口腔鳞癌中DPC4、转化生长因子-β1表达及其与增殖的关系

王禹锟 董文杰 吴 婷 郭婧玉

(牡丹江医学院附属第二医院口腔科,黑龙江 牡丹江 157000)

口腔鳞癌中DPC4、转化生长因子-β1表达及其与增殖的关系

王禹锟 董文杰 吴 婷 郭婧玉

(牡丹江医学院附属第二医院口腔科,黑龙江 牡丹江 157000)

目的应用免疫组化法检测口腔鳞癌中胰腺癌第4座位缺失(DPC4)基因和转化生长因子(TGF)-β1的表达，分析其与KI67增殖指数的关系。方法46例口腔鳞癌术后蜡块组织及临床资料为观察组，肿瘤周围非肿瘤性牙龈鳞状上皮组织18例为对照组。应用免疫组化SP法检测两组中DPC4、TGF-β1和KI67的表达。结果两组中DPC4、TGF-β1和KI67表达的阳性率差异有统计学意义。观察组中DPC4、TGF-β1和KI67的表达均与肿瘤的最大径、有无坏死和分化程度密切相关。相关分析显示观察组中DPC4与TGF-β1、DPC4与KI67呈负相关，TGF-β1与KI67呈正相关。结论口腔鳞癌术后组织中DPC4低表达、TGF-β1和KI67高表达对病变的形成和进展有一定作用。DPC4与TGF-β1具有负向协同作用，可能与对KI67标记的增殖有明显调节作用。

口腔；鳞癌；DPC4；转化生长因子(TGF)-β1；KI67；免疫组化

口腔鳞癌是一个具有不同程度鳞状分化的侵袭性上皮性肿瘤，倾向于早期、广泛淋巴结转移，主要发生于40～70岁的烟酒嗜好者〔1，2〕。无论何种诱因形成的病变，其形成过程中均有相关蛋白的表达失调。胰腺癌第4座位缺失(DPC4)是一种新的肿瘤抑制基因，其蛋白产物Smad4是转化生长因子(TGF)-β1的直接底物〔3〕，研究认为DPC4具有调节肿瘤细胞黏附和侵入的潜在功能，同时对肿瘤组织的血管增殖有明显调节作用〔4〕。本文关注DPC4和TGF-β1在口腔鳞癌中作用及与细胞增殖的关系。

1 资料与方法

1.1一般资料 2012年1月至2015年12月牡丹江医学院附属第二医院行口腔鳞癌手术患者46例为观察组，其中男27例，女19例，年龄41～75(平均58.4)岁。其中舌癌17例，牙龈癌13例，口底癌10例，颊癌5例，唇癌1例。患者临床资料齐全，术前均未行放、化疗。纳入均符合世界卫生组织中的鳞癌诊断标准。肿瘤周围非肿瘤性牙龈鳞状上皮18例为对照组，其中男9例，女9例，年龄44～72(平均57.8)岁。两组常规资料无明显差异(P>0.05)，具有可比性。

1.2DPC4、TGF-β1和KI67表达的检测 DPC4、TGF-β1和KI67的检测均应用免疫组化SP法完成，应用二氨基联苯胺(DAB)显色。做好质量控制。

1.3DPC4、TGF-β1和KI67结果的判定 DPC4和TGF-β1阳性部位为细胞质，呈棕黄色颗粒状着色。KI67阳性部位为细胞核，呈棕黄色颗粒状。选择3个上皮细胞集中的高倍视野(400倍)进行观察。阳性判定依据两个因素进行综合观察：①阳性细胞数：<5%为0分；5%～25%1分，26%～50% 2分，51%～75% 3分，≥76%为4分。②染色强度：无色为0分；浅棕黄色颗粒状为1分；棕黄色颗粒状为2分；深棕褐色颗粒状为3分。二者相乘为判定结果。以0～4分为阴性，5～12分为阳性。

