Foxp3基因多态性与妊娠期高血压的相关性

谢文杰　陈晞明　易春　陈永权　伍金雷　崔树春　宋代富　陈盛强　戴文军

【摘要】 目的 通過对叉状头/翅膀状螺旋转录因子3（Foxp3）多态性基因位点的序列分析， 探讨Foxp3基因多态性分布及基因型变异对妊娠期高血压（HDCP）发病的易感性， 以阐明其在DHCP发生中的分子机制。方法 选取186例妊娠期高血压患者， 设为病例组；另选取同期251例本院住院的正常孕妇， 设为对照组。分析两组Foxp3-6054、924位点的基因多态性与HDCP的相关性。结果 两组研究对象年龄比较， 差异无统计学意义（P>0.05）， 两组高血压家族史、孕周、收缩压（SBP）、舒张压（DBP）比较， 差异具有统计学意义（P<0.05）。Foxp3-924基因多态性检测中两组基因频率比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。病例组患者中T/T基因型及T等位基因频率明显少于对照组， 差异具有统计学意义（P<0.05）；病例组A/A基因型频率明显多于对照组， 差异具有统计学意义（P<0.05）。Logistic回归分析提示AT+TT型可减少HDCP的发生风险（OR=0.367， 95%CI为0.218， 0.617， P<0.05）， 而联合基因型AA+AT可增加罹患HDCP的风险（OR=2.518， 95%CI为1.654， 3.832， P<0.05）。结论 Foxp3-6054位点基因型及等位基因频率在HDCP组与正常妊娠组间存在显著性差异， Foxp3-6054位点多态性可能参与HDCP的发生， 而Foxp3-924基因多态性可能与HDCP无关。

【关键词】 叉状头/翅膀状螺旋转录因子3；妊娠期高血压；基因多态性

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.33.006

Correlation between Foxp3 gene polymorphism and hypertensive disorder complicating pregnancy XIE Wen-jie， CHEN Xi-ming， YI Chun， et al. Department of Internal Medicine-Cardiovascular， Third Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University， Guangzhou 510150， China

【Abstract】 Objective To investigate the distribution of forkhead / winged helix transcription factor 3 （Foxp3） gene polymorphism and the susceptibility of genotype variation to hypertensive disorder complicating pregnancy （HDCP） in order to clarify the molecular mechanism of pregnancy induced hypertension. Methods There were 186 patients with pregnancy induced hypertension as case group， and concurrent 251 normal pregnant women as control group. The correlation between gene polymorphism and HDCP of Foxp3-6054 and 924 loci and HDCP in two groups was analyzed. Results Both groups had no statistically significant difference in mean age （P>0.05）. Both groups had statistically significant difference in family history of hypertension， gestational age， systolic blood pressure （SBP）， diastolic blood pressure （DBP） （P<0.05）. Both groups had no statistically significant difference in gene frequency in Foxp3-924 gene polymorphism detection （P>0.05）. The case group had obviously less T/T genotype and T allele frequency than the control group， and the difference was statistically significant （P<0.05）. The case group had obviously more A / A genotype frequency than the control group， and the difference was statistically significant （P<0.05）. Logistic regression analysis suggested that AT + TT could reduce the risk of HDCP （OR=0.367， 95%CI as 0.218， 0.617， P<0.05）， and combined genotype AA + AT could increase the risk of developing HDCP （OR=2.518， 95%CI as 1.654， 3.832， P<0.05）. Conclusion Foxp3-6054 locus genotype and allele frequency were significantly different between HDCP group and normal pregnancy group. Foxp3-6054 polymorphism might be involved in the occurrence of HDCP， and Foxp3-924 gene polymorphism might be related to HDCP Irrelevant.endprint

【Key words】 Forkhead / winged helix transcription factor 3； Hypertensive disorder complicating pregnancy； Gene polymorphism

