副干酪乳杆菌诱导Caco-2细胞凋亡及其发酵乳贮藏品质的研究

胡盼盼，刘新民，喻智强，白 建，陈历水*

（1.吕梁学院 生命科学系，山西 吕梁 033000；2.中粮营养健康研究院食品研发中心，北京 102209；3.老年营养食品研究北京市工程实验室，北京 102209）

副干酪乳杆菌诱导Caco-2细胞凋亡及其发酵乳贮藏品质的研究

胡盼盼1，刘新民1，喻智强1，白 建1，陈历水2，3*

（1.吕梁学院 生命科学系，山西 吕梁 033000；2.中粮营养健康研究院食品研发中心，北京 102209；3.老年营养食品研究北京市工程实验室，北京 102209）

以新疆马奶酒中自行分离得到的副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）M5L为对象，研究该菌株对结肠癌Caco-2细胞的抑制作用并分析发酵乳贮藏品质变化。结果表明，副干酪乳杆菌M5L可以在一定的盐浓度、胆盐浓度及酸性环境中较好的生长。当菌体以100∶1的感染系数作用于Caco-2细胞72 h后抑制率最佳；显微镜下观察活菌处理后的细胞发生明显的凋亡现象；流式细胞仪检测到副干酪乳杆菌M5L可以诱导Caco-2细胞内活性氧显著增加，并将细胞周期阻滞在合成期，且通过增大Caspase-3和Bax基因表达量，降低Bcl-2基因表达量来促进肿瘤细胞的凋亡。其发酵酸乳贮藏5 d时品质较佳，长时间的贮存会导致酸乳品质的劣变。

副干酪乳杆菌；发酵乳；抗肿瘤

结肠癌（colorectal cancer）在近20年来的发病率和死亡率逐渐上升[1]，已成为严重威胁人类健康的高发性恶性肿瘤之一。结肠癌发病原因很多，但重要的诱发因素多与饮食有关，目前对于结肠癌的治疗以手术方法为主，辅以中医治疗或化疗、放疗等治疗方法，虽有一定的效果，但同时也给患者带来了严重的损害，且治疗后复发率较高，存活率较低，从而限制了其广泛的应用。大量实验研究以及临床结果表明，天然活性物质能够清除自由基，增强机体免疫力，抑制体内脂质过氧化，可以有效地干预许多恶性肿瘤的诱发[2]。

乳酸菌是目前最受关注的益生菌之一[3]，常常被用于酸乳和干酪等乳制品的发酵剂及辅助发酵剂，它不仅在一定程度上可以起到延缓衰老和延长寿命[4]、预防某些疾病、增强体质的保健型作用，还能促进机体微生物菌群和酶的平衡[5]，刺激机体发生特异性和非特异性的免疫机制。用其发酵所得的乳制品也具有很好的保健功能，可改善人体胃肠道功能[6]，使肠道菌群的构成发生有益变化，平衡人体肠道内的菌群比例，形成一道生物屏障，维护人体的健康，除此之外还具有免疫调节作用，增强人体免疫力和抵抗力[7]，从而起到抗肿瘤、预防癌症作用。本实验室前期从新疆马奶酒中筛选得到一株副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）M5L，该菌株产生的肽聚糖具有良好的生物活性[8-9]，但未对菌体本身的生理特性进行研究。因此，本研究以副干酪乳杆菌M5L为研究对象，测定其对结肠癌Caco-2细胞的抑制活性以及其发酵所得的酸乳在贮藏过程中品质变化，以期为其在乳制品中的应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

1.1.1 菌种

副干酪乳杆菌（Lactobacillusparacasei）M5L：从新疆马奶酒中筛选，现由哈尔滨工业大学食品科学与工程系保藏。

1.1.2 培养基

MRS液体培养基：蛋白胨10 g，牛肉膏8 g，酵母膏4 g，葡萄糖20g，乙酸钠5g，C6H14N2O72g，吐温-801mL，K2HPO42 g，MnSO4·4H2O 0.04 g，MgSO4·7H2O 0.2 g，水1 000 mL，pH值自然，121℃灭菌15 min。

