柚皮苷对AB果蝇模型阿尔茨海默病的寿命影响

李灵芝　应曜宇

[摘要]目的：从行为学角度，观察柚皮苷对转基因果蝇阿尔茨海默病（AD）模型的影响。方法：采用Ga14/USA系统建立AB果蝇模型；连续给药后进行行为学实验，观察柚皮苷对AD果蝇寿命的影响。对照组和模型组培养基中加入等容积培养菌（酵母菌）后，给药组分别给予20mm01/L和50mmol/L柚皮苷，抑制剂组分别给予20mmol/L柚皮苷、20mmol/L L-NAME和50mmol/L柚皮苷、40mmol/L L-NAME。通过爬行实验观察柚皮苷对阿尔茨海默症果蝇寿命的影响。结果：与对照组比较，模型组果蝇寿命明显减少；与模型组相比，柚皮苷治疗组能明显增加果蝇寿命；与治疗组相比，抑制剂组能显著减少果蝇寿命。结论：柚皮苷对AD果蝇模型寿命具有保护作用，其作用机制可能与其激活eNOS表达有关。

[关键词]柚皮苷；阿尔茨海默病；eNOS；寿命

阿尔兹海默症（Alzheimer's disease，AD）一种表现为认知水平的进行性障碍、记忆力的损害、精神行为的异常表现以及情感的障碍为特征的神经退行性疾病，大脑皮质弥漫性萎缩、神经元的空泡缺失是AD的显著病理特征，AD的主要致病因素是p一淀粉样蛋白（Ap）在脑神经元间过量沉积，不同途径直接或间接诱导产生了相关症状。

大量的实验研究表明，黄烷酮类化合物对AD的治疗有效。目前己有报道表明中药单体柚皮苷，具有独特的改善线粒体的功能障碍和较强的抗生物氧化的特性。

从行为学角度，研究黄烷酮类药物柚皮苷对AD果蝇寿命的改善作用，并在AD中对柚皮苷抗氧化作用进行机制初探，为治疗AD提供更多药物靶点。

1材料

1.1动物

转基因果蝇品系w1118，USA-AB42。

1.2药物

柚皮苷，L-NAME（sigma公司）。

2方法

2.1AD

正常对照组使用果蝇品系w1118。致病性果蝇USA-AB42分别作为AD组、给药组及抑制剂组使用。

2.2培养基制作

普通玉米培养基，加热搅拌均匀后加0.5ml丙酸倒入高压蒸汽灭菌后的培养瓶中，每瓶加入0.7g酵母粉。

2.3实验分组

本实验共设6组，包括实验对照组、转基因的AD果蝇模型组、AD+柚皮苷（20mmol/L）、AD+柚皮苷（50mmol/L）、AD+柚皮苷（20mmol/L）+抑制剂L-NAME（20mmol/L）、AD+柚皮苷（50mmol/L）+抑制剂L-NAME（40mmol/L）。

3结果

（1）与正常对照组比较，模型组平均寿命均显著降低（P<0.001），药物干预组果蝇平均寿命也降低（P<0.001），抑制剂组果蝇平均寿命也降低（P<0.001）。

（2）与AD果蝇模型组比较，低浓度的柚皮苷组果蝇的寿命提高（P<0.05），高浓度的柚皮苷组果蝇寿命明显提高（P<0.001）。结果提示柚皮苷对AD果蝇的寿命具有一定的保护作用，且高浓度药物实验證明保护效果越明显。

（3）与低浓度柚皮苷组相比，低浓度药物抑制剂L-NAME组果蝇寿命降低（P<0.05）。

（4）与高浓度柚皮苷组相比，高浓度药物抑制剂L-NAME组果蝇寿命明显地降低（P<0.001）。结果提示柚皮苷对AD果蝇寿命的保护作用可能是通过激活eNOS蛋白来实现的，如表1所示。

4讨论

果蝇最早是作为遗传学研究的工具之一，研究操作的难度要求不高。本研究中，寿命计数被采用来检测果蝇寿命，在果蝇行为学研究中，该行为范式基础且应用广泛。

本实验结果提示，柚皮苷对AD果蝇寿命的保护作用可能是通过激活eNOS蛋白来实现的。在此之前一部分药物在有很多相关报道被证实了对AD模型果蝇具有治疗作用，但是柚皮苷相关AD治疗作用以及该药通过eNOS表达来发挥作用的相关报道未见。更进一步的形态学实验研究还需要进行以药物及机制验证，以对其药理作用进行说明和分析，以为临床阿尔茨海默病的治疗提供更多的药物选择靶点。