Clusterin与乳腺癌淋巴道转移的相关性研究

谢 乐 毛荣军 韩福兰

广东省佛山市中医院病理科，广东佛山 528000

Clusterin与乳腺癌淋巴道转移的相关性研究

谢 乐 毛荣军 韩福兰

广东省佛山市中医院病理科，广东佛山 528000

目的考察Clusterin在乳腺癌中的表达情况，以及Clusterin与淋巴道转移的相关性。方法选取我院2015年6月～2016年6月经病理证实的乳腺癌患者55例，31例乳腺癌良性病例患者，21例癌旁组织3cm作为对照组。免疫组化SP法检测Clusterin和D2-40蛋白表达水平，计算微淋巴管密度。结果Clusterin主要表达于细胞质；乳腺癌组织中Clusterin阳性率显著高于乳腺良性组织和癌旁组织（P＜0.05）；乳腺癌组织中MLVD显著高于乳腺良性组织和癌旁组织（P＜0.05）；出现淋巴结转移的患者Clusterin阳性率高于无淋巴结转移的患者，数据差异具有统计学意义（χ2=7.882，P＜0.05）。结论乳腺癌患者Clusterin蛋白表达水平上调，出现淋巴结转移的乳腺癌患者Clusterin表达阳性率上升。

Clusterin；乳腺癌；淋巴道转移；相关性

R736.3

A

2095-0616（2018）01-194-04

Correlation between Clusterin and lymphatic metastasis of breast cancer

XIE Le MAO Rongjun HAN Fulan
Department of Pathology, Foshan Hospital of Traditional Chinese Medicine, Foshan 528000, China

ObjectiveTo investigate the expression of Clusterin in breast cancer,correlation between Clusterin and lymphatic metastasis.MethodsFrom June 2015 to June 2016, 55 cases of breast cancer patients , 31 cases of benign breast cancer patients, 21 cases of 3cm adjacent cancer tissue as control group. The expression levels of Clusterin and D2-40 were detected by immunohistochemical SP method, and the density of lymphatic vessels was calculated.ResultsClusterin was mainly expressed in the cytoplasm; The positive rate of Clusterin in breast cancer was significantly higher than that in benign breast tissue andparacancerous tissue(P＜0.05); MLVD in breast cancer was significantly higher than that in benign breast tissue and paracancerous tissue(P＜0.05); The positive rate of Clusterin in patients with lymph node metastasis was higher than that in patients without lymph node metastasis(χ2=7.882,P＜ 0.05).ConclusionThe expression of Clusterin protein in breast cancer patients was upregulated.The positive rate of Clusterin expression in breast cancer patients with lymph node metastasis was increased.

Clusterin; Breast cancer; Lymphatic metastasis; Correlation

近年，乳腺癌发病率在全球呈现上升趋势，在欧美发达国家及我国的一些大城市已成为危害妇女健康乃至生命的第一位恶性肿瘤。全球每年约有130万人被诊断为乳腺癌，约有40万人死于该病。近年来，乳腺癌在我国发病率逐步上升，乳腺癌已位居女性恶性肿瘤发病率之首。乳腺癌的转移是患者术后复发及死亡的主要原因之一[1]。乳腺癌的转移主要通过淋巴道的区域性淋巴结播散[2]，但乳腺癌淋巴道扩散的分子机制尚不清楚，但对其关键因子的研究有助于判断乳腺癌的预后和发生发展。因此，研究乳腺癌淋巴道扩散的分子机制具有更重要的临床指导意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院2015年6月～2016年6月经病理证实的乳腺癌患者55例。年龄30～83岁，平均（51.1±10.3）岁，淋巴结转移患者32例，无淋巴结患者23例。组织学分级WHO 2003年标准：Ⅰ级18例，Ⅱ级20例，Ⅲ级17例。31例乳腺癌良性病例患者，年龄25～79岁，平均（47.9±6.8）岁。取21例癌旁组织3cm作为对照组，年龄31～78岁，平均（50.2±7.5）岁。三组患者一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05）。本研究得到佛山市中医院医学伦理会批准和通过，所有患者均签署知情同意书。

