一个全面性癫痫伴热性惊厥附加症家系的临床表型及SCN1A基因突变筛查

綦 莹，王春雨，于淑杰，王 葳，李冠群

（哈尔滨市儿童医院神经内科，黑龙江 哈尔滨 150010）

一个全面性癫痫伴热性惊厥附加症家系的临床表型及SCN1A基因突变筛查

綦 莹，王春雨，于淑杰，王 葳，李冠群

（哈尔滨市儿童医院神经内科，黑龙江 哈尔滨 150010）

目的总结全面性癫痫伴热性惊厥附加症家系（GEFS+）遗传规律及临床表型，并分析有无钠通道α1亚单位基因（SCN1A）突变。方法 收集先证者及家系成员临床资料（起病年龄、发作形式、预后情况等），绘制家系谱，总结该家系患者的临床特征。收集家系成员的外周血，对先证者及家系成员和对照组SCN1A基因全部外显子进行测序、比对。结果 该家系临床表型包括热性惊厥（FS）、热性惊厥附加症（FS+）、无热全面强直阵挛发作（AGTCS）、FS+伴失神发作，该样本分析到SCN1A基因有1个杂合突变：c.2591C＞T（编码区第2591号核苷酸由胞嘧啶变异为胸腺嘧啶），导致氨基酸改变p.T864M（第864号氨基酸由苏氨酸变异为甲硫氨酸），为错义突变。结论 全面性癫痫伴热性惊厥附加症具有表型异质性和遗传异质性，可由SCN1A基因的错译突变导致。

全面性癫痫伴热性惊厥附加症；SCN1A基因；家系；突变

全面性癫痫伴热性惊厥附加症（generalized epilepsy with febrile seizures plus，GEFS+）是一种儿童期发病的特发性癫痫综合征，通常以一个家系为研究整体，它的遗传方式通常为常染色体显性遗传，最常见的发作形式为热性惊厥（Febrile seizures，FS）和热性惊厥附加症（Febrile seizures plus，FS+）[1-2]。目前发现相关基因主要有SCN1B、SCN1A、SCN2A、GABRG2和GABRD，其中电压依赖性钠通道α1亚基基因（SCN1A）突变与癫痫联系最密切[3-4]，本研究选择一我国北方地区GEFS+家系进行临床表型分析，绘制家系谱，以总结其遗传规律，对SCN1A基因进行突变筛查，以探讨SCN1A基因在这一GEFS+家系中的突变情况，分析变异遗传方式，以及基因型与表型的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

一个GEFS+家系，来自中国黑龙江省汉族人。先征者于2015年1月～2017年1月在哈尔滨市儿童医院神经科门诊就诊，就诊年龄6岁，跟踪随访2年。该家系中四代成员共有34人，有惊厥病史共11人，其中男5例，女6例，平均发病年龄1～5岁。另外随机选取30例健康对象。

1.2 家系成员表型分析

根据ILAE2010年癫痫发作与癫痫综合征分类标准[5]，对所有先证者及家系其他受累成员的起病年龄、发作形式、发作频率及预后情况、脑电图特点及头颅影像学资料等进行分析，绘制家系图，见图1。

图1

1.3 方法

抽取该家系8名家系成员（7名患者及1名健康成员）及30名正常对照的外周静脉血4 mL，使用QIAGEN公司DNA提取试剂盒进行基因组DNA提取。设计SCN1A基因的全部外显子的扩增引物（由上海生工公司合成）。对所有患者及30例正常对照组进行PCR扩增。PCR产物纯化后送上海生工公司进行测序分析。将测序结果与GenBank中SCN1A全基因组序列进行比对，对测序结果进行分析。

2 结 果

该家系共4代34人，有患者11例，其中男性5人，女性6人。此GEFS+家系每代都有惊厥发作患者，并且男女患者兼有，呈典型的常染色体显性遗传方式。家系图谱如图1所示。先证者，男，8岁，于13个月时发热后首次出现抽搐发作，13个月-3岁共出现热性惊厥6次，3岁后出现无热抽搐，发作类型均为AGTCS，每年发作4-5次，VEEG检查发作间期额、颞部散在尖波、尖漫波，头颅MRI均未见异常，于6岁开始口服丙戊酸钠至今2年，无抽搐发作。家系成员Ⅰ2代及Ⅱ9（有年幼抽搐发作史，具体发作形式及发病年龄不详）已去世，Ⅱ2、Ⅱ5、Ⅲ2、Ⅲ3、Ⅲ9、Ⅲ15、Ⅳ4等7人均有5岁前高热后强直阵挛FS发作史，其中Ⅱ2在5岁后出现无热抽搐病史（AGTCS发作），1～2次/年，智力、语言及运动发育均正常，未予治疗，于8岁后未再出现抽搐，其余6人5岁后抽搐自然停止。Ⅳ1表现为热性惊厥附加症（FS+）伴失神发作，脑电图表现为双侧对称的3Hz棘-慢波，因发作不频繁，目前未予药物治疗。

首先对先证者的SCN1A进行测序。该样本分析到SCN1A基因有1个杂合突变：c.2591C＞T（编码区第2591号核苷酸由胞嘧啶变异为胸腺嘧啶），导致氨基酸改变p.T864M（第864号氨基酸由苏氨酸变异为甲硫氨酸），为错义突变。我们随后对家系中Ⅱ2、Ⅱ5、Ⅲ2、Ⅲ3、Ⅲ9、Ⅳ4进行测序他们都有这个突变，而我们对家系内的Ⅳ3（健康，无惊厥发作）进行测序没有发现这个突变位点。测序结果如图2、图3所示。最后7名患者和30例正常对照的PCR产物的测序结果与基因组序列相对比，均未发现碱基改变。该位点为致病性变异。

