西安地区流产绒毛组织72例染色体核型分析

李金鸽，王惠仔，吕根芳

1.西北妇女儿童医院(西安710061)，2.西安市碑林区柏树林社区卫生服务中心(西安710001)

△通讯作者

西安地区流产绒毛组织72例染色体核型分析

李金鸽1，王惠仔1，吕根芳2△

1.西北妇女儿童医院(西安710061)，2.西安市碑林区柏树林社区卫生服务中心(西安710001)

目的：研究自然流产绒毛组织的染色体核型，分析自然流产的原因。方法：收集72例自然流产患者的绒毛组织，进行绒毛细胞的培养，染色体收获和G显带法进行染色体核型分析。结果：72例绒毛组织，培养成功52例，异常染色体核型27例，异常率51.92%。异常的染色体核型中，数目异常19例，结构异常7例，数目结构均异常1例。结论：自然流产的主要原因可能是染色体核型异常，分析染色体核型有助于流产患者的再次生育计划。

自然流产是孕妇早期妊娠期经常遇到的一类难题，全球在孕期发生自然流产的孕妇有6%～15%，其原因主要包括胚胎原因、母体疾病、母体解剖结构异常、内分泌功能异常、免疫反应异常以及其他因素，如胎盘界面上增多的NK细胞，血清中血红素氧化酶1(HO-1)等，其中胚胎因素中是自然流产的最常见的原因[1-4]。为了更好的探究西安地区流产与染色体核型的关系和避免再次妊娠流产的发生，以及西安地区自然流产患者染色体核型异常率，我院收集了72例流产绒毛组织，对其进行细胞培养和G显带法的染色体核型分析。

对象与方法

1 研究对象 2015年8月至2016年9月在我院计划生育门诊以自然流产或者胚胎停育就诊的72例孕妇为研究对象，孕周6～14周，孕妇年龄22～35岁。对每位研究者进行手术清宫术，取流产组织的绒毛组织进行染色体检测。排除：全身性疾病、生殖器官异常、内分泌异常、躯体与心理的不良刺激等因素。所有研究均经过患者同意并均签署知情同意书。

2 研究方法 ①绒毛培养：将取出的绒毛组织放入装有生理盐水的玻璃瓶中保存，取适量的绒毛组织用0.9%的无菌生理盐水进行冲洗，在倒置显微镜下选取合适的绒毛，加入胶原酶，在37 ℃的恒温箱中培养消化1 h，离心，去上清液，加入0.05%的胰酶液再次消化1 h，1500 r/min，8 min离心，弃上清，加入2 ml培养液，将绒毛组织吹打，形成单个细胞。接种于全培养基培养瓶中，并放入CO2培养箱中培养3～5 d。当观察到梭形细胞后，置换培养箱，并加入秋水仙素，3 h后收取细胞。②染色体收获：用生理盐水反复冲洗培养瓶，并加入0.25%胰酶消化贴壁细胞，获得液体后，倒入离心管中。离心，去上清。加入37 ℃的0.075 mmol/L的氯化钾低渗液，8 min后立即加入甲醛∶冰醋酸(3∶1)固定液1 ml于37 ℃水温箱中5 min，离心10 min，弃上清。再次加入10 ml固定液放置30 min，共2次。离心后，把细胞沉淀物滴于干净载玻片上。③G显带法：将备好的绒毛标本放于胰酶溶液中消化1 min，立即用生理盐水洗涤。最后用10%姬姆萨(Giema)染色。

结 果

72例流产组织的绒毛，其中绒毛细胞培养成功52例，失败20例，成功率为72.22%。异常染色体核型27例(51.92%)，其中染色体数目异常核型19例(70.37%)，染色体结构异常核型7例(25.92%)，染色体数目结构均异常1例(5.26%)，见表1。

表1 27例流产组织绒毛染色体异常核型

讨 论

近几年来，人类自然流产的发生率越来越高，据统计总的流产率已经高达50%左右[5-6]，而且自然流产的次数越多，其自然流产的机率就越大。如此高的自然流产率已经严重的影响到人们的生活质量，不仅严重伤害了孕者的身心健康，甚至对孕者家庭和社会的稳定造成影响。据国内外研究报道，自然流产的主要原因为染色体核型异常，大约有57%的自然流产是染色体畸形引起的[7-8]。人类染色体核型畸形产生的主要原因包括环境和药物对胚胎的影响，以及胚胎在自身发育过程中所形成的错误，如人类发育早期存在很高的细胞减数分裂错误等。

本文收集72例自然流产者，提取绒毛组织，进行细胞培养，成功52例，失败20例，成功率达72.3%。培养失败者可能是因为流产组织取出时被污染，或者流产组织的新鲜度不够。经过培养后的绒毛细胞，提取染色体进行分析，发现52例中异常染色体核型有27例，异常率为51.92%，与文献报道的发现自然流产的染色体核型异常率一致[9-11]。其中27例中，染色体数目异常19例，结构异常7例，结构和数目均异常1例。19例数目异常的核型中，有2例单体，17例都为三体，因此在数目异常染色体核型中，三体最常见，本文中三体分别有9，14，16，18，21，22染色体，均为以前研究中经常报道所见的[12 ]。三体形成的主要原因在于父母双方的配子在形成受精卵时，其中父方或者母方的染色体未分裂。在对患儿的父母双方进行染色体核型检测后，发现父方，母方的染色体核型存在平和易位时，下一代的患病率显著增加，由于染色体数目的增加，导致基因产物的严重流失，故其很难存活。最常见的便是21三体综合征，但其一般出生儿童具有先天愚型或者先天性心脏病，严重的影响生活质量[13]。除了三体染色体异常外，本文中还发现单体(45，X)基因型，其产生的主要原因是患者双亲之一的细胞分裂过程中X染色体不分离所致。

染色体结构异常的类型以染色体缺失、重复、倒位、易位为主，最常见主要是倒位和易位。染色体易位是两个非同源染色体相互交换片段形成的。易位中最常见的又为罗伯逊易位。染色体倒位是由发生两次断裂的染色体异常重接所形成。在本文中，我们发现了7例结构异常的染色体核型，其中有2例倒位的染色体核型(46，XX，inv(14)(p13;q11))，3例易位的核型。其中两例易位的核型均为罗伯逊易位。罗伯逊易位是由2条近端着丝粒染色体，在着丝粒附近断裂重新连接后，所形成的异常染色体核型，其断裂点是随机的。研究表明罗伯逊异位核型的丰富性是与异位断裂点复杂性相关的[14]。这种罗伯逊易位的患儿，其父母可能为罗伯逊易位者或者携带者，故检测染色体核型对这种家庭类型有很大帮助。近几年来研究发现染色体核型分析虽然能发现罗伯逊易位，但不能明确易位的染色体来源，而荧光原位杂交技术(FISH)为这提供可能。

综上所述，西安地区自然流产的患者中，染色体数目异常可能主要的原因。因此，对自然流产的患者进行染色体核型分析有利于对流产的原因及时做出分析，并指导再次生育，以达到优生优育。

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(收稿：2017-02-01)

流产 绒毛 染色体 核型分析

R713.41

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2017.10.033