甘子河裸鲤肌肉营养成分和乳酸脱氢酶同工酶的分析

祁洪芳，史建全

( 青海湖裸鲤救护中心，青海 西宁 810016 )

甘子河裸鲤肌肉营养成分和乳酸脱氢酶同工酶的分析

祁洪芳，史建全

( 青海湖裸鲤救护中心，青海 西宁 810016 )

用常规法测定和分析了体质量280 g的甘子河裸鲤肌肉的营养成分。鱼体粗蛋白含量为61.77%(干质量百分率),必需氨基酸含量为31.88 mg，占氨基酸总量的49.67%；采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析了甘子河裸鲤的肝胰脏、肾脏、心、脑和肌肉中的乳酸脱氢酶同工酶。结果显示，不同组织间乳酸脱氢酶存在特异性，在脑中的活性最强。

甘子河裸鲤；营养成分；乳酸脱氢酶

甘子河裸鲤(Gymnocyprisprzewalskiiganzihonensis)仅栖息于青海省海北州甘子河乡的甘子河，甘子河裸鲤也成为青海湖水系的一个亚种。甘子河裸鲤与青海湖裸鲤的主要形态差异为：鳃耙较短，背缘两侧无明显的突起；第一鳃弓的鳃耙较少[1]。裂腹鱼类在河流、湖泊化冰之后即开始繁殖，甘子河裸鲤5—7月繁殖，一般在流速平缓，pH 7.8～8.2，底质为石砾、卵石、细沙，水深0.10～1.0 m,水温10～17 ℃的水域进行繁殖[2]。

同工酶技术已应用于鱼类的种群遗传、系统分类、杂交育种、物种鉴定、个体发育等方面，并取得了积极的成果[3-7]。有关甘子河裸鲤肌肉营养成分和同工酶的研究，目前尚未见报道。为充分掌握甘子河裸鲤种质特性，分析其与其他土著鱼类的差异性，笔者分析了甘子河裸鲤的营养成分和同工酶，以对其种质特性和遗传学等研究提供基础数据。

1 材料与方法

1.1 材料

试验鱼共32尾，平均体长26.5 cm，体质量280 g，于2012年7月10日用拉网捕自青海湖甘子河，距公路桥2 km处。

1.2 方法

1.2.1 营养成分测定方法

采用国家相关标准[8]测定鱼背部肌肉水分、灰分、粗蛋白和粗脂肪含量。水分：用常压干燥法，即取绞碎混匀样品置温箱(105 ℃)至恒定质量；灰分：用灼烧法，样品于电炉上碳化后，置于马福炉(550～600 ℃)恒温灼烧至恒定质量；粗蛋白：用凯氏定氮法测定；粗脂肪：用索氏萃取法测定；氨基酸：经105 ℃烘烤去水后的样品，用酸水解处理后用日立835-50型氨基酸全自动分析仪测定。

1.2.2 同工酶分析

用注射器从活体试验鱼的尾动脉抽血10 mL，放入离心管中，4 ℃静置10 min后，1200 r/min离心10 min，取上清液，置于-20 ℃保存备用。然后，取出鱼的肝胰脏、肾、心、脑、肌肉5种组织，用预冷蒸馏水清洗后，按1∶1加入磷酸盐缓冲液，在预冷的研钵中研磨组织液，置冰箱4 ℃中抽提1 h，然后4 ℃，1200 r/min离心20 min，取上清液按1∶1加入甘油，置于冰箱-20 ℃保存备用。

采用聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳法，电泳于冰箱(4 ℃)内进行。电极缓冲液为Tris-Cl，pH 6.8；Tris-柠檬酸：TC，pH 7.4；EDTA-硼酸-Tris：分离胶缓冲液，pH 8.9。样品中加10 mL缓冲液，90 V电压下电泳，乳酸脱氢酶同工酶电泳约6.5 h[9-10]。

