口蹄疫O-A-Asia1型三价灭活疫苗免疫骆驼的安全性和最小免疫剂量试验

王 涛，张耀文，张寅生，杨小亮，蔡扩军，徐 敏

（1. 乌鲁木齐市动物疾病控制与诊断中心，新疆乌鲁木齐 830063；2. 乌鲁木齐市达坂城区畜牧兽医站，新疆乌鲁木齐 830039）

口蹄疫O-A-Asia1型三价灭活疫苗免疫骆驼的安全性和最小免疫剂量试验

王 涛1，张耀文1，张寅生2，杨小亮1，蔡扩军1，徐 敏1

（1. 乌鲁木齐市动物疾病控制与诊断中心，新疆乌鲁木齐 830063；2. 乌鲁木齐市达坂城区畜牧兽医站，新疆乌鲁木齐 830039）

为确定口蹄疫O-A-Asia1型三价灭活疫苗免疫骆驼的安全性和免疫效果，分别进行了2倍注射剂量和3倍注射剂量的安全性试验和最小免疫剂量试验。结果显示：该疫苗对6月龄以上骆驼安全，无任何毒副反应；适宜的免疫剂量为6月龄以上骆驼每峰3.0 mL。该类型疫苗对骆驼安全，免疫效果良好；一次接种可同时预防O、A、Asia1 3个血清型的口蹄疫。

安全性试验；最小免疫剂量；口蹄疫灭活疫苗

骆驼作为体型比牛更大的反刍动物，亦属于口蹄疫易感动物。目前我国对骆驼口蹄疫的研究主要集中在疫苗免疫等防控技术方面[1]。而国外研究者则着力研究不同品种骆驼之间口蹄疫病毒的感染及传播情况等[2-3]。近年来，随着人们对骆驼及其产品需求的加大，乌鲁木齐市的骆驼养殖数量飞速增长[4]，口蹄疫的发生几率也随之增加。目前国内没有针对骆驼的标准口蹄疫免疫方法。对其免疫，仍参照牛羊的口蹄疫免疫程序进行。但由于骆驼在体型及生活习性等方面与牛羊存在差异，骆驼注射口蹄疫O、A、Asia1型三价灭活疫苗的安全性及最小免疫剂量有待确定[5]。本试验将骆驼分为4组进行口蹄疫疫苗的安全性和最小免疫剂量试验，以期对乌鲁木齐市乳用双峰驼口蹄疫免疫程序的制定提供参考。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 口蹄疫灭活疫苗。口蹄疫O-A-Asia1型三价灭活疫苗，购自金宇保灵生物药品有限公司，生产批号5235007，规格为100 mL/瓶，2～8 ℃保存。

1.1.2 试验动物。选择健康成年（6月龄以上）骆驼70峰，均未免疫口蹄疫O-A-Asia1型三价灭活疫苗，免疫抗体效价≤1∶8。

1.1.3 试验试剂。O、A及Asia1型口蹄疫抗体液相阻断ELISA检测试剂盒，均购自中国农业科学院兰州兽医研究所，批号分别为20170210101-3、20170421103-1、201705093101-11。

1.2 方法

1.2.1 疫苗安全性试验。随机从上述70峰骆驼中抽选10峰，分为2组，每组5峰。将口蹄疫O-AAsia1型三价灭活疫苗，分别按照6.0 mL（拟定注射量3.0 mL的2倍）和9.0 mL（拟定注射量3.0 mL的3倍），在颈后部通过肌肉注射方式免疫2组骆驼，连续观察6 d，记录试验骆驼是否出现不良反应或中毒现象。使用前，检查疫苗中是否有异物、瓶体是否有裂痕或封口不严实、变质等情况。

1.2.2 最小免疫剂量试验。将剩下的60峰骆驼平均分为4组（A、B、C、D组），每组15峰；对每组骆驼在颈后部肌肉注射口蹄疫O-A-Asia1型三价灭活疫苗（ A、B、C、D组的注射量剂量分别为4.0、3.0、2.0、1 mL）；30 d后，检测其免疫抗体合格率。试验成立条件为：病毒抗原对照平均OD92值在1.0～2.0范围内；阳性对照血清抗体效价在1∶1 024 ±1 滴度以内；阴性对照血清抗体效价＜1∶8。临界值=病毒抗原对照平均OD492值×50%。样品抗体效价≥1∶64为抗体合格。

2 结果与分析

2.1 疫苗安全性试验

疫苗接种10峰骆驼后，在观察期内发现，2倍拟定剂量（6.0 mL）注射试验组，除体温出现一过性升高外，无其他临床症状或无不良反应，精神、食欲正常，注射部位无明显变化，泌乳正常；3倍拟定剂量（9.0 mL）试验组，有1峰体温升高0.5～1 ℃，泌乳量呈一过性减少，其余骆驼无明显临床症状或不良反应，延长观察期至2周，全部恢复正常。