1.1.3 化学试剂

结肠癌Caco-2细胞株：中国科学院上海细胞生物学研究所；细胞培养液（dulbecco's modified eagle medium，DMEM）：北京清大天一生物技术有限公司；胎牛血清：青旗（上海）生物技术发展有限公司；青链霉素混合液100X、胰酶-乙二胺四乙酸消化液、碘化丙啶（propidium iodide，PI）染液：北京索莱宝科技有限公司；噻唑蓝（3-（4,5-dimethyl-2-thiazolyl）-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，MTT）（分析纯）：上海碧云天生物技术有限公司；其余试剂均为国产分析纯。

1.2 仪器与设备

Thermo371型细胞培养箱：美国BD公司；ECLIPSETs2倒置相差显微镜：日本尼康株式会社PrimeQ荧光定量基因扩增仪：TaKaRa公司；680iMark酶标仪：美国Bio-Rad公司；TA-XT2质构测试仪：西安博宇电气有限公司；KV-T1分光光度计：南京肯凡电子科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 耐盐性的测定

预先将含量为0、2%、4%、6%、8%、10%的NaCl加入MRS培养基内，每管10 mL，灭菌待用。无菌条件下，将活化后的L.paracaseiM5L以3%的接种量分别接种到试管内，然后放在37℃培养箱内培养，每隔2 h取出，在波长600 nm处进行吸光度值测定[10]。

1.3.2 耐酸性的测定

预先将MRS培养基的pH分别调整至2、4、6、8、10，然后每管10 mL加入试管，灭菌待用。无菌条件下，将活化后的L.paracaseiM5L以3%的接种量分别接种到试管内，然后放在37℃培养箱内培养，每隔2 h取出，在波长600 nm处进行吸光度值测定[10]。

1.3.3 耐胆盐的测定

预先将含量为0、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%的胆酸钠加入MRS培养基内，每管10 mL，灭菌待用。无菌条件下，将活化后的L.paracaseiM5L以3%的接种量分别接种到试管内，然后放在37℃培养箱内培养，每隔2 h取出，在波长600 nm处进行吸光度值测定。

1.3.4 L.paracaseiM5L抗肿瘤活性的测定

（1）MTT法：调整细胞浓度为106个/mL，加入96孔板，每孔100 μL。将活菌体在DMEM完全培养液（不含双抗）中稀释，加入96孔板中。菌体与癌细胞的最终比例分别为1∶1、5∶1、10∶1、50∶1、100∶1，检测活菌对Caco-2细胞增殖的抑制作用，每个浓度5个平行。5%CO2、37℃条件下分别培养24 h、48 h、72 h后吸出培养液，每孔加入150 μL 磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）清洗两次，然后培养板每孔中加入0.5 mg/mL的MTT 100 μL，继续37℃培养4 h，然后将MTT小心吸出，向每孔中加入150 μL二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide，DMSO），置于摇床振荡10 min，以溶解沉淀。用酶标仪在波长490 nm处测定吸光度值，计算肿瘤细胞抑制率。

（2）倒置显微镜观察细胞形态：胰酶消化细胞，调整Caco-2细胞浓度为1×106个/mL，每孔2 mL加入6孔板，培养一天待细胞贴壁后，吸走培养液，分别加入2 mL新鲜的培养基，将100∶1感染系数的L.paracaseiM5L加入6孔板中，对照组中不加，5%CO2、37℃培养72 h，倒置显微镜（×400）下观察细胞数量和形态变化。

