阳和汤的质量标准研究*

窦建卫 ，朱宇红 ，王红英 ，任翠翠 ，尚荣国，黄 芊

1.西安交通大学药学院(西安 710061)，2.西安市第一医院(西安 710004)，3.西安市中医医院(西安 710021)

·方药纵横·

阳和汤的质量标准研究*

窦建卫1，朱宇红1，王红英1，任翠翠2，尚荣国1，黄 芊3△

1.西安交通大学药学院(西安 710061)，2.西安市第一医院(西安 710004)，3.西安市中医医院(西安 710021)

目的：创建阳和汤质量控制的标准，从而更好服务于研究与临床。方法：采用TLC对麻黄、肉桂鉴别与HPLC对阳和汤所含成分毛蕊花糖苷进行含量测定。结果：用TLC鉴别麻黄、肉桂具有较好的专属性；毛蕊花糖苷在32.1～192.6 ng范围内，与峰面积呈良好的线性关系，相关系数r=0.9994，平均回收率99.7%，RSD等于0.75%。结论：本实验所创建的检测方法方便有效，专属性强，此标准能够很好控制阳和汤质量。

阳和汤是由肉桂、麻黄、熟地、姜碳等多味中药经一定工艺加工而成。是基于古法阳和汤，逐步优化创制而成的中药复方制剂，具有温阳散寒、补血通滞之效。前期实验研究表明，阳和汤对乳腺癌具有良好的控制作用，其主要是通过对细胞内多种信号通路起到一定的抑制作用，且药物安全性良好[1-3]。本课题得到国家自然科学基金的大力支持，为了对该复方制剂质量进行控制，该实验采用TLC和HPLC检测其含量，内容如下。

材料与方法

1 仪器 超声波清洗机(型号：PS-40，生产厂家：深华泰超声洗净设备有限公司)；分析天平(型号：YP1201N，生产厂家：上海天平仪器厂)；0.1 mg微量分析天平(型号：FA1104，生产厂家：上海天平仪器厂)；0.01 mg微量分析天平(型号：AB135-S，生产厂家：梅特勒-托利多公司)等。

2 试药 毛蕊花糖苷对照品(批号：111530-201512)；桂皮醛对照品(批号：121604-201502)；盐酸麻黄碱对照品(批号：171241-201508)；供试品、阴性样品均为自制；其他试剂均是分析纯。

3 薄层色谱鉴别

3.1 麻黄：取一定量样品(5 ml左右)，加入一定量氢氧化钠溶液(使其为碱性)，加乙醚20 ml萃取分离(3次重复)，每次用量10 ml，合并乙醚相，蒸干，收集残渣，加2 ml甲醇溶解，即为供试品溶液[4]。同时，取适量盐酸麻黄碱对照品，以甲醇为溶剂，用上法配制对照品溶液。按处方的构成比，取缺麻黄的其它药材，用上法制成阴性样品溶液(不含麻黄)。依薄层色谱法(通则0502)[5]，分别取上述10 μL各溶液，点于硅胶G薄层板上，放入展开剂片刻，拿出，晾干后，浸渍于茚三酮溶液中，取出晾干。展开剂按照三氯甲烷-甲醇-浓氨试液体积比为20∶6∶0.5配制而成。结果显示，供试品色谱与对照品色谱对照，在对应的位置上，主斑点呈现相同颜色及形状，且阴性对照显示没有干扰，因此将该法列入该制剂的质量标准。

3.2 肉桂：取一定量样品(5 mL左右)，加10 mL乙醇，振荡，静置，醋酸乙酯萃取(重复3次)，收集乙醇相并旋蒸，收集残渣，再加2 mL乙醇搅拌溶解，即供试品溶液[6]。同时将肉桂对照药材，以乙醇为溶剂，按以上方法配制成对照品溶液。按处方的构成比，取不含肉桂的其它药材，用上法制成阴性样品溶液(不含肉桂)。分别取5 μL上述溶液，点于硅胶G薄层板上，放入展开剂片刻，拿出后，晾干，将二硝基苯肼乙醇喷于薄层板上105°C条件下加热，斑点完全显现时停止。展开剂按照石油醚-醋酸乙酯体积比为18∶2配制。供试品色谱与对照品色谱对照，在对应的位置上，主斑点呈现相同颜色及形状，且阴性对照显示没有干扰，因此将该法列入该制剂的质量标准。

4 含量测定

4.1 色谱条件与系统适用性试验：十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂；流动相为乙腈-0.1%醋酸溶液(18∶82)；检测波长334nm。理论板数按毛蕊花糖苷峰计算应不小于5000。

4.2 对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液的制备：取一定量毛蕊花糖苷，用甲醇为溶剂配成10μg/ml的溶液，即对照品溶液。供试品溶液：量取10 ml样品于25 ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度线，超声处理1.5 h，稍冷，补加甲醇溶液至刻度线，混匀，过滤，收集续滤液，即得。阴性对照溶液：按前述制备方法，取除熟地外的阴性样品适量，制备阴性对照溶液。

4.3 干扰性试验：取一定量对照品溶液(10 μl)，进行检测，得到色谱图，阴性对照和供试品溶液重复以上操作。由结果可知，阴性样品在毛蕊花糖苷对应的位置上，没有色谱峰被检出，说明该制剂中其余药材毛蕊花糖苷的测定不会产生干扰。