2.2 最小免疫剂量试验

4组试验骆驼免疫1个月后的抗体合格率见表1，免疫抗体合格率与免疫剂量关系见图1。按照我国重大动物疫病免疫方案的要求：口蹄疫抗体液相阻断ELISA检测的抗体效价在l∶64以上（含l∶64）为合格，即认为免疫达到了保护要求；整体免疫抗体群体保护率≥70%，即为群体合格。从结果可以看出，免疫剂量为2.0 mL时，O、A、Asia1Ⅰ型的免疫抗体合格率均达到了70%以上，评定为口蹄疫免疫合格。

表1 口蹄疫免疫抗体合格率

图1 三种血清型口蹄疫免疫抗体合格率与免疫剂量关系

3 讨论

疫苗安全性试验结果显示试验骆驼几乎未出现疫苗不良反应。该结果与王志刚[6]报道的疫苗存在不良反应有所出入。其原因可能与疫苗本身的产品质量、疫苗运输保存及使用的器械干净卫生程度有关。本次试验所用疫苗在运输途中严格保持在2～8 ℃；所有疫苗注射器械均经严格消毒[7]；凡是疫苗中有异物、瓶体有裂痕及密封不严的疫苗均视为失效疫苗处理。注射时严格执行每注射1头更换1次针头。同时也可能与疫苗种类及免疫方式有关。王志刚[6]使用的是O和Asia1型单苗，分别注射，而本试验使用的是O-A-Asia1型三价灭活疫苗1次注射，因此引起的应激反应相对较小。

本试验所用疫苗的说明书只对牛羊的免疫剂量做出了说明，并未对骆驼及其他反刍动物做详细说明。因此，本试验设计的剂量梯度是建立在疫苗说明书基础上的（牛羊免疫剂量为1.0 mL）。最小免疫剂量试验结果显示，免疫剂量为2.0 mL时，能达到70%的免疫抗体群体保护率。疫苗免疫剂量过量，既造成浪费，也会引起免疫抑制剂、免疫迟缓等现象[8]。但是考虑到骆驼绒皮较牛羊厚，性情没有牛温顺，易出现吐胃液、甩脖子等现象，且在注射过程中存在沾壁、漏液等多种因素，为确保注入骆驼体内疫苗的含量达到2 mL，建议将该疫苗的最佳免疫剂量定为3.0 mL/头份。

[1] 武志峰. 骆驼口蹄疫疫苗免疫及免疫抗体监测分析[J].畜牧兽医杂志，2009（6）：125-126.

[2] DU J，LARSKA M，CHANG H，et al. Molecular cloning and phylogenetic analysis of inte-grins αvβ1 and αvβ6 of one-humped camel（Camelus dromedarius）[J]. Veterinary immunology and immunopathology，2010，135（2）：164-171.

[3] ALEXANDERSEN S，WERNERY U，Nagy P，et al.Dromedaries（Camelus dromedarius）are of low susceptibility to inoculation with foot-and-mouth disease virus serotype O[J].Journal of comparative pathology，2008，13（4）：187-193.

[4] 叶尔江·色尔哈孜，赛力克·库鲁西，努尔兰·木合买提，等. 乌鲁木齐市骆驼养殖现状与发展建议[J]. 新疆畜牧业，2016（8）：10-14.

[5] 陈文贤，范玉芳. 骆驼注射口蹄疫O型-亚洲I型二价灭活疫苗免疫抗体消长检测报告[J].中国动物检疫，2010，17（1）：54-55.

[6] 王志刚. 骆驼注射口蹄疫疫苗后不良反应的处置[J]. 当代畜牧，2009（12）：18-20.

[7] JEAN-FRANCOIS V，INGRID B，ALEKSEY S，et al. Annual OIE/FAO：FMD reference laboratory network Rreport[EB/OL].[2017-07-01]. http∶//www.iah. bbsrc. ac. uk/vir/picornaviridae/aphtho-virus/index.html，January-November 2005.

[8] JEAN-FRANCOIS V，NICK K，ROSA F，et al. FMD global update 2003—2004[R]. Pirbright：FAO World Reference Laboratory for FMD，2004.

（责任编辑：朱迪国）

Safety and Minimum Immunization Dose Tests on FMD Trivalent Inactivated Vaccine of O-A-Asia1 Type for Camels

Wang Tao1，Zhang Yaowen1，Zhang Yinsheng2，Yang Xiaoliang1，Cai Kuojun1，Xu Min1
（1. Urumqi Animal Disease Control and Diagnosis Center，Urumqi，Xinkiang 830063；2. Dabancheng District Animal Husbandry and Veterinary Station，Urumqi，Xinkiang 830039）

In order to determine the safety and immunological effect of O-A-Asia1 type of FMD trivalent inactivated vaccine，the safety test and minimum immunological dose test were conducted for 2 and 3 fold injection dose of FMD，respectively . The results showed that the vaccine was safe for six-month or older camels without any side effects. The appropriate immunization dose was 3.0 mL per camel to six-month camels. This type of vaccine was safe and effective for camels. And O，A and Asia 1 type 3 serotypes of FMD could be prevented by only once vaccination.

safety experiment；minimum immunization dose；FMD inactivated vaccine

S851.3

A

1005-944X（2017）11-0086-03

10.3969/j.issn.1005-944X.2017.11.023

新疆乌鲁木齐市科技局项目（P151210001）

徐 敏