淋巴结穿刺细胞学检查联合HMGB1、Tg检测对甲状腺乳头状癌淋巴结转移的诊断价值

邓彦东，马晓雯，刘文聪，邵云，闫国超

(河北医科大学第一医院，石家庄050031)

淋巴结穿刺细胞学检查联合HMGB1、Tg检测对甲状腺乳头状癌淋巴结转移的诊断价值

邓彦东，马晓雯，刘文聪，邵云，闫国超

(河北医科大学第一医院，石家庄050031)

目的探讨超声引导下淋巴结细针穿刺细胞学检查联合高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、甲状腺球蛋白(Tg)检测对甲状腺乳头状癌患者术后淋巴结转移的诊断价值。方法选取行甲状腺乳头状癌根治术治疗后因颈部淋巴结肿大再次入院患者75例，均进行二次手术切除肿大淋巴结，术后病理显示淋巴结转移67例。患者均于二次手术前行超声引导下淋巴结细针穿刺细胞学检查，并采用ELISA法检测穿刺淋巴结组织HMGB1、Tg表达。以术后组织病理学诊断为金标准，采用受试者工作特征(ROC)曲线分析超声引导下淋巴结细针穿刺细胞学检查联合淋巴结组织HMGB1、Tg检测对甲状腺乳头状癌术后颈部淋巴结转移的诊断效能。结果淋巴结细针穿刺细胞学检查诊断淋巴结转移55例，漏诊12例；诊断淋巴结转移的特异性为100%，敏感性为82.1%(55/67)。淋巴结转移者淋巴结组织HMGB1、Tg表达均高于未转移者(P均<0.01)。淋巴结细针穿刺细胞学检查联合HMGB1、Tg表达检测诊断淋巴结转移的敏感性为97.0%、准确率为96.0%，均高于各项单项检测；诊断特异性为87.5%，低于淋巴结细针穿刺细胞学检查的100%。结论超声引导下淋巴结细针穿刺细胞学检查联合HMGB1、Tg检测可提高对甲状腺乳头状癌术后淋巴结转移的诊断敏感性及准确性。

甲状腺乳头状癌；淋巴结转移；细针穿刺细胞学检查；超声；高迁移率族蛋白B1；甲状腺球蛋白

近年来甲状腺癌发病率逐年上升，其中甲状腺乳头状癌约占80%[1]。根治性手术是目前临床治疗甲状腺乳头状癌的主要方法，多数患者预后良好；但仍有部分患者术后出现复发或淋巴结转移，预后差。超声引导下细针穿刺细胞学检查是诊断淋巴结是否转移的最常用方法，诊断特异性高，但敏感性不足。恶性肿瘤发生、发展涉及多种基因的协同作用，且基因改变可能出现在细胞学改变之前[2,3]，因此寻找一种可行性高的术前筛查淋巴结转移的方法至关重要。高迁移率族蛋白B1(HMGB1)和甲状腺球蛋白(Tg)均为甲状腺癌的标志物[4,5]。本研究探讨超声引导下淋巴结细针穿刺细胞学检查联合HMGB1、Tg检测对甲状腺乳头状癌术后淋巴结转移的诊断价值。

1 临床资料

选取海南省人民医院2012年6月～2013年12月行甲状腺乳头状癌根治术治疗，术后(2014年9月～2016年12月)因颈部淋巴结肿大再次入院的75例患者为研究对象，其中男33例、女42例，年龄19～63(45.3±9.4)岁。纳入标准：①采用根治性手术切除肿瘤组织，术后病理证实为甲状腺乳头状癌；②根据《2012中国甲状腺结节和分化型甲状腺癌指南》推荐的甲状腺癌术后复发危险度分层为高危型；③患者自愿签署知情同意书；④具有完整的长期随访资料，随访时间≥2年。排除标准：①肝、肾功能障碍；②妊娠期或哺乳期；③凝血功能异常；④免疫或代谢系统疾病。患者入院后均行二次手术，将二次手术切除的颈部肿大淋巴结标本置于4%多聚甲醛中固定过夜，经梯度乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包埋等常规流程制备厚度为5～7 μm组织切片，二甲苯脱蜡、梯度乙醇脱苯和水化，HE染色，中性树胶封片，显微镜下观察。结果显示，淋巴结转移67例(含多区域转移)，包括Ⅵ区35例(52.2%)、Ⅱ区22例(32.8%)、Ⅲ区13例(19.4%)、Ⅳ区9例(13.4%)。

2 方法与结果

2.1 超声引导下淋巴结细针穿刺细胞学检查 患者均于二次手术前行超声引导下细胞学检查。采用日本TSK株式会社20 G一次性介入穿刺针，取仰卧位，肩部垫高，先行彩色多普勒超声(日本东芝，790A)扫描确定穿刺点，以病理变化较明显且避开大血管和重要神经的位置为穿刺点。穿刺点常规碘伏消毒，75.0%乙醇脱碘，1%利多卡因局部浸润麻醉；进针直达淋巴结中心，负压抽吸数次，吸出标本，推至载玻片上，立即涂片，均匀推开，自然晾干，95%乙醇固定2 h以上；HE染色，显微镜下观察，将出现核沟、核内假包涵体、毛玻璃样核、多核巨细胞及砂砾体等细胞为阳性细胞。结果显示，出现阳性细胞即淋巴结转移55例，均与术后组织病理学(金标准)诊断一致；漏诊12例；诊断淋巴结转移的特异性为100%，敏感性为82.1%(55/67)。12例漏诊患者中3例因抽吸样本为液化组织，未能获得细胞学结果；其余9例均在完成细胞学诊断的前提下漏诊。

