正交实验法优选胃炎片一号的水提工艺*

李青松，严志强

江苏省昆山市中医医院(昆山 215300)

正交实验法优选胃炎片一号的水提工艺*

李青松，严志强

江苏省昆山市中医医院(昆山 215300)

目的：优选胃炎片一号的水提取工艺。方法：以浸膏得率和芍药苷含量进行综合加权所得评分为指标，采用 L18(37)正交设计试验，考察浸泡时间、加水量、提取时间、提取次数、浸泡温度等因素的影响，优选胃炎片一号的水提取工艺。结果：最佳水提工艺为饮片浸泡 0.5 h，加 12倍量水回流提取2次，每次1.5 h。结论： 优选的水提取工艺稳定可行，为胃炎片一号的工业生产提供了依据。

胃炎片一号方为我院经验方，其组成是由白芍，香附，延胡索，青皮，土木香，柴胡等10余味中药。临床用于肝胃不和所致功能性消化不良引起的胃脘痛疗效显著。由于其制剂工艺开发较早，可能未最大程度提取制剂中有效成分，对于疗效有所影响。现结合药味性质和临床需要，对其提取方式进行科学优化，采用水蒸汽蒸馏法提取方中挥发油成分后[1]，将药渣并入余药进行共水提。由于方中以白芍为君，且其缓中止痛效果明显[2-4]，故本实验以其主要有效成分芍药苷的提取率及浸膏得率，采用正交实验法进行优选。

材料与方法

1 仪 器 Agilent 1100型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)；SARTORIUS BP-210S十万分之一电子分析天平(德国赛多利斯公司)；RE-52A型旋转蒸发仪(上海申胜生物技术有限公司)；SHB-ⅢS循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)；HHS型恒温水浴锅；DZF-6050真空干燥箱；KQ-100型超声波清洗器等。

2 试药与试剂 白芍、柴胡等饮片(南京海源中药饮片有限公司)，经鉴定符合2015版《中华人民共和国药典》标准。芍药苷(中国食品药品检定研究院，批号110736-201136，含量以96.4%计)。

3 干浸膏的制备及测定 依次称取制剂投料饮片，对香附、柴胡、青皮、枳壳和土木香，采取水蒸气回流提取、收集挥发油。按L18(37)正交表的试验设计，将其余药味加入提取挥发油后的药渣中，进行水提工艺，所得样品液静置、过滤，并以水浴蒸干转移至恒重蒸发皿中的滤液，于105℃烘箱中干燥3 h，冷却至常温后称定重量，计算浸膏得率[5]。

4 芍药苷含量测定

4.1 色谱条件[6]:Diamonsil C18(L)色谱柱(4.6 mm×250 mm，5μm)；流动相:乙腈-0.1%磷酸水(14:86)，检测波长230nm，流速1.0 ml·min-1，柱温25℃。

4.2 溶液制备:对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品0.0054 g，加乙腈-0.1%磷酸水(14∶86)50 ml制成每1 ml含芍药苷0.104 mg的溶液，即得。阴性对照品溶液的制备:除白芍外，称取其余处方药材，制备干浸膏样品，按供试品溶液项方法进行处理，制得阴性对照溶液。

4.3 专属性试验按“4.1”项下色谱条件，依次对照品、供试品溶液和阴性对照溶液进行分析，各精密吸取10 μl进样，记录相应色谱图，结果显示阴性无干扰，表明该方法专属性良好。

4.4 线性关系考察:制备对照品溶液1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 ml于5ml容量瓶中，加上述流动相定容，制得不同浓度的对照品溶液。按“4.1”项下色谱条件，以峰面积Y对进样量X(μg)进行线性回归，方程为Y=2000000X-27164，r=0.9996。表明在0.3123～0.8329μg范围内，芍药苷呈显著的线性相关。

4.5 精密度考察:于“4.1”项下色谱条件，采用同一芍药苷对照品溶液(0.521mg·ml-1),每次10 μl，重复6次，显示仪器精密度的RSD为0.9%。

4.6 稳定性试验:于“4.1”项下色谱条件，精密吸取供试品溶液10 μl，分别于0、1、2、4、6、8 h进样，测定峰面积，求得8 h内稳定性的RSD为1.3%。

4.7 重复性试验:于“4.1”项下色谱条件，取同一样品6份，按“4.2”项下方法制备供试品溶液，测定峰面积，求得重复性的RSD为1.2%。饮片中芍药苷含量(mg)=白芍饮片重量(g)×1.8%×1000。

5 正交试验 在单因素试验基础上，本实验选取了浸泡时间、加水量、提取时间、提取次数及浸泡温度5个影响因素，按表1中L18(37)正交表的设计，分取上述工艺条件下制备的干浸膏，按“4.2”项下方法制备，并按上述含量测定条件测定，计算浸膏得率及各组芍药苷的提取率。

根据处方药物成分及疗效所需，对上述浸膏得率(W1)、芍药苷提取率(W2)进行综合加权评分[7]。芍药苷为君药白芍中起主要作用的药效成分，是本制剂的主要指标，故权重系数定为0.7；浸膏得率高低也相应影响后续片剂质量，作为辅助指标，其权重系数定为0.3[8]。按综合评分(W)=(0.3×W1/W1max+0.7×W2/W2max)×100%得出试验结果。正交试验方案见表2，试验结果见表3，方差分析见表4。