（3）细胞周期的测定：将细胞以1×106接种于6孔培养板中培养，每孔2 mL。待细胞长满后，换含有乳酸菌的不含双抗的培养液加入菌体使感染系数为100∶1，继续培养；培养72 h时弃去培养液，用不含EDTA的胰酶加入消化，待细胞脱落后，加培养液终止消化，加入1.5 mL离心管中离心（1 000 r/min、5 min）；同时将废弃液离心，然后将剩余细胞与贴壁细胞混合；用4℃预冷PBS离心冲洗两次（1000r/min、5 min）；加入事先-20℃预冷的体积分数70%的乙醇1 mL，放于4℃过夜固定；1 000 r/min离心5 min去除固定液，加入PBS洗两次（1 000 r/min、5 min）；加入0.5 mL的PI染液（含100 μg/mL RnaseA，100 μg/mL 0.2%Triton X-100），避光30 min上样到流式细胞仪检测。

（4）活性氧（reactive oxygen species，ROS）测定：按照1∶1000比例用无血清培养基稀释DCFH-DA染液，使其终浓度为5mmol/L。将对照组和100∶1感染系数的乳酸菌处理72h后的细胞培养液移弃，分别加入1mL稀释好的DCFH-DA染液充分遮盖住所有细胞。放置到37℃细胞孵箱内，黑暗环境孵育30min后，PBS洗涤2次，以除去未进入细胞内的DCFH-DA探针。胰酶消化并收集各组的Caco-2细胞，PBS清洗2次，迅速放置到流式细胞仪进行荧光信号检测（激发波长488nm，发射波长525 nm），最终DCF荧光的值大小来反映细胞内ROS量的多少。

（5）RT-PCR：用L.paracaseiM5L孵育Caco-2细胞72 h后，采用Trizol法提取Caco-2细胞的总RNA，之后参照逆转录试剂盒说明逆转录为cDNA。再以cDNA为模板，进行扩增反应，反应条件：50 ℃、2 min，95 ℃、10 min，95 ℃、16 s，60℃、55 s，共进行40循环，同时采用Real-time PCR检测bcl-2、bax、Caspase-3mRNA的表达水平，结果以β-actin为内参，bax/β-actin、bcl-2/β-actin、Caspase-3/β-actin密度比值显示，并将反应后产物进行琼脂糖凝胶电泳，最后拍照并记录数据。

1.3.5 L.paracaseiM5L发酵乳贮藏品质的测定

（1）酸度和pH变化：全脂复原乳（蔗糖6.5%、全脂粉11.5%）预热至60℃，均质后在95℃条件下杀菌5 min，冷却至42℃备用。将活化好的副干酪乳杆菌M5L发酵液（109CFU/mL）按5%接种量接种于已经灭菌好的全脂复原乳中，于42℃培养至pH值为4.5时结束，便制备好发酵乳，最后迅速置于冰水中冷却至4℃，放置于4℃冰箱，每隔一段时间取出测试pH和酸度。

（2）发酵乳贮藏条件下持水力的变化：发酵乳样品的持水力采用离心法进行测定。定期称取发酵乳凝胶样品约10 g，4 000×g离心30 min，倾去上清物吸干水分后立即称质量，每个样品做3个平行试样，结果取算术平均值。

（3）发酵乳贮藏条件下活菌数变化：将发酵乳放入4℃冰箱冷藏，分别在0 d、3 d、5 d、7 d、9 d、11 d、13 d后取出，采用MRS固体培养基测定4℃贮藏过程中乳酸菌数量的变化。将样品以10倍系列稀释，取1 mL为10-8稀释液于培养基中，涂板后置于37℃培养一段时间后计数。

（4）发酵乳表观硬度的测定：定期称取15.0 g发酵乳样品，将发酵乳调温至20～22℃，采用TA-XT2质构测试仪SMS P/25平底柱形探头（直径2.5 cm、高4 cm）进行测定。测定条件为：测前速率5.0 mm/s、测试速率2.0 mm/s、测后速率2.0mm/s，探头进入距离20mm，两次压缩之间停留时间5 s。利用质构数据分析软件由全质构曲线计算得到硬度值。