1.2 方法

标本经常规脱水、固定、石蜡包埋，连续切片，片厚度4μm。采用免疫组织化学SP法检测Clusterin在乳腺癌、乳腺良性组织及乳腺正常组织中的表达情况。石蜡切片，片置烤片板上2h；常规二甲苯脱蜡，梯度酒精水化；PBS漂洗，高压锅抗原修复；PBS漂洗3次，3% H2O2孵育10min，PBS漂洗；一抗孵育1h（1∶500稀释）；PBS漂洗，二抗孵育15min；PBS漂洗，DAB显色。以D2-40蛋白免疫组化标记微淋巴管密度（MLVD）[3]。

光学显微镜下（400×）随机选择4个视野，计算视野内的细胞数和阳性细胞数，计算阳性细胞率进行评分，阳性细胞百分比为＜5%为（-）；阳性细胞百分数高于5%为（+）[4]。

1.3 统计学分析

用SPSS 19.0软件进行统计分析，计量资料以（x±s）表示，三组及以上计量数据比较采用方差分析，若结果阳性，则利用q检验进行两两比较，计数资料比较用χ2检验，利用Pearson列联系数计算分类变量关联性，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Clusterin在乳腺癌中的表达

免疫组化结果显示，Clusterin主要表达于细胞质，显示为棕黄色颗粒。癌旁组织未见Clusterin的表达。乳腺良性组织可少见Clusterin的表达。见图1。乳腺癌组织中Clusterin阳性率为52.7%，乳腺良性组织中的阳性率为12.9%，癌旁组织中Clusterin阳性率为0.0%。三组的阳性率数据差异具有统计学意义（χ2=26.393，P＜0.05），两两结果为乳腺癌组织中Clusterin阳性率显著高于乳腺良性组织和癌旁组织（P＜0.05），乳腺良性组织和癌旁组织中的Clusterin阳性率数据差异无统计学意义（P＞ 0.05），见表 1。

表1 Clusterin在乳腺癌中的表达

2.2 MLVD在乳腺癌中的表达

乳腺癌组织中MLVD为（17.80±4.03），乳腺良性组织中MLVD为（6.44±2.43），癌旁组织MLVD为（2.01±1.04）。三组MLVD值数据差异具有统计学意义（F=26.393，P＜0.05），q检验结果显示，乳腺癌组织中MLVD显著高于乳腺良性组织，而乳腺良性组织MLVD又显著高于乳腺正常组织，数据差异均具有统计学意义（P＜0.05），见表2。

图1 Clusterin在乳腺癌中的表达

表2 MLVD在乳腺癌中的表达（± s）

表2 MLVD在乳腺癌中的表达（± s）

注：与乳腺癌组织比较，aP＜0.05；与乳腺良性组织比较，bP＜0.05；与癌旁组织比较，cP＜0.05

分组 n MLVD乳腺癌组织bc 55 17.80±4.03乳腺良性组织ac 31 6.44±2.43乳腺正常组织ab 21 2.01±1.04 F 227.88 P＜0.001

2.3 不同淋巴结转移状态下Clusterin表达的差异

淋巴结转移乳腺癌患者中22例Clusterin阳性，阳性率为68.8%。无淋巴结转移乳腺癌患者中7例Clusterin阳性，阳性率为30.4%。出现淋巴结转移的患者Clusterin阳性率高于无淋巴结转移的患者，数据差异具有统计学意义（χ2=7.882，P＜0.05），见表3。

表3 不同淋巴结转移状态下Clusterin表达的差异

3 讨论

目前，针对肿瘤淋巴转移的机制尚不清楚。肿瘤淋巴管新生和淋巴道转移是其研究中的热点，肿瘤淋巴管可能来源于淋巴管的出芽生长或者骨髓的内皮细胞，最新研究显示肿瘤淋巴管主要来源于淋巴管网内皮细胞出芽生长后形成，表明瘤内及瘤周淋巴管生成在肿瘤淋巴转移中起着更重要的作用[5]。瘤内及瘤周淋巴管生成促进肿瘤淋巴转移可能是：肿瘤细胞脱落，通过瘤内及瘤周新生淋巴管进入循环系统，向血管外迁移，形成新的转移灶[6]。

