玛咖酰胺快速测定方法应用研究

杨 军，王艳菊，白永文

（云南省丽江市质量技术监督综合检测中心，云南 丽江 674100）

玛咖酰胺快速测定方法应用研究

杨 军，王艳菊，白永文

（云南省丽江市质量技术监督综合检测中心，云南 丽江 674100）

主要以玛咖中的玛咖酰胺作为研究对象，通过试验，建立了快速、高效的玛咖酰胺液相色谱-串联质谱测定方法。在研究中所选择的玛咖样品均经由石油醚-超声辅助进行提取，并运用型号为ZORBAX C18的色谱柱对样品进行分离，用紫外检测器进行检测，同时，将质量分数为0.1%的甲酸作为流动相，运用乙腈-1 mml/L乙酸铵水溶液进行洗脱。最终结果表明，在质量浓度为0.01～10.0 μg/L的玛咖酰胺中具备线性关系，其定量限为20 ng/kg，检出限为5.0 ng/kg。其中，加标量分别为0.1、0.2和0.02μg/kg时，回收率保持在92.0%～115.6%，这也进一步说明此方法满足玛咖酰胺分析测定要求。

玛咖；玛咖酰胺；快速测定；检出限

玛咖在我国的云南迪庆、丽江、昭通等地均有分布，而玛咖酰胺作为玛咖中的特征化合物，其生物活性呈现出多样化的特点，对其特征进行测定时，多运用液相色谱方法，但由于玛咖中蕴含的成分较为复杂，仅采用液相色谱方法测定的杂峰较多，也会干扰玛咖酰胺的基质。同时，也有相关文献资料指出，运用液相色谱-高分辨质谱方法可以有效对玛咖酰胺的定性进行分析。在本文中，对玛咖中玛咖酰胺进行测定主要采用现代定量能力比较强的三重四极杆质谱仪，并在此基础上，结合超高效液相色谱对玛咖酰胺质谱断裂的方式展开了研究，进而了解和分析了玛咖酰胺特征光谱学信息，也为玛咖中玛咖酰胺更加深入的研究提供了参考。

1 快速测定实验

1.1 实验仪器和材料

1.1.1 实验仪器

在本次实验中所需要运用到的仪器有以下几个：①高效液相色谱仪（配置紫外检测器），岛津LC-20A；②液质联用仪，岛津LCMS-8030；③色谱柱为Waters XTerra C18（规格为250 mm×4.6 mm，5 μm）；④超声清洗机（功率≥200 W）；⑤旋转蒸发仪；⑥离心机（可放置50 mL离心管）。

1.1.2 实验材料

在本次实验中所涉及到的材料有以下几种：①分析纯的石油醚、色谱纯的乙腈和纯净水；②5种玛咖酰胺对照品（间甲氧基-苄基-亚麻酰胺、苄基-亚麻酰胺、间甲氧基-苄基-亚油酰胺、苄基-亚油酰胺、苄基-十六烷酰胺）；③其他使用的实验材料的纯度都在97%以上。

1.2 实验方法

先对5种玛咖酰胺对照品进行稀释，运用甲醛进行定容得到混合的标准溶液，对溶液进行避光保存；将玛咖中玛咖酰胺用石油醚进行超声辅助提取，旋蒸干燥后乙腈定容，主要运用乙腈对玛咖酰胺进行溶解，并将之以待测溶液的方式呈现，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，紫外检测器检测。根据保留时间定性、与峰面积的比较进行定量。

5种玛咖酰胺对照品液相分离示意图如图1所示。

图1 5种玛咖酰胺对照品液相分离示意图

2 实验结果讨论

2.1 玛咖中玛咖酰胺的质谱研究

运用乙腈-水对5种玛咖酰胺对照品进行稀释，并运用一级质谱对5种玛咖酰胺进行全面扫描，同时，以这些离子分别进行二级质谱扫描，发现含有m/z91碎片离子，通过化学结构展开推测，在m/z91玛咖酰胺结构中其长链脱落之后剩余的苄基基团，如图2所示。

2.2 玛咖酰胺快速测定方法的应用

2.2.1 对提取条件的改进

对石油醚、乙腈、甲醛提取溶剂进行对比分析发现，石油醚对提取玛咖酰胺的应用效果最好，而乙腈和甲醛提取溶液效果相对较差。将超声波应用到提取过程中，可以提升提取物的分散效率，玛咖酰胺作为低极性类化合物，可以吸附到细胞其他物质之上，因此，将超声波运用到其中可以有效对细胞壁进行破坏，使得游离细胞在提取溶剂中溶解，在最后实验结果中也表明了超声波能够发挥很好的辅助效果。

图2 玛咖酰胺断裂方式推导图

2.2.2 对质谱条件进行优化

在上述中提到运用一级质谱和二级质谱进行扫描，但由于不同的玛咖酰胺的化学结构裂解的规律不一致，且m/z91在二级质谱扫描中强度比较低，为了提高测定的稳定性，需要选择强度较高的玛咖酰胺离子碎片，对其电压优化之后，得到MRM模式下质谱条件。

2.2.3 对色谱条件进行优化

由于玛咖中玛咖酰胺的化学结构中包含了长链脂肪酸结构，并且这一结构的化学极性较小，在C18柱上保留的时间比较长，根据实验显示结果，将甲醛-水作为测定的流动相，延长了出峰的时间，在这过程中所需要使用的甲醛比例也比较大，因此，在实验中尽量选择乙腈，其具有很好的洗脱效果，且缩短了出峰时间。

2.3 线性范围及检出限

对5种玛咖酰胺对照品稀释成不同的浓度，并根据不同种玛咖酰胺的峰面积对不同浓度的玛咖酰胺进行线性回归。由于玛咖样本身含有一定的玛咖酰胺，且含量高低不同，因此，在定量限和检出限时，样品质量为0.5 g，以3倍和10倍信噪比对玛咖酰胺的定量限和检出限进行有效判定，最终实验结果显示玛咖酰胺的相关系数较好，玛咖酰胺的检出限也比较低，可以满足玛咖中玛咖酰胺快速测定要求。

2.4 精密度及回收率

上述样品称取0.5 g，并根据其定量限以1倍、5倍、10倍定量限作为添加浓度，对玛咖酰胺开展回收实验。对5种玛咖酰胺分别进行3次回收实验，并对其回收率进行计算和记录。最终结果显示，玛咖酰胺的回收率在92.0%～115.6%，相比标准差的范围在6.1%～12%，符合其测定的要求。

3 结论

本文对玛咖中玛咖酰胺的快速测定方法进行了应用研究，主要通过实验的方式展开，以玛咖酰胺在高效液相中的特征光谱作为快速测定的基础，采用超高效液相色谱-串联质谱方式，选择石油醚作为玛咖酰胺的提取溶液，超声波在其中发挥了辅助作用，并结合MRM监测模式，可以快速、有效地对玛咖酰胺进行定性和定量分析，从而实现玛咖中玛咖酰胺的快速测定分析。

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R284

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10.15913/j.cnki.kjycx.2018.02.152

2095－6835（2018）02－0152－02

张思楠〕