黑果枸杞与枸杞子水提取液抗氧化活性比较研究

*

1.广东省中山市石岐苏华赞医院药剂科，广东 中山 528400；2.广东药科大学药学院，广东 广州 510006

黑果枸杞与枸杞子水提取液抗氧化活性比较研究

曾秀兰1施帆2郑琪2张晓蕾2黎芷晖2陈欣彤2王治平2*

1.广东省中山市石岐苏华赞医院药剂科，广东 中山 528400；2.广东药科大学药学院，广东 广州 510006

目的对黑果枸杞和枸杞子水提取液的清除自由基抗氧化活性进行比较研究。方法采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除法、总抗氧化能力测试法(铁离子还原法)及亚铁离子螯合法测定黑果枸杞和枸杞子水提取液的抗氧化能力。结果黑果枸杞清除DPPH自由基、亚铁离子螯合能力IC50值分别为0.4194 mg/mL、104.46 mg/mL(枸杞子分别为2.6969mg/mL、276.02 mg/mL，浓度为1.96 mg/mL黑果枸杞水提液总抗氧化能力相当于11.14 μg/mL维生素C(同浓度枸杞子水提液为4.51 μg/mL)。结论黑果枸杞水提液清除自由基抗氧化活性强于枸杞子水提取液，二者均具有明显的体外清除自由基抗氧化活性及开发天然抗氧化剂的潜力。

黑果枸杞；枸杞子；抗氧化；对比研究

黑果枸杞为茄科植物黑果枸杞LyciumruthenicumMurr.的干燥成熟果实，为药食兼用的植物，含多糖、黄酮、色素、甜菜碱、微量元素等成分[1]，具有抗氧化[1-5]、抗动脉粥样硬化[6]、抗肝损伤[7]等作用。枸杞子为茄科植物宁夏枸杞LyciumbarbarumL.的干燥成熟果实，具有滋补肝肾，益精明目之功[8]，与黑枸杞类似，含有多糖、黄酮等成分，具有抗氧化[9-11]、抗结肠炎[12]、无健康风险[13]、改善糖尿病大鼠β细胞功能[14]、抗应激[15]、降血脂[16]等活性。黑枸杞与枸杞子名称仅一字之差，其所含成分类似，唯其颜色一黑一红，李兆君等[2]比较了二者的黄酮含量及抗DPPH自由基活性，发现略有差别。由于市场对黑枸杞的热炒及消费者的盲从，致其价格上涨，资源面临枯竭。迄今为止，未见对二者水提取液抗氧化活性进行比较研究的文献报道。本文采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除法、铁离子还原法(普鲁士蓝法)、亚铁离子螯合法，进行黑枸杞和枸杞子水提液的抗氧化能力比较研究，以期为资源发掘及天然抗氧化剂开发提供实验依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 紫外可见分光光度计(岛津，MODEL：UV-2600 220V CH，SERIAL NO：A11665030141CS)，超声波清洗器(2510型)，电子天平(BS201S型，d=0.01 mg，Sartourius公司)，超纯水器(Millipore公司)。

1.2 试药 1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH，货号：S30629-1g)、菲洛嗪(货号：S30675-1g)、三氯化铁(无水，货号：S24122-500g)、硫酸亚铁(七水合物，货号：S50639-500g)、铁氰化钾(货号：S24282-500g)等购于上海源叶生物科技有限公司；维生素C对照品(批号：100425-201504，广东省药品检验所)；黑果枸杞(青海，批号：160901)及枸杞子(宁夏中宁，批号：1608009)购于广州美佳康药店心谊路店。

2 方法

2.1 供试溶液的制备

2.1.1 维生素C对照溶液 精密称取维生素C适量，用水制成每1 mL含1 mg维生素C的对照溶液，即得。

2.1.2 黑果枸杞及枸杞子水提液供试液 精密称取黑果枸杞和枸杞子粗末约100 mg，置具塞瓶中，加水20 mL，超声处理(水浴温度60℃)45 min，过滤，即得。

2.2 清除DPPH自由活性测定[11]

2.2.1 DPPH工作液的配制 精密称取DPPH 约5 mg，置100 mL量瓶中，加入70%乙醇溶液，超声处理使溶解，摇匀，即得储备液。取上述储备液用70%乙醇适当稀释，即得DPPH工作液。

2.2.2 DPPH自由基清除活性测定 精密吸取“2.1”制备的水提液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL，分别置10 mL具塞试管中，加入DPPH工作液2 mL，分别补加70%乙醇至4 mL，摇匀，密闭避光放置30 min，于517 nm波长处测定吸光度，每份样品平行操作6次。按下式计算DPPH自由基清除率。

