HPLC法测定金银岗梅颗粒中栀子苷的含量※

范文昌 梅全喜

实验研究

HPLC法测定金银岗梅颗粒中栀子苷的含量※

范文昌1梅全喜2

（1 广东食品药品职业学院中医保健学院，广州 510520；2 广州中医药大学附属中山医院科教科，广州 528401）

目的 建立测定金银岗梅颗粒中栀子苷含量的方法；方法 采用高效液相色谱（HPLC）法。色谱柱为YMC-Pack ODS-A(250×4.6 mm，5 μm)，流动相以水为流动相A，以乙腈为流动相B，检测波长：240 nm，流速为1.0 mL/min，进样量为10 μL。结果 栀子苷质量浓度线性范围在3.14～62.70 μg/mL（r=0.99999，n=6），平均加样回收率为102.73%，RSD为0.72%。结论 本方法结果准备、快速、简便、专属性好，重现性良好，可用于该制剂的质量控制。

HPLC；金银岗梅颗粒；栀子苷；中药化学

自拟方金银岗梅颗粒由栀子、金银花、岗梅根、一点红、火炭母、三丫苦、甘草等组成的中药新药，用于治疗急慢性咽炎、扁桃体炎等咽喉疾病。抗炎及镇痛作用研究表明，该配方对疼痛有一定的镇痛作用，对变质性炎症有抗炎作用[1]。该方中栀子为君药，具有泻火除烦、清热利湿、凉血解毒的功效，临床用于热病心烦，湿热黄疸，淋证涩痛，血热吐衄，目赤肿痛，火毒疮疡。栀子中含有黄酮类、三萜类、环烯醚萜类、苯丙素类等[2]，以栀子苷为主要有效成分。栀子苷已为多种制剂的含量测定指标，如舒肝宁注射液[3]。为了更好控制该颗粒的质量，本文采用高效液相色谱（HPLC） 法测定金银岗梅颗粒中的有效成分栀子苷含量。

1 仪器与样品

岛津 LC-20AT；岛津SPD-M20A全波长紫外检测器；Labsolutions数据处理软件系统；Waters 2695；Waters 2996全波长紫外检测器；Empower数据处理软件系统。对照品：栀子苷对照品（来源：中国药品生物制品鉴定所，批号：749-9202）。试剂：乙腈（HPLC Merck），水为制备纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱YMC-Pack ODS-A(250×4.6 mm，5 μm)，流动相以水为流动相A，以乙腈为流动相B，检测波长：240 nm，流速为1.0 mL/min，进样量为10 uL。

2.2 颗粒制备 金银花等七味药材，加水煎煮2次，每次10倍量2 h，过滤，合并滤液，75℃减压浓缩至相对密度1.10～1.15（30℃）稠膏；加入适量糖分、糊精（糖粉∶糊精=2∶1），制成颗粒45 g，即得。

2.3 供试品溶液制备 取本品适量，研细，取约0.2 g，精密称定为0.2018 g，置于50 mL具塞三角瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定重量，超声处理（功率250 W，频率59 kHz）15 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，精密量取续滤液3 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4 阴性样品溶液制备 取栀子阴性样品约0.2 g，精密称定为0.2330 g，样品处理过程参照供试品溶液。

2.5 栀子苷对照品溶液 取栀子苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶解稀释制成每1 mL含33.44 μg的溶液，即得。

2.6 对照品制备 取栀子苷对照品适量，精密称定，加甲醇稀释制成每1 mL含33.44 μg的溶液，即得。

2.7 专属性试验 精密吸取对照品、供试品、阴性对照品依法进样测定，记录色谱图。结果见图1～4。

图1 栀子苷对照品测定图谱

图2 阴性样品测定图谱

图3 金银岗梅颗粒供试品测定图谱

图4 自上至下依次为样品、对照品及阴性样品

结果可知，栀子苷的保留时间约为18.1 min，阴性样品中无杂质峰干扰，供试品中杂质峰与栀子苷的最小分离度R约为3.306，拖尾因子T为1.195，理论塔板数为13179，分离效果较好。

2.8 仪器精密度 取浓度为37.62 μg/mL栀子苷对照品溶液，按照色谱条件，连续进样6次，记录峰面积，结果见表1。

表1 仪器精密度测定结果

结论：栀子苷峰面积RSD为0.09%，说明仪器精密度符合要求。

2.9 线性关系考察 取栀子苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释，制成每1 mL含418 μg的对照品溶液，精密移取对照溶液6 mL，置于20 mL量瓶中，加甲醇稀释定容得对照品线性储备液。精密吸取线性储备液0.25 mL、1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL，分别置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释定容，得1～6号线性溶液。取线性溶液，按照上述色谱条件进样测定，记录峰面积，以对照品浓度X（μg/mL）为横坐标，峰面积Y为纵坐标，进行线性回归，绘制标准曲线，结果见表2、图5。

