降压片质量标准提高研究

吴军红，李启彬

(驻马店市食品药品检验所，河南 驻马店 463000)

降压片质量标准提高研究

吴军红*，李启彬

(驻马店市食品药品检验所，河南 驻马店 463000)

目的建立降压片的质量控制方法。方法采用薄层色谱法对降压片中决明子、山楂进行定性鉴别；HPLC法测定黄芩中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素含量，色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱温为30 ℃；流动相为甲醇(A)-0.2%磷酸溶液(B)，梯度洗脱；流速为1.0 mL·min-1；检测波长为278 nm。结果TLC斑点清晰、分离度好，阴性无干扰；黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素分别在0.118 0～2.360 0 μg(r=0.999 9)、0.046 6～0.932 0 μg(r=0.999 8)、0.048 7～0.974 0 μg(r=0.999 9)、0.039 7～0.794 0 μg(r=0.999 9)与峰面积呈良好的线性关系；平均回收率分别为98.58%(RSD为1.14%，n=6)、98.48%(RSD为0.83%，n=6)、98.99%(RSD为0.77%，n=6)、99.28%(RSD为0.78%，n=6)。结论本方法简便、准确，能有效控制降压片的质量。

降压片；薄层色谱法；决明子；山楂；黄芩；黄酮类；高效液相色谱法

降压片收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第四册[1]，系由黄芩、决明子、山楂、槲寄生、臭梧桐叶、桑白皮、地龙七味传统中药组成的复方制剂。主要用于降血压。处方中黄芩、决明子、山楂均具有很好的保肝、降血脂、降血压作用[2-5]，原标准只有黄芩的薄层鉴别，不能有效控制药品质量，作为常用处方药，处方有效成分高低直接影响治疗效果，作者根据处方成分药理作用、临床疗效及剂型特点，增加了主要药味决明子、山楂的薄层色谱鉴别及君药黄芩中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素含量测定方法，补充和完善了现行质量标准。实验表明，所增加的检验方法斑点清晰、重复性好，能更好地控制药品质量。

1 仪器与试药

安捷伦1260型高效液相色谱仪(安捷伦科技有限公司)；硅胶G预制薄层板(青岛海洋化工有限公司，批号：20150727)；超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司，功率：250 W，频率：40 kHz)；电子天平(德国赛多利斯公司，BP211D，十万分之一)；决明子对照药材(中国食品药品检定研究院，批号：121011-200604)；山楂对照药材(中国食品药品检定研究院，批号：121626-201001)；黄芩苷对照品(中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号：110715-201318，含量以93.3%计)；汉黄芩苷对照品(中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号：112002-201501，含量以98.8%计)；黄芩素对照品(中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号：111595-201306，含量以97.8%计)；汉黄芩素对照品(中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号：111514-200403)；降压片(成都地奥集团天府药业股份有限公司，批号分别为150505、150601、150705)；阴性样品按处方工艺自制；甲醇为色谱纯；水为纯化水；其他试剂均为分析纯。

2 定性鉴别

2.1 决明子的TLC鉴别

取本品5片，研细，称取2.5 g，加乙醇50 mL，加热回流50 min[6]滤过，回收溶剂至干，残渣加水10 mL使溶解，再加盐酸1 mL，置水浴加热30 min，用乙醚提取2次，每次20 mL，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。再取除去决明子按降压片制备工艺制备的阴性样品2.5 g，同法制成阴性样品溶液。另取决明子对照药材1.5 g，加水煎煮1.5 h，滤过，滤液回收溶剂至干，残渣加乙醇15 mL使溶解，同法制成对照药材溶液，照TLC法试验，吸取上述3种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60 ℃)-丙酮(8∶4)为展开剂，展开，取出，晾干，置有浓氨的展开缸内约2 min。供试色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰，见图1。

注：1～3.供试品溶液；4.阴性样品；5.对照药材。图1 决明子的TLC鉴别

2.2 山楂的TLC鉴别

取本品6片，研细，称取3.0 g，加2%盐酸乙醇溶液15 mL，浸渍30 min，时时振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1 mL使溶解，取上清液作为供试品溶液。再取除去山楂按降压片制备工艺制备的阴性样品3.0 g，同法制成阴性样品溶液。另取山楂对照药材2 g，加水100 mL，煎煮60 min，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2 mL，离心，取上清液，浓缩至1 mL，作为对照药材溶液，照TLC法试验，吸取上述3种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙醚-三氯甲烷-甲酸(10∶10∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液(1→10)，在80 ℃加热至斑点显色清晰。供试色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰，见图2。

注：1～3.供试品溶液；4.阴性样品；5.对照药材。图2 山楂的TLC鉴别

3 含量测定

3.1 色谱条件

Agilent Eclipse SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱温30 ℃；流动相甲醇(A)-0.2%磷酸溶液(B)，按梯度洗脱(0～16 min，47%A；16～40 min，47%～75%A)；检测波长278 nm；流速1.0 mL·min-1[9-11]。

3.2 溶液的制备

3.2.1 对照品溶液制备 精密称取黄芩苷对照品29.50 mg、汉黄芩苷对照品11.65 mg、黄芩素对照品12.18 mg、汉黄芩素对照品9.93 mg，同置250 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1 mL中含黄芩苷0.118 0 mg、含汉黄芩苷0.046 6 mg、含黄芩素0.048 7 mg、含汉黄芩素0.039 7 mg)。

3.2.2 供试品溶液制备 取本品20片，称重，研细，取约0.8 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加稀乙醇50 mL，加热回流3 h，放冷至室温，滤过，精密量取续滤液25 mL，置50 mL量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，再精密量取15 mL，置20 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

