小柴胡颗粒制剂的多波长指纹图谱及药材-制剂谱峰匹配分析

2017-11-07李兴东巩伟

中国卫生产业 2017年28期

关键词：谱峰小柴胡柴胡

李兴东，巩伟

原济南军区联勤部药品仪器检验所，山东济南 250022

小柴胡颗粒制剂的多波长指纹图谱及药材-制剂谱峰匹配分析

李兴东，巩伟

原济南军区联勤部药品仪器检验所，山东济南 250022

目的分析小柴胡颗粒制剂的多波长指纹图谱及药材-制剂谱峰匹配。方法运用反相高效液相色谱法（RP-HPLC法）对3个厂家及实验室自制12批小柴胡颗粒评价多波长指纹图谱相似性，并匹配实验室自制小柴胡颗粒相同色谱条件下所用的原药材指纹图谱谱峰；运用RP-HPLC法对不同来源的小柴胡颗粒中的指标成分的量进行测定。结果210 nm、254 nm、323 nm 波长下，A 厂和实验室自制小柴胡颗粒的 r1、r2均＞0.9，B、C 两厂的 r1、r2均＜0.9，280 nm 波长下12批小柴胡颗粒的r1、r2均＞0.9，210 nm、254 nm、280 nm、323 nm波长下来自同一厂家3个批次的小柴胡颗粒均具有极小的相似度差异；A厂和实验室自制制剂和柴胡药材的匹配相似度≥0.900，B厂和C厂＜0.900。结论小柴胡颗粒制剂的多波长指纹图谱及药材-制剂谱峰匹配能够将有效参考提供给临床对中药制剂质量进行较为全面的评价，值得在临床推广。

小柴胡颗粒制剂；多波长指纹图谱；药材-制剂谱峰；匹配

中药具有广泛的成分和复杂的作用机制，局限性较大，这是因为其质量控制的标准仅仅是某种活性组分的量[1-2]。该实验对12批小柴胡颗粒的RP-HPLC指纹图谱进行了研究，将4个波长下的指纹图谱分别选取了出来，选取过程中严格依据制剂用药材特性，同时匹配了制剂及其原药材指纹图谱的谱峰，并考察了样品化学组成的总体波动情况，将匹配结合制剂用药材和制剂指纹图谱多指标成分定量测定的方法提了出来，现报道如下。

1 仪器和材料

仪器采用美国Waters生产的M32色谱管理站、2996型二极管阵列检测器、2695型高效液相色谱仪，材料采用北京化工厂生产的磷酸、冰醋酸分析纯，山东禹王实业有限公司禹城化工厂生产的甲醇、乙腈色谱纯，兰州医学院第一附属医院药剂科提供的超纯水，兰州黄河药材市场提供的100201伞形科柴胡属植物南柴胡的干燥根柴胡，苏州华葆药业有限公司(A厂)生产的小柴胡颗粒 1、2、3，批号分别为 20070204、20061006、20061205，甘肃岷海制药有限责任公司（B厂）生产的小柴胡颗粒4、5、6，批号分别为 20070502、20070810、20061101，云南白药集团股份有限公司（C厂）生产的小柴胡颗粒7、8、9，批号分别为 20070507、20070913、20061219，实验室自制制剂小柴胡颗粒 10、11、12，批号分别为 20071011、20071121、20071229 及柴胡皂苷 a、d，批号分别为 110777-200507、110778-200506，中国药品生物制品检定所提供的对照品。

2 方法和结果

2.1 色谱条件

Kromasil ODS保护柱、大连依利特C18色谱柱的规格分别为 10 mm×4.6 mm，5 μm、250 mm×4.6 mm，5 μm，进行梯度洗脱时将流动相设定为乙腈-0.5%磷酸水溶解，梯度程度：0～10 min、10～30 min、30～45 min、45～60 min、60～70 min乙腈浓度分别为 10%～25%、25%～45%、45%～55%、55%～80%、80%～100%，体积流量、柱温、色谱图光谱采集范围分别为 0.8 mL/min、25℃、210～410 nm[3-4]。

2.2 小柴胡颗粒样品溶液的制备

在100 mL具塞三角瓶中放置称取出来的10.0 g小柴胡颗粒精密，将50 mL甲醇精密加入其中，对质量进行精密成定，进行30 min的超声处理，放置到室温，将质量称定并对减失的质量进行补足，补足过程中用甲醇，摇匀，用微孔滤膜滤过，微孔滤膜直径为0.45 μm，将续滤液取出来备用，将每个小柴胡颗粒样品溶液样品分为3份，然后对其进行平行处理。

2.3 色谱柱相似性分析

将上述12批小柴胡颗粒样品溶液取出来进样，容量为10 μL，依据上述色谱条件将小柴胡颗粒制剂的指纹图谱建立起来。具体见表1。210 nm、254 nm、323 nm波长下，A厂和实验室自制小柴胡颗粒的r1、r2均＞0.9，B、C两厂的r1、r2均＜0.9，280 nm波长下12批小柴胡颗粒的 r1、r2 均＞0.9，210 nm、254 nm、280 nm、323 nm 波长下来自同一厂家3个批次的小柴胡颗粒均具有极小的相似度差异。

表1 不同波长下各制剂的全谱平均数及中位数相似度

2.4 制剂和药材谱峰匹配

将10 μL柴胡药材样品溶液、10 μL柴胡皂苷a和10 μLd对照品溶液取出来进样，将柴胡药材色谱图获取过来，获取过程中依据上述色谱条件，将210 nm色谱图提取出来。对小柴胡颗粒模式进行匹配，匹配过程中依据谱峰匹配方法，参照峰为1号峰，匹配峰的相对保留时间及峰面积具体见表2，共有匹配峰5个，柴胡皂苷a、d的匹配峰不存在，发生这一现象的原因是水提柴胡过程中水解了柴胡皂苷a、d。如果小柴胡颗粒的制备工艺为水提取，那么其也不含柴胡皂苷a、d，和相关医学学者[5-6]研究结果一致。A厂和柴胡药材的匹配相似度为0.900，B厂为0.844，C厂为0.555，实验室自制制剂为0.930，A厂和实验室自制制剂和柴胡药材的匹配相似度≥0.900，B 厂和 C 厂＜0.900。