1.3.6 数据分析

本论文的所有实验均重复3次，实验结果以平均值±标准差表示，采用Origin 8.0，SPSS 19.0软件对实验数据进行作图和分析，“*”代表差异显著（P＜0.05），“**”代表差异极显著（P＜0.01）。

2 结果与分析

2.1 L.paracaseiM5L的生长特性

副干酪乳杆菌在不同盐含量、pH条件、胆盐含量条件下的生长情况见图1。

由图1可知，盐浓度能够影响菌体的生长，添加2%的NaCl溶液时，和原液生长状况相差不大，随着NaCl含量的增大，菌体的生长受到抑制，达到稳定期所用时间延长，当NaCl含量达到10%时，菌株几乎不生长。乳酸菌发挥其生理作用很大程度上取决于菌株是否能顺利通过胃的酸性环境以及耐受十二指肠的高胆盐环境，并以活菌的状态到达小肠，从而发挥微生态的调整功能[11]。由图2可知，pH=6的时候，和原液中菌体生长状况相似。酸性或碱性过强均可一定程度影响到菌体的生长情况，pH=2时菌体生长完全受到抑制。但pH=4时，菌体生长状况良好，说明具有一定的耐酸性。由图1可知，添加0.2%的胆酸钠与在原液中生长状况相似，随着胆酸钠含量的增加，菌体的生长状况受到一定程度的抑制。

图1 L.paracaseiM5L在不同盐浓度（A）、pH（B）胆盐浓度（C）条件下的生长状况Fig.1 Growth condition ofL.paracaseiM5L in different NaCl concentration(A),pH(B)and bile salt concentration(C)

2.2 L.paracaseiM5L抗肿瘤活性的测定

2.2.1 MTT实验结果

将副干酪乳杆菌活菌体按照1∶1、5∶1、10∶1、50∶1、100∶1的感染系数作用于结肠癌Caco-2细胞，分别作用24 h、48 h、72h，然后MTT法检测肿瘤细胞的增殖抑制率，结果见图2。

由图2可知，抑制率呈现出时间和感染系数依赖性，时间越长，感染系数越大，对Caco-2细胞的抑制效果越好。活菌体作用于癌细胞24 h后，癌细胞抑制率较低，各感染系数组间抑制率没有明显差异，作用48 h后抑制率有一定的增大，但总体来说作用于癌细胞24 h和48 h后，其增殖抑制作用不显著。当活菌体作用于癌细胞72h后，抑制率随感染系数增大而呈上升趋势，且抑制率效果最佳，与对照细胞相比，低感染系数的菌体对癌细胞的增殖抑制作用不明显，当感染系数达到100∶1时，菌体对癌细胞的抑制率最大，因此选为感染系数100∶1作用72 h用于后续的研究。

图2 MTT实验结果Fig.2 Results of MTT experiments

2.2.2 倒置显微镜结果

凋亡是指细胞在遵循自身程序，在一定生理和病理条件下由基因调控的主动性死亡过程，在此过程中，一般都会出现细胞形态的变化[12]。由图3可知，未经乳酸菌处理组的细胞生长旺盛，细胞形态正常，生长速度极快，细胞数量呈倍数增长，而经过100∶1感染系数副干酪乳杆菌处理72 h后细胞数量明显减少，细胞形态破碎，细胞皱缩变圆，细胞体积变小，细胞脱落甚至出现凋亡小体，这说明L.paracasei M5L能够明显抑制Caco-2细胞的生长。

图3 L.paracaseiM5L对Caco-2细胞形态的影响Fig.3 Effect ofL.paracaseiM5L on morphology of Caco-2 cell

