血浆ADMA和血小板膜糖蛋白在急性脑梗死患者中的表达及关系的研究

邱伟庆

山东省莱州市人民医院神经内科(莱州261400)

血浆ADMA和血小板膜糖蛋白在急性脑梗死患者中的表达及关系的研究

邱伟庆

山东省莱州市人民医院神经内科(莱州261400)

目的：分析血浆非对称二甲基精氨酸(ADMA)及血小板膜糖蛋白CD62P、FIB-R对脑梗死的影响及ADMA、CD62P、FIB-R与脑梗死之间的相互关系。方法：收集急性脑梗死患者30例(脑梗死组)及健康体检者25例(对照组)，采用高效液相色谱法检测两组的血浆ADMA水平，流式细胞术检测血小板表面活性标记糖蛋白CD62P、FIB-R表达。应用直线相关分析法分析脑梗死组血浆ADMA与中风危险因素及血小板膜糖蛋白表达之间的关系，并探讨ADMA对脑梗死的影响。结果:急性脑梗死组血浆ADMA浓度、血小板膜糖蛋白CD62P、FIB-R增高，分别与对照组比较，均有统计学差异(P均<0.05)；胆固醇，高血压，糖尿病，ADMA与脑梗死发病相关，脑梗死患者ADMA浓度与血小板膜糖蛋白CD62P、FIB-R正相关。结论：血浆ADMA及血小板膜糖蛋白CD62P、FIB-R与脑梗死发病有一定相关性，血浆ADMA浓度增高主要通过影响血小板活化引起脑梗死的发生。

近年来，脑梗死的发病率逐渐增高。在脑梗死发病过程中血小板活化起重要作用，临床可通过检测患者血浆血小板膜糖蛋白来观察血小板活化水平。同时，许多研究表明，脑梗死患者血浆非对称二甲基精氨酸(Asymmetric dimethylarginine，ADMA)增高。ADMA可作为心脑血管病独立的危险因子与病死率预测因子[1]。其竞争性与eNOS特异性相结合，从而减少NO生成[2]，因此，其对NO的合成起非常重要的调节作用[3]。本研究旨在观察急性脑梗死患者血小板膜糖蛋白和ADMA的表达水平，同时观察其相互关系，为更好地探索脑梗死的发病机制及治疗手段提供进一步依据。

资料和方法

1 一般资料 选择2016年6月至2017年1月间急性脑梗死患者30例(脑梗死组)，男22例，女8例，年龄55～75岁，平均年龄(64.10±11.15)岁，其中吸烟者13例。所选取的病例符合《中国急性缺血性卒中诊疗指南2014》关于脑梗死的诊断标准[4]，均为初次发病，发病前2周及发病后48h内均未服用任何影响检测血小板的药物。排除脑出血、肾功能衰竭、肿瘤、甲状腺机能减退、长期服用维生素、雌激素等患者。另外选择我院体检中心的健康查体者25例(对照组)，男13例，女12例，年龄55～72岁，平均年龄(60.56±5.08)岁，其中吸烟者7例。两组一般资料比较差异无统计学意义(P均>0.05)，且排除上述疾病且无血缘关系。

2 检测方法 使用流式细胞仪(美国BECTON-DICKSON公司)，色谱柱 Kromasil(琛航公司)，高效液相色谱仪(Waters-600E)，RF-10AXL荧光检测器(日本岛津公司)。于入院次日清晨(空腹8 h)留取两组静脉血4 ml置于EDTA 真空采血管中，快速加盖，颠转混匀5次，10 min之内进行血小板激活和染色，标本在24 h内上机分析，获取数据。同时采取外周静脉血5 ml，将其置于EDTA 真空采血管中。室温静置30 min，2 500 r/min离心15 min，离心半径10 cm，留上层血浆置于-80 ℃冰箱保存，以备测量ADMA。将血浆样品加氰化钾溶液30 ml，混匀30 s，室温静置10 min；加入NDA应用液30 ml，置室温保持20 min，冰浴终止反应，取50 μl进行HPLC 分析。

3 统计学方法 应用SPSS 15.0统计学软件，计量资料以均数±标准差表示，采用t检验及方差分析(ANOVA)，并行Pearson相关分析。应用Logistic回归分析对ADMA和其他危险因素与脑梗死的关系进行评估。P<0.05认为有统计学差异。

结 果

1 两组腹围、体重指数及合并症比较 脑梗死组腹围、胆固醇含量、高血压、体重指数及糖尿病等指标均高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 两组腹围、体重指数及合并症比较