妊娠期高血压（hypertensive disorder complicating pregnancy，

HDCP）是妊娠期特有的疾病， 其发病率高达5%～12%， 是孕产妇及新生儿高病死率的主要病因之一[1]， 严重影响母婴健康， 主要表现为一过性血压升高及蛋白尿等。妊娠是一种半同种异体移植现象， 妊娠的成功与否取决于母胎之间双向免疫调节的平衡， 在母胎免疫耐受中起着重要作用的是CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞（Treg）细胞[1， 2]。有研究表明[3， 4]， Foxp3基因可以调节CD4+CD25+Treg细胞的发育及功能， 并且能介导其活化对机体产生负反馈， 目前国内外对HDCP和Foxp3-6054， -924基因多态性之间相关性的研究还比较少， 本研究旨在分析Foxp3-6054， -924基因位点多态性在HDCP和正常孕妇之间的差异， 从而探讨HDCP发生中的分子遗传学机制。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选取2013年10月～2014年9月本院产科收治入院的186例HDCP患者， 设为病例组， 均符合《妇产科学》第8版的HDCP疾病的诊断标准， 排除慢性高血压及自身免疫等疾病；另选取同期251例本院住院的正常孕妇， 设为对照组。

1. 2 研究方法 以EDTA抗凝管留取两组静脉血3 ml， 置于4℃保存， PCR扩增Foxp3-6054、Foxp3-924基因， 按顺序加入0.5 μl模版DNA、5 μl Buffer、1 μl 25 mmol/L的dNTP混合物、0.5 μl上、下游引物、0.25 μl Taq聚合酶， 最后加H2O至25 μl。Foxp3-6054 基因引物：上游引物F1 5'-ACCTTTAAGTCTTCTGCCATTTATTCTATTATTT-3'；F2 5'-CCTTTAAGTCTTCTGCCATTTATTCCTATTATTA-3'；下游引物R5'-TGATTATCAGCGCACACACTCAT-3'；Foxp3-924 基因引物：上游引物P1 5'-CTGGCTCTCTCCCCAACTG；A-3'， P2 5'-CTGGCTCTCTCCCCAACTGC-3'；下游引物R 5'-ACAGAGCCCATCATCAGACTCTCTA-3'。

1. 3 觀察指标 观察比较两组的基础资料（年龄、高血压家族史、孕周、SBP、DBP）、Foxp3-924基因型频率及等位基因频率、Foxp3-6054位点基因型频率及等位基因频率分布情况， 分析Foxp3基因多态性与HDCP相关性。

1. 4 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。采用Logistic回归分析两组基因型与等位基因的相关性， 以优势比及其95%可信区间表示其相对危险度。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2. 1 基础资料 两组研究对象年龄比较， 差异无统计学意义（P>0.05）， 两组高血压家族史、孕周、SBP、DBP比较， 差异具有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2. 2 Foxp3-924基因型频率及等位基因频率 病例组A/A、A/G、G/G表型频率分别为：45.7%、41.9%、12.4%， 对照组分别为44.2%、41.0%、14.7%；病例组A、G基因频率分别为：61.7%和38.3%， 对照组分别为：60.5%和39.5%。Foxp3-924基因多态性检测中两组基因频率比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。见表2。

2. 3 Foxp3-6054位点基因型频率分布 病例组Foxp3-6054位点的基因分型为A/A、A/T、T/T， 其基因分型存在多态性， 其表型频率分别为：24.7%、51.6%、23.7%， 对照组分别为10.8%、45.4%、43.8%；病例组A、T基因频率分别为：50.4%和49.6%。对照组分别为：38.6%和61.4%。病例组患者中T/T基因型及T等位基因频率明显少于对照组， 差异具有统计学意义（P<0.05）；病例组A/A基因型频率明显多于对照组， 差异具有统计学意义（P<0.05）。见表3。

2. 4 Foxp3-6054 Logistics回归分析 6054位点联合基因型AT+TT可以减少罹患HDCP的风险（P<0.05）；联合基因型AT+AA显著增加罹患HDCP的风险（P<0.05）。见表4。