图2 家系中先证者测序结果

图3 家系中正常人测序结果

3 讨 论

GEFS+是近年来研究较多的一种癫病综合征，SCN1A基因为GEFS+家系的重要致病基因[6-7]，研究报道外显率为60%～70%[8]。而本研究中，家系全部受累者均存在同一SCN1A基因突变位点，未受累者中未发现SCN1A突变情况，外显率高于文献报道，但本研究中有一些家系成员的标本未采集全，可能对结果有所影响。GEFS+常有癫痫或FS家族史，一个家族中可有多种发作形式，多数仅表现为FS，但部分病人6岁后出现无热性强直-阵挛的发作，称为FS+。较少见的发作类型包括FS+伴失神发作、FS伴肌阵挛发作、FS+伴失张力发作、FS伴颞叶癫痫（TLE）等，GEFS+多数呈良性经过，智力运动发育正常，一般预后良好。本发研究家系现家族四代人均有发病，男女兼有，家系成员发作类型有FS、FS+、FS+伴失神发作，同一个基因的同一个突变导致不同的临床表型，符合文献报道的存在表型异质性[9-10]。

研究表明GEFS+是“离子通道病”[11]，其中GEFS+的大多数突变是在SCN1A上发现的，突变类型有剪切、错义、缺失等，一般认为错义突变对蛋白质的功能影响相对差异比较小，可导致钠通道兴奋性增加或降低，从而导致较轻的临床表型。我们的研究也证实了这一点，家系中全部患者均呈良好过程，除先证者药物控制发作外，其余患者随年龄增长，抽搐均自行停止，并未发现文献报道的其它严重发作类型。通过本家系SCN1A基因筛查，发现一个SCN1A基因的杂合突变，c.2591C＞T（编码区第2591号核苷酸由胞嘧啶变异为胸腺嘧啶），导致氨基酸改变 p.T864M（第864号氨基酸由苏氨酸变异为甲硫氨酸），为错义突变。该变异不属于多态性位点，在人群中发生频率极低。HGMD专业版数据库已报道与GEFS+2相关。经家系验证分析，该位点为致病性变异，是该家系的致病原因。

本研究报道了我国黑龙江地区一GEFS+家系，与国内外研究相符合，存在表型异质性及异常异质性，发现了致病性基因突变，此突变非新的突变位点，但目前国内关于致GEFS+的SCN1A基因此位点突变尚未见报道，可能与我国地域差异有关。黑龙江地区GEFS+家系研究未见相关报道，本研究，样本例数少，需进一步收集更多的家系，提高基因筛查技术水平，为基因诊断和遗传咨询奠定基础。

[1] Wallace RH,Wang DW,Singh R,et al.Febrile seizures and Gener alized epilepsy associated with a mutation in the Na(+)-channel beta-1 subunit gene SCN1B[J].Nature Genet,2008,19:366-370.

[2] Scheffer IE,Berkovic SF.Generalized epilepsy with febrile seizures plus.A genetic disorder with heterogeneous clinical phenotypes.Brain,2007,120:479-490.

[3] Pineda-Trujillo N,Carrizosa J,Comro W,et a1.A novel SCN1A mutation associated with severe GEFS + in a large South American pedigree.Seizure,2005,14:123-128.

[4] Nagao Y,Mazaki-Miyazaki E,Okamura N,et al.A family of generalized epilepsy with febrile seizures plus type 2-a new missense mutation of SCN1A found in the pedigree of several patients with complex febrile seizures.Epilepsia Res,2005,63:151-156.

[5] Berg AT,Berkovic SF,Brodie MJ,et al.Revised terminology and concepts for organization of seizures and epilepsies:report of the ILAE Commission on Classification and Terminology,2005-2009[J].Epilepsia,2010,51(4):676-685.

[6] Harkin LA,Bowser DN,Dibbens LM,et al.Truncation of the GABA(A)-receptor gamma subunit in a family with generalized epilepsy with febrile seizures plus[J].Am J Hum Genet,2002,70(2):530-536.

[7] Wallace RH,Wang DW,Sinsh R,et al.Febrile seizures and generalized epilepsy associated with a mutation in the Na+-channel beta1 subunit gene SCN1B[J].Nat Genet,2008,19(4):366-370.

[8] Scheffer IE,Zhang YH,Gecz J,et al.Genetics of the epilepsies:genetic twists in the channels and other tales[J].Epilepsia,2010 51(Suppl 1):33-36.

[9] Wang J.Clinical analysis of febrile convulsion:a report of 174 cases[J].China J Pract Intern Med,2006,26(S1):131-132.

[10] 许小菁,张月华,孙慧慧,等.全面性癫痫间伴热性惊厥附加症39个家系的临床表型和SCN1A基因突变分析.中华儿科杂志,2012,50(8):580-586.

[11] 于美娟,陈 俐,高玫梅,等.具有SCN1A基因错义突变(R1596C)的遗传性GEFS+家系1例报道.现代医院,2009,9:3-5.

R742.1

B

ISSN.2095-8242.2017.46.8952.02

哈尔滨市儿童医院科研种子基金资助项目（HEY201403）

本文编辑：吴玲丽