[11]进行染色。染色液配方：Tris-HCL缓冲液15 mL(pH 6.8),30 mg辅酶Ⅰ，30 mg 氯化硝基四氮唑蓝，10.5 mg吩嗪甲酯硫酸盐，乳酸钠溶液10 mol，蒸馏水95 mL。染色完毕后，用75%的冰醋酸固定，用生物电泳图像系统摄影记录。

2 结 果

2.1 肌肉营养成分含量

2.1.1 甘子河裸鲤的肌肉营养成分

甘子河裸鲤肌肉的粗蛋白、粗脂肪、水分、灰分含量(鲜质量百分率)分别为17.31%、0.32%、71.98%和1.28%。

2.1.2 甘子河裸鲤氨基酸含量

每1000 g鱼肉中必需氨基酸含量为31.88 mg，非必需氨基酸含量为32.3 mg(表1)。甘子河裸鲤鱼肉中共检测出17种氨基酸，其中必需氨基酸7种，约占氨基酸总量的49.67%，占非必需氨基酸的平均值为98.69%。

表1 甘子河裸鲤肌肉氨基酸含量 mg/g

注：中国科学院兰州分院分析测试中心生化分析测试部测试.

2.2 乳酸脱氢酶同工酶

甘子河裸鲤的乳酸脱氢酶同工酶在肝胰脏、心脏、肾脏、脑、肌肉中均有表达，其乳酸脱氢酶电泳图谱见图1。

图1 甘子河裸鲤乳酸脱氢酶酶谱1为肝胰脏，2为心脏，3为肾脏，4为肌肉，5为脑.黑色带代表酶活性最强，深灰色带代表活性次之，浅灰色带代表酶活性最弱.

比较发现，甘子河裸鲤不同组织乳酸脱氢酶同工酶的活性强度有差异，在脑组织中酶活性最强，肝胰脏、心脏和肌肉中次之，肾脏中活性最弱。

5种组织中，肝胰脏、心脏、肌肉中出现5条同工酶带，2条深的带；肾脏出现8条带，1条带染色深；脑中出现7条同工酶带，4条带染色深。依照酶谱的相对迁移率，由大至小自阳极到阴极依次命名为乳酸脱氢酶1、乳酸脱氢酶2、乳酸脱氢酶3、乳酸脱氢酶4、乳酸脱氢酶5、乳酸脱氢酶6、乳酸脱氢酶7、乳酸脱氢酶8、乳酸脱氢酶9、乳酸脱氢酶10、乳酸脱氢酶11、乳酸脱氢酶12，迁移率分别为乳酸脱氢酶1=0.8105、乳酸脱氢酶2=0.7832、乳酸脱氢酶3=0.7563、乳酸脱氢酶4=0.6958、乳酸脱氢酶5=0.6075、乳酸脱氢酶6=0.5728、乳酸脱氢酶7=0.5238、乳酸脱氢酶8=0.4797、乳酸脱氢酶9=0.4433、乳酸脱氢酶10=0.3375、乳酸脱氢酶11=0.2541、乳酸脱氢酶12=0.1707。

3 讨 论

3.1 甘子河裸鲤肌肉营养成分

青海湖甘子河水源为高山融雪和降水，海拔高、湖中饵料贫乏，甘子河裸鲤是甘子河乃至青海省的土著鱼类，其粗蛋白含量为17.31%，与青海省特有的鱼类——青海湖裸鲤(G.przewalskiiprzewalskii)14.8%和扎陵湖的花斑裸鲤(G.eckloniherzenstein)16.6%[12]相当，与国内几种常见优质鱼南方大口鲇(Silurussoldatovimeridionalis)、鲇鱼(S.asotus)等鱼类相比[13]，粗脂肪含量稍低。脂肪和蛋白质是鱼类摄食、生长和繁殖等主要能量来源[14]，蛋白质主要用于鱼体的结构生长，脂肪在鱼体生命代谢过程中具有多种生理功能，是重要的动力贮存物质[15]。甘子河裸鲤生存在高海拔地区，每年的产卵时节，需要消耗大量的体能进行繁衍后代，在饵料缺乏的环境下，对亲本产后的生存具有极大的威胁，对这一物种的保护显得尤为重要。

