不同方法检测布鲁氏菌抗体的比较分析

罗成群

（重庆市涪陵区焦石镇畜牧兽医站，重庆 408000）

不同方法检测布鲁氏菌抗体的比较分析

罗成群

（重庆市涪陵区焦石镇畜牧兽医站，重庆 408000）

随机采集重庆市涪陵区各乡镇的规模养殖户和散养农户14085份牛、羊血清，采用RBPT、SAT和ELISA 方法对布病非免疫抗体进行检测，结果显示，采用RBPT方法检测出阳性81份，阳性率为0.57%，SAT检测出阳性78份，阳性率为0.55%，ELISA检测出阳性73份，阳性率为0.52%。结果表明SAT和ELISA检测方法具有较高的敏感性，在实际工作中，可采用RBPT方法对布病进行初筛，SAT和ELISA检测方法进行确诊，本研究为本地区牛、羊布病防控、净化工作提供了依据。

布鲁氏菌 检测方法 RBPT SAT ELISA

布鲁氏菌病（brucellosis）以下简称“布病”，是由布鲁氏菌引起的一种广泛分布于世界各地的人畜共患的传染病，以生殖器官和胎膜发炎、母畜流产、不孕和公畜睾丸炎为主要临床特征。据报道，在全世界现有的200多国家地区中，有布病报到的就有170个，30多个国家尚未报告有布病发生，还有16个国家和地区宣布没有或已经控制布病，而美国目前人间发病率仍在1/10万以上，对畜牧业生产和人类健康造成了很大危害。

近年来，国内外对布病系统性的研究有近150年的历史，其间开发了许多布病体外和体内诊断方法，这些诊断方法服务于不同的应用目的，例如：证实疫情发生、全国性普查、确诊、国际贸易检测以及“无布病”地区的布病监测等等，如何选择诊断策略取决于布病的流行状况及检测的目的。目前常用的检测方法有：平板凝集试验（PAT）、虎红平板凝集试验（RBPT）、补体结合试验（CFT）、试管凝集试验（SAT）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、聚合酶链反应试验（PCR）等。

本研究采用虎红平板凝集试验（RBPT）、试管凝集试验（SAT）、酶联免疫吸附试验（ELISA）等常用的血清学检测方法对布病非免疫抗体进行检测，以明确不同方法检测的敏感性和特异性，以便以后针对性地选择使用检测方法提供依据，从而为我区布病的防控、净化工作提供技术支撑。

1 材料与方法

1.1 材料

（1）试验试剂 布病虎红平板凝集抗原、布病阳性血清、布病试管凝集抗原，青岛易邦生物工程有限公司生产：布病竞争酶联免疫吸附试验抗体检测试剂盒，哈尔滨平河生物技术有限公司产品。

（2）血清来源14085份血清均为2014年～2016年5月采自重庆市涪陵区各乡镇规模养殖场和散养农户。

1.2 方法

（1）虎红平板凝集试验（RBPT）、试管凝集试验（SAT）

（2）竞争酶联免疫吸附试验（ELISA）按照试剂盒说明书进行

2 试验结果

2.1 布病阳性检测率

14085份牛、羊血清样品，采用RBPT方法检测出阳性81份，阳性率为0.57%，SAT方法检测出阳性78份，阳性率为0.55%，ELISA方法检测出阳性73份，阳性率为0.52%。具体监测结果见表1。

表1 不同检测方法对布病的阳性检测率

2.2 不同检测方法的符合率

14085份血清样品，采用RBPT、SAT、竞争ELISA方法检测，采用RBPT方法检测出阳性81份；SAT检测出阳性78份，其中3份为RBPT检测的阳性血清样品；竞争ELISA检测出阳性73份，其中8份为RBPT检测的阳性血清样品，5份为SAT检测的阳性血清样品。结果显示SAT和RBPT检测方法的结果符合率为96.3%，竞争ELISAR和BPT结果符合率为90.1%，竞争ELISA和SAT结果符合率为93.59%。

3 讨论

本试验通过对14085份牛、羊血清布病非免疫抗体进行检测，结果发现三种检测方法中，ELISA敏感性最高，而SAT检测方法的敏感性也优于PBPT。

血清学试验：主要检测血清或乳中的布鲁氏菌抗体。平板凝集试验（PAT）是布病血清学诊断的常规方法之一，通常用于布病普查的初筛，但PAT法有时可出现非特异性凝集，在基层兽医检测中已经不适用PAT方法；目前RBPT是许多国家布病普查的常规方法之一，RBPT法检出率与PAT基本一致，略低于SAT检查感染动物血清的阳性率，但一般来说，RBPT 并不能与 SAT、PAT、补体结合试验（CFT）等相互替代，最好采取综合诊断，主要用于布病早期诊断。

SAT一直是许多国家布病诊断的常规血清学方法，我国家畜布病检测标准就是用SAT作为复核诊断方法。但单独应用SAT，可能出现假阳性或假阴性反应，同时并不是所有感染动物都出现具有诊断意义的抗体水平，因而易造成误诊和漏诊。

ELISA是目前比较通用的血清学检测方法，特异性、敏感性强，是国际贸易指定试验。实验证实ELISA试验较SAT敏感性高10～100倍，是布病诊断中不可缺少的方法之一。

在实际操作过程中，RBPT操作简便并且用时短，SAT出现结果时间较长，是实验员肉眼观察判定结果，具有很大的主观性，ELISA方法监测布病，操作便捷，敏感性高，结果更为准确，因此在实际检测过程中应把三种方法结合起来运用，互补优劣。先用RBPT筛选，对疑似阳性样品再用SAT以及ELISA复检进行确诊，从而达到布病防控和净化的目的。

[1] 黎银军.我国布鲁氏菌病时空分布及风险预测研究[D].中国人民解放军军事医学科学院，2013.