2.2.3 细胞周期

细胞周期指连续分裂的细胞从上一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂完成所经历的整个过程，包含G1期、S期、G2期、M期四个阶段[13]。本试验将副干酪乳杆菌L.paracasei M5L活菌体按照100∶1的感染系数作用于结肠癌细胞Caco-2细胞72 h，由图4可知，活菌处理72 h后，G1期细胞数量显著减少（P＜0.05），G2期细胞数量无显著变化，而S期细胞数量显著增加（P＜0.05），说明L.paracaseiM5L导致Caco-2细胞发生了周期阻滞，主要阻滞在S期，即合成期。同时，由流式细胞仪结果表示乳杆菌处理72 h后，Caco-2细胞凋亡率显著增加（P＜0.01），达到（27.73±0.15）%。由此可知，L.paracaseiM5L可通过阻滞合成期来诱导Caco-2细胞凋亡。

图4 L.paracaseiM5L对Caco-2细胞比例的影响Fig.4 Effect ofL.paracaseiM5L on Caco-2 cell proportion

2.2.4 ROS的测定

活性氧（ROS）主要产生于细胞内线粒体，是生物体内正常细胞代谢过程中的衍生物，但过量的ROS可通过氧化与过氧化作用达到破坏细胞内的DNA、蛋白质以及脂类的效果[14]，从而使线粒体膜受到损伤，引起线粒体功能的障碍，从而导致Caspase激活和凋亡，因此ROS的增加能从一定程度反映细胞凋亡的情况。如图5所示，经过100∶1感染系数的L.paracaseiM5L活菌处理72 h后，Caco-2细胞内的ROS荧光量显著增加（P＜0.01），由此表明活菌处理可以诱导细胞内氧化系统的失衡，最终导致细胞损伤。

图5 L.paracaseiM5L对Caco-2细胞内ROS的影响Fig.5 Effect ofL.paracaseiM5L on intracellular ROS of Caco-2 cell

2.2.5 RT-PCR结果

Caspase家族和Bcl-2家族蛋白是衡量细胞凋亡的重要家族蛋白[15]，本实验对Caspase-3、Bax和Bcl-2基因表达量变化进行分析，结果见图6。

由图6可知，与未经M5L活菌处理的对照组相比，处理组可以显著的提高Caco-2细胞中Caspase-3的表达量（P＜0.05），同样，Caco-2细胞中促凋亡基因Bax表达量也显著增长（P＜0.05），而抑凋亡基因Bcl-2表达量极显著降低（P＜0.01），因此Bax/Bcl-2比值变小，肿瘤细胞朝着凋亡的方向进行，由此阐明副干酪乳杆菌M5L可通过影响凋亡相关蛋白的表达来促进Caco-2细胞凋亡的。

2.3 L.paracaseiM5L发酵乳贮藏品质的变化

酸乳是活菌制品，产品贮藏过程中，菌体依然进行生长繁殖，由结果所知，贮藏0～5 d，菌体数量呈现显著的增长趋势，第5天后菌落数逐渐减少，这可能是因为贮藏后期，营养物质的消耗以及外界环境的影响导致菌体数量下降。酸度和pH是影响发酵奶最终口感的重要因素，良好风味的发酵乳pH一般为4.5左右，酸度在80～120°T[16]。由表1可知，随着时间的延长，pH显著下降，pH由4.54±0.01降低至4.03±0.01，同时酸度逐渐增强，酸度在前5天增长幅度不大，由原来的（75.13±1.33）°T增长至（97.41±2.77）°T，之后缓慢增大。持水力是衡量发酵奶品质的重要指标，发酵乳贮藏前5天内持水力显著增大，在第5天时由原来的（19.3±0.24）%增大至（22.3±0.22）%，之后逐渐下降，这说明贮藏时间过长，能够明显的影响到发酵乳的品质。硬度和黏度也是衡量发酵奶的重要指标[17]。由结果可知，发酵乳在贮藏1d后，硬度和黏度显著增大，第5天达到最高，之后呈现下降的趋势，硬度在第13天的时候变为（90.513±2.84）g，这说明短时间的贮藏后熟过程，有利于酸奶品质，随着时间的延长，硬度值和黏度逐渐下降，这可能是由于发酵后期，菌体生长受到影响，营养消耗，乳清析出，品质也逐渐降低。