2.2 淋巴结组织HMGB1、Tg表达检测 将2.1中细针穿刺所得组织标本与生理盐水(1∶9)混匀，以电动匀浆器充分匀浆，4 000 r/min离心10 min，取上清液，采用全自动生化分析仪(AU5800，德国贝克曼)以ELISA法(试剂盒购自上海恒远生物科技有限公司)检测HMGB1、Tg表达。采用SPSS20.0统计软件，淋巴结转移与非转移者HMGB-1、Tg表达比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。结果显示，淋巴结转移者淋巴结组织HMGB1、Tg表达分别为(16.35±3.12)、(1.15±0.52)ng/mL，淋巴结未转移者分别为(12.26±2.85)、(0.84±0.41)ng/mL，两者比较P均<0.01。

2.3 超声引导下淋巴结细针穿刺细胞学检查联合淋巴结HMGB1、Tg表达检测对甲状腺乳头状癌术后颈部淋巴结转移的诊断效能 采用受试者工作特征(ROC)曲线分析超声引导下淋巴结细针穿刺细胞学检查联合淋巴结HMGB1、Tg表达检测对甲状腺乳头状癌术后颈部淋巴结转移的诊断效能。结果显示，HMGB1诊断甲状腺乳头状癌术后颈部淋巴结转移的最佳截断值为13.52 ng/mL(≥13.52 ng/mL为阳性，<13.52 ng/mL为阴性)，Tg诊断甲状腺乳头状癌术后颈部淋巴结转移的最佳截断值为1.06 ng/mL(≥1.06 ng/mL为阳性，<1.06 ng/mL为阴性)。淋巴结细针穿刺细胞学检查联合HMGB1、Tg表达检测诊断淋巴结转移的敏感性为97.0%、准确率为96.0%，均高于各项单项检测；诊断特异性为87.5%，低于淋巴结细针穿刺细胞学检查的100%。见表1、2。

表1 淋巴结HMGB1、Tg检查结果与病理结果(例)

表2 淋巴结细针穿刺细胞学检查及HMGB1、Tg表达检测对甲状腺乳头状癌淋巴结转移的诊断效能(%)

3 讨论

甲状腺乳头状癌是甲状腺癌中最常见的病理类型，恶性程度低，但淋巴结转移率高(30%～80%)。术后复发和颈部淋巴结转移是导致甲状腺癌患者死亡的主要原因[6]。既往研究多集中于甲状腺乳头状癌的术前淋巴结转移率及转移模式，而对于术后转移研究较少。

目前，确定淋巴结转移的金标准仍然是病理学诊断，但该结果只能在再次手术后获得，不适合术前筛查。术前筛查淋巴结转移的方法主要有正电子发射型计算机断层扫描、CT、MRI、超声、细针穿刺细胞学检查等。其中，正电子发射型计算机断层扫描诊断敏感性和特异性均较高，但费用昂贵，不易普及[7]；CT、MRI检查对大体积淋巴结的诊断敏感性较高，对于直径<1 cm者难以定性；彩色多普勒超声具有操作简单、安全无创、经济实用等优点，是颈部淋巴结转移常用检查工具之一，尤其适用于临床筛查，但其诊断敏感性和特异性均不理想[8]；细针穿刺细胞学检查因取样范围及取样量有限，容易发生漏诊[9]。Tg是甲状腺肿瘤的经典标记物，主要由甲状腺滤泡上皮分泌，存在于甲状腺组织，只有少量进入血液循环，在甲状腺炎症、甲状腺结节、甲状腺癌和转移淋巴结中其表达均显著升高[10，11]。血清Tg水平受多种因素影响，促甲状腺素可促进Tg分泌，INF-γ、TNF-α和维甲酸可抑制Tg分泌。甲状腺乳头状癌患者经手术、淋巴结清扫和131I治疗后，其细胞和组织中Tg应处于极低水平，对于术后Tg仍较高者，应考虑复发或淋巴结转移的可能性[12]。既往研究显示，单纯检测Tg诊断甲状腺乳头状癌术后复发的敏感性为55%～80%[13]。高迁移率族蛋白(HMG)在高等动物的基因复制、重组、转录等方面均发挥重要调控作用，根据分子量和分子结构可分为A、B、N三个家族，其中HMGB1在B家族含量最为丰富，是一个高度保守的序列，在哺乳动物中其基因序列具有高度同源性[14]。细胞外的HMGB1与受体结合后可刺激细胞增殖、分化、迁移，并诱发炎性反应，与肿瘤的发生、发展及炎性浸润密切相关。当细胞发生坏死和损伤后，HMGB1由细胞内释放入血，其组织表达升高；当发生肿瘤时，局部组织可释放大量HMGB1，造成慢性炎症，同时破坏健康细胞，促进肿瘤细胞向周围组织浸润与迁移。有研究报道，甲状腺乳头状癌患者HMGB1表达高于健康人群，且颈部淋巴结转移者HMGB1表达高于非转移者[15]。