成人的必需氨基酸需要量约为蛋白质需要量的20%～37%，60岁以上老人每日应摄入约70 g的蛋白质，必需氨基酸为14～25.9 g[16]。500 g甘子河裸鲤肌肉必需氨基酸含量约为16 g，各类氨基酸种类齐全且适当，以赖氨酸、甘氨酸、缬氨酸、精氨酸含量为最高，是一优质的蛋白源。

3.2 不同组织乳酸脱氢酶同工酶表达的特异性

生理功能的不同导致同一种酶在同一生物不同组织之间存在不同，即组织特异性。目前在鱼的乳酸脱氢酶同工酶图谱中已找到了多达几十条酶谱[17]，利用同工酶在各物种、种群上的特异性表达进行生物分类的研究，是对传统分类学的补充[18]。甘子河裸鲤乳酸脱氢酶同工酶在脑和肾组织中的酶带数超过7条，6条迁移率相同；肝胰脏、心脏和肌肉组织中均为5条酶带，2条迁移率相同。脑中乳酸脱氢酶2活性最强，趋于阳极，缺乏乳酸脱氢酶3、乳酸脱氢酶4、乳酸脱氢酶10、乳酸脱氢酶11、乳酸脱氢酶12；肾脏中乳酸脱氢酶9活性最强，缺乏乳酸脱氢酶8、乳酸脱氢酶10、乳酸脱氢酶11、乳酸脱氢酶12；肝胰脏中乳酸脱氢酶7活性最强，缺乏乳酸脱氢酶1、乳酸脱氢酶2、乳酸脱氢酶3、乳酸脱氢酶6、乳酸脱氢酶8、乳酸脱氢酶11、乳酸脱氢酶12；心脏中乳酸脱氢酶3活性最强，缺乏乳酸脱氢酶2、乳酸脱氢酶4、乳酸脱氢酶6、乳酸脱氢酶8、乳酸脱氢酶10、乳酸脱氢酶11、乳酸脱氢酶12；肌肉中乳酸脱氢酶9活性最强，趋于阴极，缺乏乳酸脱氢酶1～乳酸脱氢酶6、乳酸脱氢酶8。其中乳酸脱氢酶10在不同组织中均有较强的表达。甘子河裸鲤乳酸脱氢酶同工酶带的总带数只有12条，少于裂腹鱼亚科的裸鲤[19-21]。张武学等[22]发现，青海湖裸鲤的乳酸脱氢酶同工酶有17条，带型也完全不同，这与其生活环境、习性及细胞代谢特异性有关，还有待于进一步研究。

参考文献：

[1] 青海省生物研究所著.青海湖地区的鱼类区系和青海湖裸鲤的生物学[M].北京：科学出版社，1975：14-15.

[2] 武云飞，吴翠珍.青藏高原鱼类[M].成都：四川科学技术出版社，1991：107-109.

[3] 鲍迪,梁爱军,董莹,等.鲤、鲫杂交子代的同工酶分析[J].水产科学,2012,31(5):283-287.

[4] 于淑池,邵杨勇.泥鳅不同组织同工酶的特异性表达分析[J].水产科学,2012,31(5):291-294.

[5] 贺刚,何力,方春林,等.中华草龟(♀)与中华花龟(♂)及其杂种F1代染色体及同工酶比较[J].淡水渔业,2012,42(2):3-9.

[6] 晁珊珊,宫佳琦,刀筱芳,等.齐口裂腹鱼及草鱼乳酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶同工酶的比较研究[J].水产科学,2013,32(8):467-470.

