间CV均小于5%。

表1 Sysmex XN-20检测IPF的批内精密度比较

2.1.2稳定性 正常值IPF%和IPF#在24 h内CV为8.4%、8.8%,高值IPF%和IPF#在24 h内CV为4.4%、4.5%，见图1。

图1 IPF稳定性

2.1.3携带污染率 IPF%携带污染率为0.16%,IPF#携带污染率为0.27%。

2.1.4线性范围 因IPF%经稀释后数值不变，因此未做线性检测。由图2可知斜率a值在1.00±0.05范围内,R2>0.975,IPF#在(0～94.8)×109/L成线性。

图2 IPF#线性范围

2.1.5相关性分析 应用Sysmex XN-20与Sysmex XE-5000检测IPF%的R2=0.351,P>0.05;两种仪器IPF#的R2=0.321,P>0.05,二者无相关性。

2.2参考区间 经正态性检验IPF%和IPF#240例健康者数据不服从正态分布(P<0.05)，故用百分位数值(95%)确定参考范围,男女组经K-W检验差异无统计学意义(P>0.05)，合并为一组(240例)。参考范围IPF%:0.9%～4.5%，IPF#:(3.7～9.7)×109/L。

2.3各组血液疾病检测结果比较 ITP组、MDS组的IPF%与健康对照组差异均有统计学意义(P<0.05)，AA、ALL、AML组的IPF%与健康对照组差异无统计学意义(P>0.05)。ITP组的IPF#与健康对照组差异无统计学意义(P>0.05)，AA、ALL、AML组的IPF#与健康对照组差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 各组疾病IPF检测结果比较[M(P2.5～P97.5)]

注：与健康对照组比较，*P<0.05

2.4ITP组与健康对照组绘制IPF%的ROC曲线及临界值 ITP组与健康对照组IPF%曲线下面积为1，与A=0.5相比较，差异有统计学意义(P<0.01)。根据统计结果中各可能切点的灵敏度和特异度，计算约登指数。以约登指数最大的切点为临界点，确定IPF%最佳临界值为11.6%。该点灵敏度100%，特异度100%，约登指数1。见图3。

图3 ITP组与健康对照组IPF%的ROC曲线

3 讨 论

Sysmex XN-20全自动血细胞分析仪PLT-F通道是利用荧光色素给血小板染色，采用流式细胞测量法(FCM)根据前向散射光和荧光强度的差异，明确地区别血小板和其他的血细胞。根据检测数据绘制出二维散点图，将荧光强度较强的区域划分为IPF。通过上述试验结果可见该仪器检测IPF精密度高，稳定性好，携带污染率极低，线性范围宽广,可以满足临床检测要求。干细胞移植后为了预防发生严重出血并发症，会进行预防性的血小板输注，但血小板浓缩制剂的使用期限为采血后72 h，为此必须事前预约,供给量也非常少，成本较高给患者带来负担的同时还会带来不良反应。通过监测IPF，根据IPF的一过性增加[4]可预测血小板恢复,避免了血小板输血。在肿瘤化疗患者，化疗停药后骨髓造血功能恢复，IPF增加早于血小板数量的增加[5],监测IPF可了解肿瘤患者骨髓恢复的情况，指导临床用药及肿瘤治疗中化疗时机的选择。

Sysmex XN-20与XE-5000的IPF%及IPF#检测结果无相关性，由于当前检测IPF没有参考方法，因此分析两种型号仪器检测结果的差异原因有两点：(1)荧光染料的改变，PLT-F的荧光染料以噁嗪为主，可以有效去除白细胞碎片[6]、红细胞碎片、小红细胞的干扰；(2)计算机分析方式的改变，避免标本中存在的微小血小板漏检。因此与XE-5000相比，Sysmex XN-20全自动血细胞分析采用血小板特异性荧光染料相对可以得到更精确的IPF。

本研究应用Sysmex XN-20全自动血液分析仪对240例健康成人进行血细胞分析，得出95%参考范围为IPF%:0.9%～4.5%;IPF#:(3.7～9.7)×109/L。初诊为ITP的患者IPF%明显高于健康对照组[7],由于ITP患者血小板相关自身抗体与血小板结合导致单核-巨噬系统对血小板吞噬、破坏增加、寿命缩短，外周血中血小板破坏过多及骨髓巨核细胞增生相关联，导致更多新生的血小板释放入外周血使IPF%升高[8]。初诊为AA的患者IPF#明显低于健康对照组，AA是由多种原因引起的骨髓造血功能衰竭的一组综合病症，骨髓中的巨核细胞减少，血小板生成出现障碍，新生血小板减少，与ITP不同，此结果表明IPF%与IPF#可以鉴别生成障碍还是破坏过多引起的血小板计数减少[9]。从ROC曲线得到IPF%最佳临界值为11.6%。该点灵敏度100%，特异度100%，以此对ITP与健康人区分的准确性最高。因此IPF可以用于ITP临床诊断以及ITP和AA鉴别诊断。与健康对照组比较，MDS的IPF%差异有统计学意义，从SUGIMORI等[10]研究可知高IPF的病例中100%都有染色体异常，预后不良的5号和7号染色体异常出现概率较大，可以用于治疗、预测的辅助检验，IPF的高低可以区分预后好坏。

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