本研究经术后病理证实发生淋巴结转移67例(含多区域转移者)，以Ⅵ区最为常见，无Ⅰ区转移者，与其他报道[11]基本相似。术前淋巴结细针穿刺细胞学检查诊断淋巴结转移55例，12例漏诊，诊断淋巴结转移的特异性为100%，敏感性为82.1%；12例漏诊者中3例因抽吸样本为液化组织，无法判断细胞结构，其余9例漏诊原因可能为细针穿刺取样范围局限，未获得完整细胞，或该区域细胞尚未出现典型的恶性形态特征[11,12]。

分析本研究结果，超声引导下淋巴结细针穿刺细胞学检查联合HMGB1、Tg检测诊断诊断甲状腺乳头状癌术后淋巴结转移的敏感性和准确率均高于各项单项检测；诊断特异性为87.5%，低于淋巴结细针穿刺细胞学检查的100%。

综上所述，超声引导下淋巴结细针穿刺细胞学检查联合HMGB1、Tg检测可提高甲状腺乳头状癌术后淋巴结转移的诊断敏感性及准确性。

[1] Yu XM, Schneider DF, Leverson G, et al. Follicular variant of papillary thyroid carcinoma is a unique clinical entity: a population-based study of 10,740 cases[J]. Thyroid, 2013,23(10):1263-1268.

[2] Haugen BR, Alexander EK, Bible KC, et al. 2015 American thyroid association management guidelines for adult patients with thyroid nodules and differentiated thyroid cancer: the American thyroid association guidelines task force on thyroid nodules and differentiated thyroid cancer[J]. Thyroid, 2016,26(1):1-133.

[3] 孙勤暖,李冬梅,吴罡,等.甲状腺乳头状癌患者组织、癌组织中p53、Fas、TNF-α和Cyclin E的表达及临床意义[J].中国免疫学杂志,2014,30(10):1383-1387.

[4] 寿金朵,蒋贤锋,朱江,等.术前超声引导淋巴结细针穿刺检查联合洗脱液甲状腺球蛋白测定对诊断甲状腺乳头状癌侧颈部淋巴结转移的价值[J].中华普通外科杂志,2016,31(12):989-992.

[5] 苏岩.超声联合组织高迁移率蛋白-1诊断老年甲状腺乳头状癌患者颈部淋巴结转移的价值[J].中国老年学杂志,2016,36(21):5344-5346.

[6] 邢兰兰,陈松,李亚明.乳头状甲状腺癌术后复发的相关因素分析[J].同位素,2014,27(1):22-27.

[7] 董占飞,赵志伟,赵艳萍,等. ～(99m)TcN-NOET显像SPECT/CT检查在分化型甲状腺癌术后颈部淋巴结转移判断中的应用[J].山东医药,2016,56(7):80-81.

[8] 潘莉莉,潘哲,李云川.超声诊断甲状腺乳头状癌根治术后复发[J].中国老年学杂志,2012,32(23):5301-5302.

[9] 方庆全,涂金花,肖方森,等.细针穿刺制作细胞块结合分子标志物诊断甲状腺结节的价值[J].中华内分泌代谢杂志,2015,31(11):932-936.

[10] 孙亚楠,刘晓虹,毛晓韵,等.甲状腺乳头状癌组织Bag-1、Bcl-2蛋白表达变化及意义[J].山东医药,2015,55(31):11-13.

[11] Spencer C, LoPresti J, Fatemi S. How sensitive (second-generation) thyroglobulin measurement is changing paradigms for monitoring patients with differentiated thyroid cancer, in the absence or presence of thyroglobulin autoantibodies[J]. Curr Opin Endocrinol Diabetes Obes, 2014,21(5):394-404.

[12] 岳宁,赵伟,霍宗伟,等.甲状腺癌患者～(131)Ⅰ全身显像相关参数与Tg相关性分析[J].中华肿瘤防治杂志,2015,22(20):1628-1633.

[13] 范志娜,吴刚,袁建军.超声联合组织Tg、SPECT/CT诊断分化型甲状腺癌术后颈部淋巴结转移[J].中国医学影像技术,2014,30(3):362-365.

[14] Xu YF, Ge FJ, Han B, et al. High-mobility group box 1 expression and lymph node metastasis in intrahepatic cholangiocarcinoma[J]. WJG, 2015,21(11):3256-3265.

[15] 李新宇,张超,杜春梅,等.甲状腺乳头状癌患者肿瘤组织中HMGB-1的表达及其临床意义[J].中国地方病防治杂志,2016,31(7):768-770.

邵云(E-mail: 13331369972@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.44.029

R736.1

B

1002-266X(2017)44-0089-03

2017-03-06)