肝细胞癌中富半胱氨酸蛋白61和细胞增殖的关系

黄荣师 蔡 洁 范 蓉 岑妍慧 赵飞兰 何国珍

(广西中医药大学组织胚胎教研室，广西 南宁 530200)

肝细胞癌中富半胱氨酸蛋白61和细胞增殖的关系

黄荣师 蔡 洁1范 蓉 岑妍慧 赵飞兰 何国珍

(广西中医药大学组织胚胎教研室，广西 南宁 530200)

目的检测肝细胞癌中富半胱氨酸蛋白(Cyr)61的表达，分析其与肿瘤细胞增殖的关系。方法61例经病理医师确诊为肝细胞癌并进行手术治疗的患者为观察组，15例距肿物边缘>5 cm的非肿瘤性肝组织为对照组，均留取术后蜡块组织，采用免疫组化SP法检测两组中Cyr61、增殖细胞核抗原(PCNA)和Ki67的表达。结果两组中Cyr61的阳性率、PCNA和Ki67增殖指数差异有统计学意义(P<0.05)。观察组中Cyr61的阳性率、PCNA和Ki67增殖指数均与肿瘤最大径密切相关，观察组中Cyr61阳性率与肿瘤转移和血管侵犯密切相关。线性相关分析显示观察组中Cyr61和PCNA、Cyr61和Ki67的表达呈正相关。结论肝细胞癌中Cyr61高表达是促进肿瘤形成和进展的重要因素。

肝细胞癌；富半胱氨酸蛋白61；增殖细胞核抗原(PCNA)；Ki67

肝细胞癌是一种起源于肝细胞的恶性肿瘤，常见原因有病毒性感染及饮食因素〔1〕，是长期病变的结果。研究显示肝细胞癌是高增殖性肿瘤，肿瘤细胞生长活跃，侵袭能力强〔2〕。富半胱氨酸蛋白(Cyr)61是由生长因子诱导产生的富半胱氨酸的即刻早期基因产物，具有促有丝分裂活性和趋化性，参与调节细胞的增殖、转移和黏附作用〔3，4〕。本研究关注肝细胞癌术后组织中Cyr61、增殖细胞核抗原(PCNA)和Ki67的表达，分析其相关性。

1 资料与方法

1.1临床资料 2012年1月至2015年12月广西中医药大学附属医院诊断为肝细胞癌，并行手术治疗的住院患者61例作为观察组，纳入均符合世界卫生组织的诊断标准，并经病理医师确诊。排除术前化疗或放疗的患者，排除合并其他恶性肿瘤的患者。男36例，女25例，年龄42～81岁，平均56.5岁。15例距肿物边缘>5 cm的非肿瘤性肝组织为对照组，其中男8例，女7例，年龄45～78岁，平均54.3岁。患者或家属签署知情同意书。两组临床资料无明显差异，具有可比性。

1.2Cyr61、PCNA和Ki67表达的检测 患者术后留取的组织均常规应用中性甲醛溶液固定12 h以上，由病理科医生取材、固定、脱水、石蜡包埋后切片。Cyr61、PCNA和Ki67表达的检测均应用免疫组化SP法，行二氨基联苯胺(DAB)显色。操作均由主管技师进行，设阳性对照，减少人为误差。

1.3Cyr61、PCNA和Ki67结果的判断 实验结果均应用OlympusBX40光学显微镜进行观察判断，均由病理医师完成判读。以染成棕黄色或棕褐色为阳性反应细胞，Cyr61的阳性部位是细胞质，PCNA和Ki67的阳性部位是细胞核。选择肿瘤细胞分布集中的区域(排除坏死区及间质较多的区域)进行观察，共选择3个400倍视野进行计数，取平均值作为最终判定结果，Cyr61的阳性率<5%为阴性，≥5%为阳性。PCNA和Ki67以<25%为阴性，≥25%为阳性。