[7] 丁立云,曹立虎,贺刚,等.同工酶分析技术及其在水产动物研究中的应用[J].江西水产科技,2013(3):31-35.

[8] 魏广东.水产品质量安全检测手册[M].北京：中国标准出版社，2005：115-124.

[9] 李太武,王冬群,苏秀榕.缢蛏生物遗传特征分析[J].海洋与湖沼,2003,34(6):640-647.

[10] 葛彦龙，尹洪滨，石连玉，等.鱼类同工酶电泳方法的改进[J].水产学杂志,2010,23(2):51-52.

[11] 洪满贤, 林凌涛. 网纹石斑鱼乳酸脱氢酶同工酶的研究[J].厦门大学学报：自然科学版，1996, 35(6):952-954.

[12] 孙万成，申志新，罗毅浩，等.青海湖裸鲤与花斑裸鲤肌肉理化特性比较[J].食品研究与开发,2013,34(14):14-17.

[13] 陈定福，体学福.南方大口鲶和鲶鱼的含肉率及鱼肉的营养成分[J].动物学杂志，1990, 25(1)：7-9.

[14] 张波，张敏，戴芳群，等.黄海中南部16种重要生物资源种类的生化组成和能量含量[J].海洋水产研究，2008，29(5)：12-18.

[15] 江伟珣，刘毅.营养与食品卫生学[M].北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1992：4-14.

[16] 中国医学科学院卫生研究所著.食物成分表[M].北京：人民卫生出版社,1981.

[17] 罗莉中，毕世华，王春元.金鱼乳酸脱氢酶的同工酶的发生遗传学研究[J].遗传学报，1982，9(5)：375-379.

[18] 扬兴棋，邓初夏，陈宏溪.几种罗非鱼乳酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶同工酶的电泳研究[J].遗传学报，1984，11(2)：132-139.

[19] Chen Y F, He D K, Chen Y Y. Electrophoretic analysis of isozymes and discussion about species differentiation in three species of genusGymnocypris[J]. Zoological Research, 2001, 22(1):9-19.

[20] 李太平, 赫广春, 赵凯, 等. 青海湖裸鲤乳酸脱氢酶的研究[J]. 黑龙江畜牧兽医，2001(10):7-8.

[21] 祁得林.青海湖裸鲤和鲤鱼组织乳酸脱氢酶同工酶比较研究[J]. 青海大学学报:自然科学版, 2003, 21(6):1-3.

[22] 张武学，张采骏，李军祥.青海湖裸鲤乳酸脱氢酶的同工酶的研究[J].青海畜牧兽医杂志，1994，24(3)：9-12.

MuscularNutritiveCompositionandLactateDehydrogenaseIsozymesinGymnocyprisprzewalskiiganzihonensis

QI Hongfang，SHI Jianquan

( The Rescue and Rehabilitation Center of Naked Carps of Qinghai Lake，Xining 810016, China )

The nutritive composition was analyzed in muscles ofGymnocyprisprzewalskiiganzihonensiswith body weight (BW) of 280 g by a conventional method. It was found that the fish had protein content of 61.77% (dry weight), and essential amino acid of 31.88 mg/1000 g BW, accounting for 49.67% of the total amino acids. The vertical polyacrylamide gel electrophoresis showed that lactate dehydrogenase (LDH) was expressed in 5 tissues including hepatopancreas, kidney, heart, brain, and muscles ofG.przewalskiiganzihonensis, indicating that specificity of LDH was observed in different tissues, with the maximal activity in the brain.

Gymnocyprisprzewalskiiganzihonensis; nutritive composition；isozyme

10.16378/j.cnki.1003-1111.2017.02.021

2016-03-28；

2016-05-30.

国家科技基础条件平台项目(2016DKA30470).

祁洪芳(1970-)，女，研究员；研究方向：水产资源及增养殖.E-mail：qhf1970@163.com.

S965.116

A

1003-1111(2017)02-0228-03