3 讨论

HDCP是妊娠特有的疾病之一， 是孕产妇和围生期婴儿死亡的主要病因。目前HDCP的确切病因仍不完全清楚， 但国内外学者一致认为HDCP的发病机制可能是由多因素共同参与的， 其中一个重要因素是机体免疫机制失衡：CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞参与妊娠期高血压疾病炎症免疫过度激活的调控， 并且在母胎免疫耐受中起着重要作用[5]。前期研究表明[6， 7]， HDCP患者外周血中CD4+CD25+Treg的数目和功能明显低于正常妊娠者， 提示CD4+CD25+Treg细胞减少可能参与了HDCP的发生。Foxp3是CD4+CD25+Treg细胞发育和功能维持的一个重要调节因子[8， 9]，作为CD4+CD25+Treg细胞的功能性转录因子在机体免疫耐受及内环境稳定中发挥着重要作用：调节性T细胞的减少可以打破机体内负向调控机制， 使母胎免疫耐受失衡， 从而导致疾病的发生。本研究从分子遗传学机制方面对HDCP患者外周血中Foxp3表达水平进行分析， 进一步阐明了Foxp3基因多态性在HDCP发病机制中的重要作用。endprint

通过对HDCP病例组患者外周血中Foxp3-6054及924各基因位点的多态性进行检测， 结果显示， Foxp3-924基因多态性检测中两组基因频率比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。病例组患者中T/T基因型及T等位基因频率明显少于对照组， 差异具有统计学意义（P<0.05）；病例组A/A基因型频率明显多于对照组， 差异具有统计学意义（P<0.05）。Logistic回归分析提示AT+TT型可减少HDCP的发生风险（OR=0.367， 95%CI为0.218， 0.617， P<0.05）， 而联合基因型AA+AT可增加罹患HDCP的风险（OR=2.518， 95%CI为1.654， 3.832， P<0.05）。因此认为， HDCP可能与Foxp3-6054基因多态性有关， 而与Foxp3-924基因多态性无关， 与前期研究结果一致[10]。

总之， Foxp3-6054位点基因型及等位基因频率在HDCP组与正常妊娠组间存在显著性差异， Foxp3-6054位点多态性可能参与HDCP的发生， 而Foxp3-924基因多态性可能与HDCP无关。

参考文献

[1] 谢幸， 苟文丽. 妇产科学. 第8版. 北京：人民卫生出版社， 2013：49.

[2] 曹衛平， 钱秋菊， 温坚，等. 妊娠期高血压患者外周血CD4+ CD25+Foxp3+调节性T细胞的变化及意义. 中国病理生理杂志， 2010， 26（7）：1425-1427.

[3] Sakaguchi S. Naturally arising Foxp3-expressing CD25+CD4+ regulatory T cells in immunological tolerance to self and non-self. Nature Immunology， 2005， 6（4）：345.

[4] Fontenot JD， Rudensky AY. A well adapted regulatory contrivance： regulatory T cell development and the forkhead family transcription factor Foxp3. Nature Immunology， 2005，6（4）：331-337.

[5] 王思义. CD4+CD25+Foxp3+T细胞在子痫前期中作用机制的研究. 标记免疫分析与临床， 2015， 22（9）：867-869.

[6] 张义东， 王青青. CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞在HDCP外周血中水平变化及其意义. 中国免疫学杂志， 2015（9）：1253-1256.

[7] 廖志琼， 甘婷， 陈晞明，等. 子痫前期孕妇外周血Foxp3-6054，-3279基因多态性研究. 齐齐哈尔医学院学报， 2014， 35（4）：469-472.

[8] 何永文， 方朝辉， 廖志琼，等. Foxp3在子痫前期患者胎盘的表达变化. 解剖学研究， 2012， 34（3）：199-201.

[9] 陈永权， 许卫， 伍金雷，等. Foxp3基因多态性与原发性高血压的相关性. 实用医学杂志， 2015， 31（22）：3723-3726.

[10] Chen X， Gan T， Liao Z， et al. Foxp3 （-/ATT） Polymorphism Contributes to the Susceptibility of Preeclampsia. Plos One， 2013， 8（4）：e59696.

[收稿日期：2017-09-18]endprint