1.4统计学方法 应用SPSS统计软件进行χ2检验或线性相关分析。

2 结 果

2.1两组DPC4、TGF-β1和KI67表达比较 两组DPC4、TGF-β1和KI67表达差异有统计学意义(P<0.01)。见表1。

表1 两组中DPC4、TGF-β1和KI67阳性表达的比较〔n(%)〕

2.2观察组中DPC4、TGF-β1和KI67在不同临床特征中表达的比较 观察组中DPC4、TGF-β1和KI67的表达均与肿瘤的最大径、有无坏死和分化程度密切相关。见表2。

2.3观察组中DPC4、TGF-β1和KI67的相关性 DPC4与TGF-β1(r=-0.48，P=0.041 1)、与KI67(r=-0.44，P=0.048 0)呈负相关，TGF-β1与KI67(r=0.47，P=0.031 3)呈正相关。

表2 观察组中DPC4、TGF-β1和KI67阳性表达在不同临床特征中表达的比较〔n(%)〕

3 讨 论

口腔鳞癌可以发生在口腔的任一部位，最常发病部位有时也反映了不同的危险因素，其机制复杂，涉及的因素较多〔5〕。在口腔内，肿瘤的发生部位有：颊部黏膜、上下牙龈、硬腭、舌部前2/3、口底和唇。本病最主要的危险因素是吸烟和酗酒，这两个因素具有很强的协同作用〔6〕。无论何种因素均可以诱导肿瘤形成中基因和蛋白的表达失调。DPC4基因的转录子长2 680 bp，编码552个氨基酸组成的蛋白，共有11个外显子，10个内含子，其cDNA全长1 656个碱基，与果蝇的有丝分裂阻滞缺陷蛋白(MAD)同源，这些蛋白都是TGF-β超家族信号转导的成员，参与细胞内信号转导〔7，8〕。TGF-β1是一种多功能肽，调节细胞的增殖和凋亡，在组织的发育、再生、修复中起重要作用〔9，10〕。也有研究认为DPC4既是TGF-β超家族受体的直接底物，也是将受体信号传递到核内的介质〔11，12〕。近年也有学者认为DCP4具有调节细胞黏附和侵入的潜在功能，同时有抑制肿瘤组织的血管增殖作用〔13〕。潘小季等〔14〕研究DPC4在胰腺癌组织中的表达，发现DPC4在胰腺癌中表达的阳性率明显低于慢性胰腺炎组织，认为DPC4是胰腺癌中的一种抑癌基因，DPC4表达改变对胰腺癌的发生、发展可能起重要作用。

本研究提示DPC4、TGF-β1和KI67三种蛋白异常表达与口腔鳞癌肿瘤性改变有关。提示DPC4低表达、TGF-β1和KI67高表达可以有效促进肿瘤的形成和肿瘤的生长。DPC4正常表达时对肿瘤是一种抑制作用，DPC4低表达时具有调节细胞黏附和侵入肿瘤间质的功能，同样DPC4正常表达时对血管形成有一定的抑制作用〔15〕，当其表达下调后DPC4对肿瘤血管的抑制作用减弱，血管内皮的增殖作用明显，肿瘤血管生成增多，局部血供增强，肿瘤细胞营养供给增加，肿瘤体积增大〔16〕。本文提示三种蛋白异常表达参与肿瘤性坏死的形成。相关性分析提示三种蛋白具有协同作用，即DPC4与TGF-β1具有负向协同性，异常表达时对细胞增殖起重要影响，这也是DPC4与TGF-β1异常表达时对肿瘤细胞调节的重要功能之一〔17，18〕。但是DPC4与TGF-β1在肿瘤作用过程中的调节机制可能更趋于多元性，其调节过程及机制有待更多实验证实。

1Zhang H，Dziegielewski PT，Jean Nguyen TT，etal.The effects of geography on survival in patients with oral cavity squamous cell carcinoma〔J〕.Oral Oncol，2015；51(6)：578-5.

2Sappayatosok K，Phattarataratip E.Overexpression of claudin-1 is associated with advanced clinical stage and invasive pathologic characteristics of oral squamous cell carcinoma〔J〕.Head Neck Pathol，2015；9(2)：173-80.