1.4统计学方法 应用SAS6.12统计软件进行χ2检验、线性相关分析。

2 结 果

2.1两组中Cyr61阳性率、PCNA和Ki67标记的增殖指数的比较 两组Cyr61阳性率、PCNA和Ki67标记的增殖指数差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组中Cyr61阳性率、PCNA和Ki67标记的增殖指数阳性表达的比较〔n(%)〕

2.2观察组中Cyr61阳性率、 PCNA和Ki67增殖指数在不同临床特征中的比较 观察组中Cyr61阳性率、 PCNA和Ki67增殖指数均与肿瘤的最大径密切相关(P<0.01),Cyr61的阳性率与肿瘤的转移和血管侵犯密切相关(P<0.05)。见表2。

表2 观察组中Cyr61阳性率、 PCNA和Ki67增殖指数阳性在不同临床特征中的比较〔n(%)〕

2.3观察组中Cyr61阳性率、PCNA和Ki67增殖指数的相关性 Cyr61阳性率和PCNA增殖指数(r=0.42，P=0.043)、Ki67增殖指数呈正相关(r=0.45，P=0.040)。

3 讨 论

肝细胞癌的主要临床风险因素是乙型肝炎和肝硬化等，长期慢性肝病使肿瘤相关的蛋白出现改变，促进正常细胞的肿瘤化〔5，6〕。Cyr61是富含半胱氨酸的分泌性肝素连接蛋白，广泛存在于人类的胎盘、心、脑、胰腺等组织中，在胚胎发育性组织中Cyr61的含量较高，而在正常成人的肝组织中含量极低〔7，8〕。Cyr61分泌后与细胞基质和细胞膜相连接，能介导细胞间、细胞与细胞外基质之间的相互作用〔9〕。研究显示Cyr61可以介导细胞黏附作用，同时促进成纤维细胞的趋化作用〔10，11〕。也有观点认为Cyr61可以通过整合素家族与成纤维细胞作用后诱导基质金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-3和纤溶酶原激活物抑制物(PAI)-1的表达，引起细胞外基质的重构〔12〕。PCNA是一种具有调节DNA合成和引起细胞增殖的周期蛋白，其表达可有效地评价细胞的增殖状态〔13〕。Ki67为临床常用的标记增殖指数的蛋白，在细胞周期的G1、S、G2和M期中表达明显〔14〕。PCNA和Ki67的表达部位均为细胞核，二者的功能与细胞的有丝分裂密切相关。由于肿瘤细胞的重要特征是细胞增殖周期的调控失常引起的细胞失控性增生，因此二者可以作为细胞增殖活性的特异性标志物〔15〕。

本实验结果提示Cyr61、PCNA和Ki67高表达可以促进肿瘤细胞的增生，使肿瘤细胞增殖活跃，细胞数量明显增加，肿瘤的体积增大，肿瘤生长快，体积增大明显，侵袭能力明显增强。本文结果提示Cyr61高表达时可以促进肿瘤的迁移，也能促进肿瘤细胞对脉管的破坏，并继发肿瘤转移灶的形成。作为高增殖状态的肝细胞癌，Cyr61的表达有明显促进肿瘤细胞增殖的作用。Cyr61在促进肿瘤进程中可能作用途径较多，本研究中只是关注Cyr61对增殖的调控作用〔16〕。也有研究显示Cyr61可以调节细胞间黏附作用、血管生成的作用等，因此Cyr61的作用特征更加复杂，其途径和通路较多〔17，18〕，后续研究关注Cyr61的调控机制及干预可能有重要价值〔19〕。

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R73

A

1005-9202(2017)23-5862-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.23.052

1 广西医科大学第一附属医院眼科

蔡 洁(1979-)，女，博士，副主任医师，主要从事眼科疾病研究。

黄荣师(1977-)，男，硕士，讲师，主要从事肝癌靶向治疗研究。

〔2016-07-25修回〕

(编辑 苑云杰)