表1 正交试验因素水平表

表2 正交试验方案

表3 正交试验结果

表4 方差分析结果

注：F0.10(2,10)=2.92，*P<0.1;F0.05(2,10)=4.10，∆P<0.05

通过综合评分进行直观分析，可知5个影响因素的大小顺序为B>D>A>C>E，最优化方案为A3B2C2D2E3。而方差分析结果表明加水量及提取次数具有显著差异，因此B2、D2水平优先确定，即提取2次，加12倍量水；其余因素基本无差异。综合以上数据分析并结合生产成本考虑，浸泡时间选择0.5 h，提取时间选择3 h，浸泡温度选择35 ℃，因此得出优选方案为A1B2C2D2E3。

6 验证 采取平行3组进行验证试验，结果浸膏平均得率为24.51%，RSD为2.58%；芍药苷平均提取率85.94%，RSD为1.09%。表明该方法较稳定，切实可行。

讨 论

胃炎片一号原以水提醇沉法制得，本实验根据药味性质，通过前期试验对方中挥发油成分提取后，采用将药渣并入余药进行共水提，既符合中药汤剂的特点，又能将药材的有效成分提取得比较完全，符合医院制剂实际配制情况[9]；由于方中药味众多，单一指标难以客观评价方案的优劣，故采用方中君药白芍所含有效成分芍药苷[10]，作为主要评价指标，结合浸膏得率进行综合评价，采用正交实验对提取工艺进行了优选，方法可行性、重现性俱佳，为实际生产以及后续制剂的质量标准研究提供了一定的依据[11-12]。

原先根据药典[13]方法进行含量测定时，发现用稀乙醇制备的供试品溶液峰形波动较大；经多次调整后，发现以流动相溶解干浸膏后高效液相平稳，峰形对称性佳，分离度良好。此外，采取回流和超声提取制备供试品溶液，溶解性差别不明显，有效成分含量检测基本无差异，故确定采用较为简便的超声30 min的方法提取。

中药提取作为一个复杂的混合反应过程[14]，为保证全面、合理，本次试验采用 L18(37)正交设计，将浸泡时间与浸泡温度列入考察范围，以优化提取工艺参数。根据实验结果，除加水量和提取次数外，其余因素均无显著影响。由此可以看出，浸泡时间会影响饮片的溶出度，但浸泡0.5 h已可浸出大部分的有效物质，溶出物浓度已接近平衡，从节约能源和提高效率出发，因此最终采取浸泡0.5 h；浸泡温度结合实际生产车间厂房夏冬季节常温设置的因素水平，显示控制在35℃左右效率较高；从提取时间的影响来看，提取时间的延长无助于有效物质的溶出提升，造成中药中的淀粉类物质的糊化粘壁，变相降低了提取物质量以及相应有效成分的含量。

复方水提取的效率可以由浸膏量评价，但结合剂型考量，浸膏量过大并不利于后期精制除杂，因此，醇沉步骤需进行下一步考察，可借鉴本实验所建立芍药苷测定方法。

[1] 严志强, 尤奋强. 胃炎一号片中挥发油工艺研究[J]. 中国处方药, 2015，(11):26-27.

[2] Zhang X, Li Z, Leung W,etal. The analgesic effect of paeoniflorin on neonatal maternal separation-induced visceral hyperalgesia in rats[J]. Journal of Pain, 2008, 9(6):497-505.

[3] 王永祥, 陈敏珠, 徐叔云. 白芍总甙的镇痛作用[J]. 中国药理学与毒理学杂志, 1988：25-27.

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[5] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：中国医药科技出版社,2010:附录62.

[6] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：中国医药科技出版社,2015:105.

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OptimizationofwaterextractionprocedureforWeiyantabletsⅠwithorthogonalexperimentaldesign

Li Qingsong，Yan Zhiqiang.

Traditional Chinese Medicine Hospital Pharmacy of Kunshan( Kunshan 215300)

Objective: To optimize the water decocting extraction procedure for Weiyan tablets Ⅰ.Methods: With the comprehensive score of the yield of dry extract and peaoniflorin as index，L1837orthogonal experimental design was carried out to optimize the extraction process by taking the soak time，volume of wate，extraction time，extraction times and soaking temperature as factors.Results: The optimal wate extraction process was as follows：TCM decoction pieces were soaked for 0.5 h，and the ratio of liquid‐solid was 12 ，the extraction times were 2，the extraction time was 1.5 h．Conclusion: This optimal water decocting extraction procedure is stable and feasible．It can provide the basis industrial production for Weiyan tablets Ⅰ.

@Weiyan tablets Ⅰ Technology, pharmaceutical Paeoniflorin Orthogonal test

*江苏省苏州市科学技术局项目(SYSD2014152)

@胃炎片一号 工艺学, 制药 芍药苷 正交试验

R283

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2017.11.056

(收稿：2017-06-11)