3Lin X，Liang M，Liang YY，etal.Activation of transforming growth factor-beta signaling by SUMO-1 modification of tumor suppressor Smad4/DPC4〔J〕.J Biol Chem，2003；278(21)：18714-9.

4Schwarte-Waldhoff I，Schmiegel W.Smad4 transcriptional pathways and angiogenesis〔J〕.Int J Gastrointest Cancer，2002；31(1-3)：47-59.

5Yamamoto T，Kimura T，Ueta E，etal.Characteristic cytokine generation patterns in cancer cells and infiltrating lymphocytes in oralsquamous cell carcinomas and the influence of chemoradiation combined with immunotherapy on these patterns〔J〕.Oncology，2003；64(4)：407-15.

6Prime SS，Game SM，Matthews JB，etal.Epidermal growth factor and transforming growth factor alpha characteristics of human oral carcinoma cell lines〔J〕.Br J Cancer，1994；69(1)：8-15.

7熊开琴，张秀辉.抑癌基因DPC4与胰腺癌的研究进展〔J〕.中国普外基础与临床杂志，2005；12(4)：422-3.

8黄文莉，官德元，吴绍新，等.非小细胞肺癌中DPC4基因的表达及其与凋亡的关系〔J〕.右江民族学院学报，2005；27(6)：786-8.

9Chen H，Wang JW，Liu LX，etal.Expression and significance of transforming growth factor-β receptor type Ⅱ and DPC4/Smad4 in non-small cell lung cancer〔J〕.Exp Ther Med，2015；9(1)：227-31.

10Holloway S，Davis M，Jaber R，etal.A clinically relevant model of human pancreatic adenocarcinoma identifies patterns of metastasis associated with alterations of the TGF-beta/Smad4 signaling pathway〔J〕.Int J Gastrointest Cancer，2003；33(1)：61-9.

11廖东卫，柯尊富，朱润庆，等.DPC4基因在非小细胞肺癌中的表达及其与微血管形成的关系〔J〕.武汉大学学报(医学版)，2006；27(1)：13-7.

12Demagny H，Araki T，De Robertis EM.The tumor suppressor Smad4/DPC4 is regulated by phosphorylations that integrate FGF，Wnt，and TGF-β signaling〔J〕.Cell Rep，2014；9(2)：688-700.

13官德元，黄文莉，刘 萍，等.DPC4基因在肺癌中的表达及其与微血管形成和凋亡的关系〔J〕.肿瘤防治研究，2005；32(12)：761-3.

14潘小季，孙维佳，欧阳建怡.胰腺癌中DPC4/SMAD4、nm23-H1/NDPK的表达及其意义〔J〕.中国医师杂志，2005；7(4)：454-6.

15吴绍新，官德元，张敬芳，等.非小细胞肺癌中DPC4基因的表达与微血管形成的关系〔J〕.临床肿瘤学杂志，2005；10(6)：633-5.

16柯尊富，朱润庆，聂 蓉，等.非小细胞肺癌中DPC4基因的表达及其与微血管形成的关系〔J〕.数理医药学杂志，2005；18(3)：221-3.

17Isaksson-Mettavainio M，Palmqvist R，Forssell J，etal.SMAD4/DPC4 expression and prognosis in human colorectal cancer〔J〕.Anticancer Res，2006；26(1B)：507-10.

18Cattaneo M，Orlandini S，Beghelli S，etal.SEL1L expression in pancreatic adenocarcinoma parallels SMAD4 expression and delays tumor growth in vitro and in vivo〔J〕.Oncogene，2003；22(41)：6359-68.

郭婧玉(1984-)，女，硕士，主治医师，主要从事侵袭性牙周病致病因素研究。

王禹锟(1983-)，女，硕士，主治医师，主要从事口腔颌面部肿瘤侵袭性研究。

R739.8

A

1005-9202(2017)20-5061-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.20.048

〔2016-07-17修回〕

(编辑 苑云杰)