图6 L.paracaseiM5L对凋亡相关基因的表达的影响Fig.6 Effect ofL.paracaseiM5L on apoptosis gene express of Caco-2 cell

表1 发酵乳贮藏过程中品质变化Table 1 Quality changes of fermented milk during storage

3 结论

本实验选择从新疆马奶酒中自行分离得到的副干酪乳杆菌M5L，初步分析它的生长特性，并对副干酪乳杆菌M5L诱导结肠癌Caco-2细胞凋亡进行研究，最后探讨其发酵乳在贮藏过程中持水力、菌落数、pH、酸度、硬度等各个指标的变化。副干酪乳杆菌M5L可以在一定的盐浓度、胆盐浓度以及酸性环境下较好的生长，这将有利于其在发酵工业中更好的利用。根据MTT结果可知，当活菌体以感染系数100∶1作用于Caco-2细胞72 h后，抑制作用最大，由此用于后续实验研究。根据倒置显微镜结果可知，活菌处理后的癌细胞发生明显的凋亡现象。通过流式细胞仪测定结果表明活菌处理极其显著的增加细胞内ROS的含量，并对细胞周期进行测定，处理72 h后，可有效的通过阻滞细胞合成期来抑制细胞生长，凋亡率可达到（27.73±0.15）%。根据反转录酶-聚合酶链反应（reversetranscription-polymerase chain reaction，RT-PCR）结果显示，基因Caspase-3和Bax相对表达值高于对照组，基因Bcl-2表达量低于对照组，由此进一步阐明了副干酪乳杆菌M5L诱导Caco-2细胞凋亡的机制。由副干酪乳杆菌M5L发酵所得发酵乳贮藏过程中持水力、菌落数、硬度和黏度等指标都呈现出先增加后逐渐减小的趋势，第5天时数值最大，pH和酸度也在贮藏前5 d变化不大，由此可知酸乳贮藏5天时品质最佳。由此设想将副干酪乳杆菌M5L作为乳制品的发酵剂及辅助或酵剂应用于发酵行业，可以有效的增强酸乳的营养功能，同时扩大乳酸菌在抗肿瘤领域的广泛应用。

[1]SUNKARA V,HEBERT J R.The Colorectal cancer mortality-to-incidence ratio as an indicator of global cancer screening and care[J].Cancer,2015,121(10):1563-1569.

[2]BOSETTI C,LEVI F,ROSTAO V,et al.Recent trends in colorectal cancer mortality in Europe[J].Int J Cancer,2011,129(1):180-191.

[3]胡盼盼，宋 微，单毓娟，等.影响乳酸菌胞外多糖产量的因素[J].食品科技，2014，39（9）：31-37.

[4]KUDA T,KAWAHARA M,NEMOTO M,et al.In vitroantioxidant and anti-inflammation properties of lactic acid bacteria isolated from fish intestines and fermented fish from the Sanriku Satoumi region in Japan[J].Food Res Int,2014,64:248-255.

[5]WANG A N,YI X W,YU H F,et al.Free radical scavenging activity of Lactobacillus fermentum in vitroand its antioxidative effect on growingfinishing pigs[J].J Appl Microbiol,2009,107(4):1140-1148.

[6]DAS D,GOYAL A.Antioxidant activity and γ-aminobutyric acid(GABA)producing ability of probioticLactobacillus plantarumDM5 isolated from Marcha of Sikkim[J].LWT-Food Sci Technol,2015,61(1):263-271.

[7]尹胜利，杜 鉴，徐 晨.乳酸菌的研究现状及其应用[J].食品科技，2012，37（9）：25-29.

[8]WANG S M,ZHANG L W,FAN R B,et al.Induction of HT-29 cells apoptosis by lactobacilli isolated from fermented products[J].Res Microbiol,2014,165(3):202-214.