DPPH自由基清除率(%)=[1-(As-Ai)/Ac]×100%

式中：As=样品溶液加入DPPH工作液的吸光度值，Ai=样品溶液未加DPPH工作液的吸光度值，Ac=未加样品溶液的DPPH工作液的吸光度值。

时代的发展与社会的进步日新月异，然而在田野乡间，妇女们仍然传承并发展着绣花鞋垫这种古老的民间手工艺。传统绣花鞋垫不仅走出乡间，成为民俗民艺展销会上的亮点，而且也成为乡亲们创收致富的一种文化产业。当前，如何保持其实用性与观赏性，延续其民俗文化心态的稳定特征，是土家族绣花鞋垫得以传承与良性发展的关键所在。

2.3 普鲁士蓝法测定抗氧化能力[17-18]

2.3.1 维生素C标准曲线的绘制 精密吸取“2.1”制备的维生素C对照品溶液20、40、60、80、100 μL，分别置5 mL量瓶中，加入1%铁氰化钾溶液1.25 mL，摇匀，水浴(50℃)加热20 min，取出，依次加入10%三氯乙酸1.25 mL、0.1%三氯化铁溶液0.5 mL，加水至刻度，摇匀，于700 nm 波长处测定吸光度，以浓度为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线(图1)，得回归方程：A=0.0149C+0.31，相关系数为0.9991。

2.3.2 总抗氧化能力测定 精密吸取“2.1”制备的水提液0.5 mL，分别置5 mL量瓶中，同维生素C标准曲线的绘制方法操作，每份样品平行操作6次。

2.4 亚铁离子螯合能力测定[17-18]精密吸取“2.1”制备的水提液0.1、0.25、0.5、0.75、1 mL，分别置10 mL具塞试管中，依次加入0.6 mmol/L硫酸亚铁(FeSO4)0.1 mL，5 mmol/L菲洛嗪0.1 mL，加水至3 mL，摇匀，室温放置10 min，以水作为空白对照，于562 nm波长处测定吸光度，每份样品平行操作6次。按下式计算亚铁离子螯合率。

亚铁离子螯合率(%)=(1-A1)/A0 ×100%

式中：A1=样品溶液的吸光度值，A0=空白对照溶液的吸光度值。

3 结果

3.1 DPPH自由清除能力的比较 采用体外DPPH自由基清除法，测试结果以Excel 2007计算IC50值，黑果枸杞和枸杞子水提液的IC50值分别为0.4194 mg/mL及2.6969 mg/mL，表明黑果枸杞水提液清除DPPH自由基活性更强(6.5倍)。见表1。

3.2 总抗氧化能力的比较 采用铁离子还原法(普鲁士蓝法)测试总抗氧化能力，以回归方程计算得出相当于维生素C的量，结果显示，1.96 mg/mL黑果枸杞水提液相当于11.14 μg/mL维生素C(同浓度枸杞子水提液为4.51 μg/mL)的2.5倍(见表1)，相当于维生素C的量越大则抗氧化活性越强，说明黑果枸杞水提液抗氧化活性强于枸杞子水提液。

3.3 亚铁离子螯合能力的比较 采用亚铁离子菲洛嗪螯合法，测试结果以浓度对应螯合率表示，以Excel 2007计算IC50值，结果显示，黑果枸杞水提液及枸杞子水提液的IC50值分别为104.46 mg/mL及276.02 mg/mL(2.6倍)。结果见表1。

样品DPPH自由基清除率IC50mg/mL总抗氧化能力/μg/mL亚铁离子螯合能力IC50/mg/mL黑果枸杞0.4194±0.0073*11.14±0.719*104.46±4.176*枸杞子2.6969±0.20444.51±0.466276.02±8.013

注：与枸杞子比较，*P<0.05。

4 讨论

黑果枸杞即黑枸杞，蒙名为“乔诺英-哈尔马格”、藏药名“旁玛”。《四部医典》、《晶珠本草》等藏药经典著作记载治疗心热病、心脏病、月经不调、停经等，药效明显。民间作滋补强壮，降压用药。我国甘肃酒泉、青海西部、新疆、内蒙古西部和西藏等地有零星分布[1]。枸杞子为我国传统民贵中药材，同时又是国家卫生部公布的药食同源品种之一，在我国已有2000多年的使用历史。

DPPH是一种以氮为中心的稳定的自由基，加入抗氧化剂时DPPH 的单电子被配对，溶液颜色与配对电子数呈剂量相关性。总抗氧化能力测试时的铁离子还原能力与普鲁士蓝生成量成正比[17]。研究表明，黑果枸杞水提液清除DPPH自由基的能力、总抗氧化能力及亚铁离子螯合能力均强于枸杞子水提液，有统计学意义(P<0.05)。由于抗氧化保健市场需求不断增加，有必要对其清除自由基抗氧化活性及其功效物质基础进行深入细致的研究。

[1]甘青梅，左振常，昌也平，等.藏药“旁玛”的考证及生药学研究[J].中国民族民间医药，1995，4(1)：31-33.

[2]李兆君，丁润梅.宁夏枸杞与黑果枸杞总黄酮含量及抗自由基活性的比较研究[J].食品研究与开发，2014(24)：39-41.