表2 栀子苷线性关系考察

图5 栀子苷标准曲线

结论：栀子苷的标准曲线为Y=15056X+2062.4，r=0.9999，表明栀子苷在3.14～62.70 μg/mL范围内线性关系良好。

2.10 重复性试验 取本品颗粒粉末6份，每份约0.2 g，精密称定，分别按照供试品溶液制备方法处理，依法进样测定，计算样品中栀子苷含量。结果见表3。

表3 样品重复性试验结果

结论：样品中栀子苷含量为0.96%，RSD为0.31%，本分析方法重复性良好。

2.11 稳定性试验 取室温条件下的同一供试品溶液，按照色谱条件，分别于0、2、4、6、8、12、18、24 h进样测定栀子苷面积，结果见表4。

表4 稳定性试验结果

结论：栀子苷面积均值为555155，RSD为0.42%，故在室温条件下，供试品溶液中栀子苷在24 h内稳定。

2.12 回收率试验 取已知含量的本品颗粒细粉6份，每份约0.1 g，精密称定，精密加入对照品溶液 (称取栀子苷对照品11 mg，精密称定为10.45 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得)2.5 mL，加入50%甲醇48 mL，按照供试品溶液制备方法处理，依法进样测定，记录峰面积，计算回收率，结果见表5。

表5 栀子苷回收率试验结果

结论：栀子苷平均回收率为102.73%，RSD为0.72%，本法有较好的回收率。

3 讨论

3.1 色谱条件选择 色谱柱：YMC-PackODS-A(250×4.6mm，5 μm)；流动相：以水为流动相A，以乙腈为流动相B。结果可知，栀子苷保留时间约为18.0 min，阴性样品无杂峰干扰，供试品溶液中与相邻杂质峰分离度为3.925，符合要求，拖尾因子为1.106，理论塔板数为13890，结果较好。该色谱条件适用于金银岗梅颗粒中栀子苷测定。

3.2 检测波长的选择 液相色谱仪，进行紫外光谱扫描，结果在240 nm波长处有最大吸收，因此本实验所用的色谱波长选择在240 nm处。

3.3 溶剂的选择 当溶剂为50%甲醇、30%甲醇、30%乙醇时，栀子苷提取效率最优，但从样品过滤及杂质含量角度考虑，最终确定50%甲醇作为提取溶剂。本实验建立的HPLC法测定金银岗梅颗粒中栀子苷的含量，该方法准备、快速、简便、专属性好，重现性良好，可用于该制剂的质量控制。

[1]]范文昌.复方金银岗梅合剂抗炎及镇痛作用研究[J].中国中医药现代远程教育，2015，13（1）:136-138.

[2]左月明，严欢，张忠立，等.栀子化学成分研究(Ⅵ)[J].中药材，2017，3(40):596-599.

[3]何峰，张昀，张艳萍.HPLC法测定栀子提取物中栀子苷的含量[J].贵州医药，2017，41(3):245-247.

Content Determination of Geniposide in Jinyin Gangmei Granules by HPLC

FAN Wenchang1,MEI Quanxi2
(1.College of Traditional Chinese Medicine Health,Guangdong Food and Drug Vocational College,Guangdong Province,Guangzhou 510520,China;2.Science and Education Department,Zhongshan Hospital Affiliated to Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangdong Province,Zhongshan 528401,China)

Objective To establish high performance liquid chromatography (HPLC)for determining the content of geniposide in Jinyin Gangmei granules.Methods The HPLC method was used.The chromatogram conditions were YMC-Pack ODS-A (250×4.6mm,5μm)column.The mobile phase A was water.The mobile phase B was acetonitrile.The detection wavelength was 240nm,flow rate was 1.0 ml/min,and the injection volume was 10ul.Results Geniposide concentration linear range was 3.14～62.70μg/ml(r=0.99999,n=6),and the average recovery was 102.73%with RSD of 0.72%.Conclusion The mothod is accurate,rapid,simple and specific,and has reproducibility.The method can be used for the quality control of the preparation.

HPLC;Jinyin Gangmei granules;geniposide;chemistry of Chinese materia medica

10.3969/j.issn.1672-2779.2017.21.064

1672-2779（2017）-21-0145-03

广东省中医药局项目【No.20151026】

2017-09-04）