3.2.3 阴性样品溶液制备 精密称取处方中除去黄芩，将其余药味按降压片制备工艺制备的阴性样品0.8 g，按3.2.2项下方法制备阴性样品溶液。

3.3 系统适用性试验

按照3.1色谱条件，吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液，自动进样10 μL，记录色谱图，结果显示，理论塔板数按黄芩苷峰计大于5000，分离度大于1.5，阴性无干扰。见图3。

注：A.对照品；B.样品；C.阴性样品；1.黄芩苷；2.汉黄芩苷；3.黄芩素；4.汉黄芩素。图3 降压片高效液相色谱

3.4 线性关系考察

精密吸取对照品溶液1.0、2.0、5.0、10.0、20.0 μL，按照3.1色谱条件自动进样，测定峰面积。以峰面积为纵坐标，进样量(μg)为横坐标，进行回归处理，得回归方程，结果见表1。

表1 线性关系

3.5 精密度试验

精密吸取上述对照品溶液5 μL，连续进样6次，记录峰面积。结果黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素对应的峰面积RSD分别为0.21%、0.36%、0.29%、0.42%，表明本方法精密度良好。

3.6 重复性试验

取降压片样品(批号150505)6份，进行测定。结果每片样品中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素含量的平均值分别为9.51、1.58、1.26、0.76 mg，RSD分别为0.83%、1.03%、0.72%、0.54%，表明该方法重复性良好。

3.7 稳定性试验

精密吸取批号为150505降压片样品溶液，按照3.1色谱条件，分别于0、1、3、6、9、12、24 h进行测定。结果供试品中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的含量的RSD分别为1.2%、0.95%、0.79%、0.82%，表明降压片样品稳定性良好。

3.8 加样回收试验

取批号为150505的降压片样品(平均片重：0.502 3 mg)，平行取样6份，各约0.2 g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，再精密加入对照品溶液25 mL，按3.2.2项下方法制备，再按照3.1色谱条件进样测定，黄芩苷的加样回收率见表2。

3.9 样品测定

取降压片样品3批次(批号150505、150601、150705)，按3.2.2项下方法制备供试品溶液，进样测定，按外标法计算含量，结果见表3。

表2 加样回收试验结果(n=6)

表3 3批降压片样品含量测定(n=3) mg/片

4 讨论

4.1 薄层色谱法

通过文献查询，未见降压片中决明子、山楂的薄层鉴别，作者参考文献[6-8]，针对提取方法、展开剂配制、薄层板加热条件等，经过不断实验，制定了降压片决明子、山楂的薄层鉴别，该方法简单快速、展开效果好、斑点清晰、阴性无干扰，可作为本品决明子、山楂专属性鉴别。

4.2 高效液相色谱法

通过波长扫描发现，黄芩苷在279 nm处有最大吸收，汉黄芩素在278 nm处有最大吸收，黄芩素、汉黄芩苷在276 nm处有最大吸收，采用278 nm作为检测波长，样品中各成分灵敏度较高，重复性好，含量稳定。在流动相选择上曾以乙腈-0.2%磷酸溶液[12]、甲醇-0.2%磷酸溶液、甲醇-0.4%磷酸溶液不同比例进行实验，发现甲醇(A)-0.2%磷酸溶液(B)，按梯度洗脱(0～16 min，47%A；16～40 min，47%～75%A)出峰时间较为合适，分离度好，阴性无干扰，所以采用甲醇(A)-0.2%磷酸溶液(B)，按梯度洗脱(0～16 min，47%A；16～40 min，47%～75%A)。在提取方法上，比较了超声提取和加热回流2种提取方式，经过多次实验发现，回流提取效果明显高于超声结果，曾选取了50%甲醇、乙醇、稀乙醇为提取溶剂，发现稀乙醇明显高于前两者，因此采用稀乙醇加热回流3 min作为提取方法，以控制本品质量。此方法简单易行、重复性好、结果准确可靠。

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EnhancementofQualityStandardforJiangyaTablets

WUJunhong*，LIqibin

(ZhumadianInstituteforFoodandDrugControl，Zhumadian463000，China)

Objective：To establish a quality control method for Jiangya tablets.MethodsTLC was used to determine Cassiae Semen，Crataegi Fructus，and the content of baicalin，wogonoside，baicalein，wogonin was determined by HPLC.The Agilent ZORBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)column was used for the separation and，the temperature of column was 30 ℃ with methanol(solvent A)-0.2% phosphoric acid(solvent B)as mobile phase consisted.The flow rate was 1.0 mL·min-1，and the detection wavelength was 278 nm.ResultsThe spots of TLC were fairly clear with a good separation and without interference of the negative samples.Baicalin，wogonoside，baicalein and wogonin all showed good linearity at 0.118 0-2.360 0 μg，r=0.999 9，0.046 6-0.932 0 μg，r=0.999 8，0.048 7-0.974 0 μg，r=0.999 9，0.039 7-0.794 0 μg，r=0.999 9，respectively.The average recoveries were 98.58%(RSD=1.14%，n=6)；98.48%(RSD=0.83%，n=6)；98.99%(RSD=0.77%，n=6)；99.28%(RSD=0.78%，n=6)，respectively.ConclusionThe method is simple，accurate and can effectively control the quality of Jiangya tablets.

Jiangyatablets；TLC；Cassiae Semen；Crataegi Fructus；baicalin；flavonid；HPLC

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吴军红，主管药师，研究方向：中药检验及质量标准研究和制定；E-mail：48042557@qq.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.11.027

2017-01-12)