2 两组ADMA及血小板膜糖蛋白表达比较 脑梗死组ADMA表达高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；脑梗死组FIB-R表达高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；脑梗死组CD62P表达高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 两组血浆ADMA浓度和

注：与对照组比较，*t=4.084，P<0.05；△t=6.427，P<0.05；▲t=8.734，P<0.05

3 脑梗死组危险因素多因素非条件Logistic回归分析 结果显示，腹围、体重指数、胆固醇、高血压、糖尿病、ADMA与脑梗死的发病有关(P<0.05)。Logistic回归分析显示，胆固醇、高血压、糖尿病、ADMA与脑梗死发病相关，优势比分别为1.236、3.568、3.969及1.104(P均<0.05)，提示其可作为脑梗死的独立危险因素，见表3～4。

表3 脑梗死组危险因素与单因素分析

表4 脑梗死组危险因素与多因素非条件Logistic回归分析

4 脑梗死患者血浆ADMA浓度与血小板膜糖蛋白表达及中风危险因素关系 结果显示，脑梗死患者血浆ADMA浓度与FIB-R、CD62P、年龄、高血压呈正相关(P均<0.05)；与腹围、胆固醇、体重指数、糖尿病、吸烟无相关性(P>0.05)，见表5。

表5 血浆ADMA浓度与血小板膜糖蛋白表达及中风危险因素的关系

讨 论

以往研究发现，韩国人群脑梗死患者血浆ADMA浓度升高[5]。另一项研究证实血浆ADMA增高与颈动脉内膜中膜厚度有关[6]。ADMA与脑梗死的发生关系密切，并且可以作为缺血性脑血管病的独立危险因素[7]。ADMA抑制血管NO生成，而NO可以抑制血小板黏附、聚集，提示了ADMA在脑血管病发病过程中起了重要作用[8]。脑梗死发生发展主要与血小板具有的活化功能有关，血小板膜纤维蛋白原受体表达及GPⅡb/Ⅲa复合物含量增加，可以作为血小板活化的重要标志，FIB-R和CD62p是目前检测早期和晚期血小板活化程度和功能状态的特异性标志物[9-11]。

动脉粥样硬化是脑梗死的主要病因。研究表明，血浆升高的ADMA浓度与脑梗死的危险因素如高脂血症、糖尿病、高血压等呈正相关。先前的研究结果显示，脑梗死患者血浆ADMA浓度高于对照组[12-13]，与本研究结果一致。但仅凭此结果尚不能证明ADMA浓度升高与脑梗死的因果关系。Yoo等[5]研究提示，血浆ADMA浓度升高在脑血管病发病中起重要的角色。ADMA通过影响脑血管血液循环[14]，增加发病危险因素，提高脑血管紧张度[15]。本研究显示，胆固醇、高血压、糖尿病等危险因素与脑梗死关系密切，患者血浆ADMA浓度与脑梗死有一定相关性，提示血浆ADMA增高可以作为脑血管病的危险因素之一。同时，本研究显示，血浆ADMA浓度与高血压、年龄成正相关，但并未发现血浆ADMA浓度与胆固醇[8]、糖尿病有明显相关性，同时也未发现患者血浆ADMA浓度与体重指数、吸烟、腹围等脑血管病危险因素相关性。ADMA通过损害NO依赖的内皮功能起作用，但有别于其他传统脑血管病的危险因素。因此我们推测ADMA可以作为脑血管病其他传统危险因素以外的独立危险因素。

本研究还显示，脑梗死患者血浆ADMA浓度与血小板膜糖蛋白FIB-R、CD62P成正相关，提示血浆ADMA浓度的增高的同时，血小板膜糖蛋白FIB-R、CD62P也随之增高。支持血浆ADMA与脑梗死的关联性部分是通过影响血小板活化功能起作用的。血小板活化可以作为脑血管闭塞的元凶。NO既是舒血管因子，还可以抗血小板的黏附和聚集。ADMA作为内源性eNOS的抑制物，可以减少NO生成。可见，ADMA可能是通过NO依赖的途径影响脑梗死患者血小板活化功能。因此，我们可以通过减少ADMA的生成，降低血小板活化功能来治疗脑梗死。

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(收稿：2017-04-19)

脑梗塞 @非对称二甲基精氨酸 血小板膜糖蛋白类

R743.33

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2017.10.043