本研究中利用MLVD作为对淋巴结转移情况进行描述的参数，从该指标的名称就可以看出，随着MLVD数值的增加，出现淋巴结转移的可能性也逐渐上升。在已经报道的乳腺癌和结肠癌[7]的研究中，MLVD与腋窝淋巴结转移呈正相关，MLVD升高意味着淋巴结转移和远处器官转移的概率增加，同时也意味着原发病灶恶化程度的相对提升，因为只有恶化程度较高的病灶发生转移的概率较高。淋巴道转移是乳腺癌的恶化的重要因素，本研究中在研究中进一步证实了该过程，乳腺癌组织中MLVD显著高于乳腺良性组织和癌旁组织，数据差异具有统计学意义（P＜0.05），并且随着组织癌变程度加大，MLVD的数值也出现不断增大的趋势，该研究结果和目前的主流研究一致[8]，也提示淋巴道转移的途径对于乳腺癌恶化程度的重要意义，说明MLVD衡量乳腺癌恶化程度的敏感度。

Clusterin是一种76～80kDa高度保守的异二聚体分泌型糖蛋白，广泛分布于人体组织，参与了体内多种生理功能，如参与脂类交换和运输，调节细胞-细胞、细胞-基质相互作用，调节补体作用，细胞保护作用。人体存在的分泌性Clusterin[9]和核型Clusterin，分泌性Clusterin是生理条件下的主要存在形式，Clusterin具有双向调节的作用，一方面可以发挥促凋亡的作用，另外一方面可以诱导肿瘤的耐药性作用。核型Clusterin是一种细胞凋亡促进因子，而分泌型Clusterin则是促进肿瘤的发生、发展[10]。在本研究中，比较了乳腺癌组织，乳腺良性组织和癌旁组织中Clusterin表达的情况，结果显示乳腺癌组织中Clusterin阳性率显著高于乳腺良性组织和癌旁组织（P＜0.05），此结果提示Clusterin可能在乳腺癌的发生与发展过程中起到了重要的促进作用。通过免疫组化的方法，本研究中也发现Clusterin主要存在于胞浆中。尽管Clusterin在各类恶性肿瘤的发生，发展中确切的分子机制尚不清楚，但是在近些年的研究结果表明，Clusterin可能是通过抗细胞凋亡的机制直接发挥促肿瘤生长达到作用，Sintich等[11]认为Clusterin及其抗体均为大分子蛋白，不会直接进入细胞内部，细胞膜才是其作用部位，而Kruger等[12]的研究结果与本研究相类似，其结果为Clusterin表达的上调与乳腺从正常组织到癌前病变和乳腺恶性变的进展密切相关。

Clusterin如何促进乳腺癌的发生发展，是否Clusterin可影响淋巴道转移，目前尚未见Clusterin与淋巴道转移的相关报道，本研究中尝试分析不同淋巴结转移状态下Clusterin表达的差异，结果显示，出现淋巴结转移的患者Clusterin阳性率高于无淋巴结转移的患者，数据差异具有统计学意义（χ2=7.882，P＜ 0.05），但是作为横断面研究，尚无法确定两者之间的因果关联，只能猜想乳腺癌的淋巴结转移可能与Clusterin的高表达有关，由于目前关于Clusterin和淋巴结转移之间的研究较少，尚无法分析其可能机制。

综上所述，乳腺癌患者中Clusterin蛋白表达水平上调，出现淋巴结转移的乳腺癌患者Clusterin表达阳性率上升，但其机制有待进一步研究。

[1] 薛书霞，张景华，李景武，等 .Clusterin、Livin、Caspase-3蛋白在乳腺浸润性导管癌中的表达[J].海南医学院学报，2011，17（12）：1612-1617.

[2] 李景武，张景华，薛书霞，等.乳腺浸润性导管癌中Clusterin蛋白表达及其与临床病理特征的关系[J].肿瘤学杂志，2012，18（6）：405-407.

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[4] 李义强，赵春雨，李壮，等.乳腺癌微淋巴管生成与淋巴道转移的关系 [J].黑龙江医药科学，2012，35（2）：65-66.

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[9] Niu ZH，Wang Y，Chun B，et al.Secretory clusterin(sCLU)overexpression is associated with resistance to preoperative neoadjuvant chemotherapy in primary breast cancer[J].European Review for Medical & Pharmacological Sciences，2013，17（10）：1337-1339.

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[12] Kruger S，Ola V，Fischer D，et a1.Prognostic significance of clusterin immunoreactivity in breast cancer[J].Neoplasma，2007，54（1）：46-50.

2017-09-04）