4.4 线性考察：称取一定量毛蕊花糖苷对照品，用甲醇溶液作为溶剂，制备10.7μg/ml的溶液，精确吸取3、6、9、12、15、18μl进行实验，得到色谱图，峰面积值，分析得到其回归方程：y=1768.3×-627.3(r=0.9994)，在32.1～192.6 ng范围内，毛蕊花糖苷与色谱峰面积线性关系良好。

4.5 精密度试验:取适量对照品溶液，进行精密度实验(色谱条件与上述相同)，得到色谱图及色谱峰面积，以毛蕊花糖苷峰面积(A)为指标进行考察，进样6次，得到RSD为0.95%，结果可知，该方法具有较好的精密度。

4.6 稳定性试验:从首次进样后，每2 h进样1次，共进样5次(10μl/次)，得到色谱图及色谱峰面积，RSD为0.72%。由以上结果可知，在8 h内，供试品溶液有较好的稳定性。

4.7 重复性试验:按上法，制备6样份供试品溶液，按次序取10 μl进行处理，得到色谱图，计算复方制剂中目标成分含量为0.102 mg/ml，RSD为1.33%。由以上结果可知，该法有较好的重复性。

4.8 加样回收率试验:取浓度已知的样品(各1ml)，按顺序加入容量瓶中，同时加以上毛蕊花糖苷对照品(0.105 mg/ml)溶液适量，依上法制备、分析、得到色谱图，对复方制剂中毛蕊花糖苷含量及回收率进行计算，见表1。

表1 样品的回收率试验结果

4.9 样品的含量测定:按以上方法对3批阳和汤进行含量测定，毛蕊花糖苷平均含量为0.102 mg/ml。

讨 论

阳和汤作为临床常用中药复方制剂，由熟地、麻黄、肉桂、白芥子等组成。其中熟地为滋养之品，滋阴补肾，养血调肝；麻黄、肉桂、炮姜炭、白芥子乃温阳之药，具有驱散寒邪，腠理开，寒凝解，气血则行，毒迹随消。肉桂、炮姜炭入血分，温经散结而解寒凝；麻黄辛温，得熟地而通络；白芥子通阳散寒而消痰结，祛内外之痰。诸药配伍，针对阳气亏虚之本，寒凝痰滞之标，温阳共补阴合用，滋腻和辛散相伍，温且不燥、补而不腻。寒邪易客于肌肉、筋骨，凝则为痰，凝痰阻碍气血运行，日久为瘀血，寒痰瘀聚于乳，则为“乳岩”，本方温阳以化寒痰、解凝聚，血得热则行，寒痰得温而消，故能消痰凝肿块。

在体外实验研究方面，阳和汤可明显抑制MDA-MB-231细胞的增殖，下调NF-κB、减少IL-8的分泌，从而有效阻止乳腺癌的发生、发展[2]；在体内实验研究方面，阳和汤通过降低裸鼠血清中IL-6、移植瘤组织中MMP-9、CD90的表达，从而表明其可抑制乳腺癌的发生、发展[1,3]。因此，为保证阳和汤复方制剂的质量，我们创建阳和汤复方制剂的质量标准，此实验通过测定制剂中毛蕊花糖苷成分的含量，建立了该制剂质量标准。此外，我们对该制剂中的肉桂、麻黄进行了TLC鉴别，在相应展开剂中，供试品能够特征性地检测出该制剂中肉桂、麻黄。鉴于以上实验结果，将上法列入该制剂的标准，为更好的掌控阳和汤复方制剂的质量提供了标准。

[1] 窦建卫, 任翠翠, 郝 云, 等. 阳和汤对裸鼠荷人乳腺癌组织中CD90表达的影响及其抑瘤作用[J]. 世界中医药, 2015, 10(3): 391-393，398.

[2] 窦建卫, 黄 芊, 赵天一, 等. 阳和汤对乳腺癌MDA-MB-231细胞NF-κB、IL-8表达的影响[J]. 四川中医, 2017, 35 (2): 44-47.

[3] 窦建卫, 黄 芊,赵天一, 等. 阳和汤对三阴性乳腺癌裸鼠移植瘤生长及IL-6、MMP-9表达的影响[J]. 中国现代医药杂志, 2016, 18(12): 1-4.

[4] 毛 丹,许 勇,陆继伟, 等. 复方桔梗麻黄碱糖浆质量标准研究[J]. 中成药,2012, 34(8): 1518-1522.

[5] 国家药典委员会. 中国药典[M]. 第四部. 北京: 中国医药科技出版社, 2015: 57-59．

[6] 王 卓, 韩 璐, 王 燕. 前列痊胶囊质量标准中大青叶、肉桂TLC鉴别的研究[J]. 中国医药指南, 2015, 13(33): 39-40.

*国家自然科学基金资助项目(81573983) 陕西省社会发展科技攻关项目(2015SF082)

△通讯作者

阳和汤 毛蕊花属 色谱法, 高压液相 色谱法, 薄层

R284

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2017.11.054

(收稿：2017-06-17)