[9]TUO Y F,ZHANG L W,YI H X,et al.Antiproliferative effect of wild Lactobacillusstrains isolated from fermented foods on HT-29 cells[J].J Dairy Sci,2010,93(6):505-511.

[10]ZHAI Q,YIN R,YU L,et al.Screening of lactic acid bacteria with potentialprotectiveeffectsagainstcadmiumtoxicity[J].Food Control,2015,54:23-30.

[11]赵 鑫，赵洪双，姜国龙.不同比例的嗜热链球菌与保加利亚乳杆菌对酸奶品质的影响[J].农产品加工，2009（3）：177-180.

[12]SUN J,LIU R H.Apple phytochemical extracts inhibit proliferation of estrogen-dependent and estrogen-independent human breast cancer cells through cell cycle modulation[J].J Agr Food Chem,2008,56(24):11661-11667.

[13]OUYA F J,WANG G B,GUO W,et al.AKT signalling and mitochondrial pathways are involved in mushroom polysaccharide-induced apoptosis and G1 or S phase arrest in human hepatoma cells[J].Food Chem,2013,138(4):2130-2139.

[14]ISHII Y,SUGIMOTO S,IZAWA N,et al.Oral administration ofBifidobacterium breveattenuates UV-induced barrier perturbation and oxidativestressinhairlessmiceskin[J].Arch Dermatol Res,2014,306(5):467-473.

[15]SHEN Q,SHANG N,LI P.In vitroandin vivoantioxidant activity of Bifidobacterium animalis01 isolated from centenarians[J].Current Microbiol,2011,62(4):1097-1103.

[16]李向东，乔成亚，吕加平，等.弱后酸化发酵剂对长保质期酸奶品质特性影响的研究[J].食品科技，2008，33（12）：99-102.

[17]HASSAN A N,FRANK J F,SCHMIDT K A,et al.Rheological propertiesofyogurt made with encapsulated nonropylactic cultures[J].J Dairy Sci,1996,79:2091-2097.

Caco-2 cell apoptosis induced byLactobacillus paracaseiand its fermented milk storage quality

HU Panpan1,LIU Xinmin1,YU Zhiqiang1,BAI Jian1,CHEN Lishui2,3*
(1.Department of Life Science,Lvliang University,Lvliang 033000,China;2.Food R&D Center,COFCO Nutrition and Health Research Institute,Beijing 102209,China;3.Beijing Engineering Laboratory for Geriatric Nutrition Food Research,Beijing 102209,China)

Lactobacillus paracaseiM5L was isolated from Xinjiang Kumiss,its inhibition effect on colorectal cancer Caco-2 cell was studied and the qualitychangeoffermentedmilk wasanalyzed.Resultsshowed thatL.paracaseigrewwellatcertain saltcontent,bile saltcontentand acid environment.The inhibition rate on Caco-2 cells was the optimal byL.paracaseitreatment with infection factor 100∶1 for 72 h,the cells treated withL.paracasei showed obvious apoptosis phenomenon.Flow cytometry detection results showed thatL.paracaseiM5L could induce Caco-2 cells active oxygen content,arrest cell cycle in Synthesis phase,and the cancer cell apoptosis could be accelerated by increasingCaspase-3andBaxgene express or decreasing Bcl-2gene express.The quality of fermented milk was the optimal with storage time 5 d,and longtime storage can lead to yogurt deterioration.

Lactobacillus paracasei;fermented milk;antitumor

TS201.3

0254-5071（2017）09-0142-06

10.11882/j.issn.0254-5071.2017.09.031

2017-06-20

北京市科技计划（Z161100000616010）；吕梁学院校内基金项目（ZRXN201509）

胡盼盼（1989-），男，助教，硕士，研究方向为乳品科学。

*通讯作者：陈历水（1974-），男，高级工程师，博士，研究方向为功能性食品。