[3]伍玉辉，罗俊.黑果枸杞色素药理作用研究进展[J].中国民族民间医药，2015，24(7)：20-22.

[4]J Zheng, CX Ding, LS Wang, et al. Anthocyanins composition and antioxidant activity of wildLyciumruthenicumMurr.from Qinghai-Tibet Plateau [J]. Food Chem，2011(126)：859-865.

[5]T Wu，HY Lv，FZ Wang，et al.Characterization of Polyphenols fromLyciumruthenicumFruit by UPLC-Q-TOF/MS E and Their Antioxidant Activity in Caco-2 Cells[J].J Agric Food Chem,2016，64(11)：2280.

[6]林丽，李进，吕海英，等.黑果枸杞花色苷对小鼠动脉粥样硬化的影响[J].中国中药杂志，2012，37(10)：1460-1466.

[7]王超，蒋宝平，龙军，等.黑果枸杞对急性酒精性肝损伤的保护及其抗氧化作用的影响[J].中药新药与临床药理，2015，26(2)：192-196.

[8]国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[S]．北京：中国医药科技出版社，2015.

[9]楚笑辉，王伽伯，周灿平，等.不同商品等级枸杞子的抗氧化活性比较及其生物效价检测[J].中国新药杂志，2011，20(7)：599-603.

[10]李洋，马文平，倪志婧. 宁夏枸杞体外抗氧化机理研究[J].食品科学，2014，35(1)：79-84.

[11]CC Wang，SC Chang，BS Inbaraj，et al.Isolation of carotenoids, flavonoids and polysaccharides fromLyciumbarbarumL.and evaluation of antioxidant activity[J].Food Chem，2010，120(1)：184-192.

[12]张东涛，白耘，马宁，等.宁夏枸杞粗提物抗大鼠溃疡性结肠炎的作用[J]. 时珍国医国药，2016(9)：2087-2089.

[13]彭启志.枸杞中5种微量元素的检测及其健康风险评价[J].中国医药科学，2014，4(9)：121-123.

[14]刘峰，黄国栋，朱凌燕，等.枸杞多糖对2型糖尿病大鼠胰腺β细胞PDX-1基因表达的实验研究[J].中国医药科学，2013,3(1):34-36.

[15]程鹏，何先元，明拂晓，等.常用补虚药水煎液对小鼠抗应激作用的比较研究[J].中国医药科学，2013，3(17):36.

[16]赵春苗，李亮亮.枸杞水煎液对急慢性高血脂模型的影响[J].中国医药科学，2016，6(15)：27-30.

[17]I Kilic，Y Yesiloglu，Y Bayrak.Spectroscopic studies on the antioxidant activity of ellagic acid[J].Spectrochimica Acta Part A，2014，130(17)：447-452.

[18]阚永军，赵立，杨彬君，等.野生和林下种植金线莲的体外抗氧化活性研究[J].中国民族民间医药，2017，26(6)：15-17.

ComparativeStudytheAntioxidantActivityofWaterExtractbetweenLyciumruthenicumFruitsandLyciiFructus

ZENG Xiulan1SHI Fan2ZHENG Qi2ZHANG Xiaolei2WANG Zhiping2*

1.Zhongshan Shiqi Suhuazan Hospital, Zhongshan 428400, China; 2.School of Pharmacology, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006,China

ObjectiveTo compare antioxidant activity of water extract betweenLyciumruthenicumMurr.Fruits and Lycii FructusMethodsThe antioxidant capacity of water extract ofLyciumruthenicumMurr.Fruits and Lycii Fructus was evaluated by DPPH free radical, and total antioxidant capacity test(ferric reducing ability),ferrous ion chelating ability.ResultsThe IC50valueofLyciumruthenicumMurr.Fruits with DPPH free radical scavenging capacity and ferrous ion chelating abilitywas0.4194 mg·mL-1and 104.46 mg·mL-1,respectively(Lycii Fructus 2.6969 mg·mL-1,276.02 mg·mL-1,respectively).The total antioxidant capacity(ferric reducing power)of 1.96 mg·mL-1LyciumruthenicumMurr.Fruits equal to 11.14 μg· mL-1vitamin C(the same concentration of Lycii Fructus was 4.51 μg·mL-1).ConclusionThe results suggest thatLyciumruthenicumfruits and Lycii Fructus fruit show remarkably high antioxidant activity in vitro and are natural antioxidant development potential.

Lyciumruthenicumfruits；Lycii Fructus；Antioxidant；Comparitive

中山市科技计划项目(2015B1282)，广东省创新强校-省级大学生创新创业训练计划项目(51340169)。

曾秀兰(1978-)，女，汉族，副主任药师，研究方向为中药制剂及药理学研究。E-mail: 1485491840@qq.com

王治平(1965-)，男，汉族，博士研究生，研究方向为中药药效物质、新剂型及质量控制研究。E-mail:wzping_jshb@126.com

R285.5

A

1007-8517(2017)22-0021-03

2017-10-16 编辑：梁志庆)