常山胡柚不同部位中柠檬苦素的含量分析*

刘晓政 严晓丽 胡 丹 施堂红 占元毅

（浙江省果品质量检验中心，浙江常山 324200）

常山胡柚不同部位中柠檬苦素的含量分析*

刘晓政**严晓丽 胡 丹 施堂红 占元毅

（浙江省果品质量检验中心，浙江常山 324200）

常山胡柚，又名金柚，于20世纪70年代末期被发现，1991年被东北林学院张韵冰教授正式命名为常山胡柚，以产地命名，具有鲜明的地域特色。常山胡柚果实与常见的柑桔类果实不同，甜度不如砂糖橘，香味不如脐橙，具有清凉祛火、平喘化痰、生津止咳、健胃壮身、降血脂、抗便秘、抗衰老等特殊的药理功效。当地柚农形容胡柚是“有点苦、确实凉”。常山胡柚“有点苦”的主要原因是胡柚中含有的柠檬苦素类化合物。

柠檬苦素类化合物是存在于芸香科和楝科植物中一类三萜系化合物，是具有高度生物活性的植物次生代谢产物。柑桔属芸香科植物，是天然柠檬苦素化合物的主要来源。最新研究表明，柠檬苦素类化合物在抗癌、镇痛、调节体内胆固醇水平、防止动脉粥样硬化和除虫方面具有明显效果，被认为是理想的功能食品添加物。美国、日本已经报道了柠檬苦素类物质作为功能性成分在食品和饮料制作中的应用，因而具有植物天然活性物质的柠檬苦素类物质具有广阔的应用前景。

本文对常山胡柚不同部位中的柠檬苦素含量进行了分析，确定常山胡柚不同部位中柠檬苦素含量的分布规律，为常山胡柚深加工中胡柚的脱苦和柠檬苦素的提取提供理论依据。

1 试验材料

1.1 材料与试剂

常山胡柚，常山县俊优胡柚专业合作社、常山县连福胡柚专业合作社和常山县芙蓉旺水果专业合作社的胡柚鲜果。

胡柚样品的制备，分别取胡柚皮、海绵层、囊衣，置于45℃烘箱内，烘10 h后粉碎，放入密封塑料袋中，置于干燥器内保存。

柠檬苦素标准品，纯度98.0%，上海同田生物技术有限公司；甲醇、乙腈，均为色谱纯；乙酸铵，分析纯；其他物质均为分析纯；水为超纯水。

1.2 仪器与设备

ProStar230液相色谱仪，美国瓦里安公司；PL403电子天平，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；KQ-500DE超声波清洗机，昆山舒美超声仪器有限公司；电热鼓风干燥箱，上海森信实验仪器有限公司；R-200旋转蒸发器，瑞士布奇公司；数显水浴锅，上海银屏仪器仪表有限公司；超纯水器，杭州永洁达净化科技有限公司；循环水式真空泵，河南巩义英峪予华仪器厂；UV-2800AH紫外可见分光光度计，尤尼柯（上海）仪器有限公司；孔径0.45 μm针头过滤器，安捷伦科技有限公司；DKU-250A电热恒温油槽，上海森信实验仪器有限公司；PHS-3C酸度计，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；FP6410火焰光度计，上海欣益仪器仪表有限公司。

2 试验方法

2.1 不同胡柚基地土壤基本肥力的测定

采集了常山县3个不同区域的胡柚基地周边的39个土壤样本，自然风干，根据Y/T 53—1987土壤全氮测定法（半微量开氏法）；NY/T 1121.2— 2006土壤检测第2部分：土壤pH的测定；NY/T 1121.6—2006土壤检测第6部分：土壤有机质的测定；NY/T 1121.7-2006土壤检测第7部分：酸性土壤有效磷的测定；NY/T 889-2004土壤速效钾和缓效钾含量的测定的方法对土壤中全氮、pH值、有机质、速效磷及速效钾的测定，了解土壤的基本肥力情况。

2.2 柠檬苦素提取方法

准确称取2.000 g样品置于三角瓶中，加入50 mL纯净水，调节提取温度80℃，提取时间90 min，样品提取后，提取液用滤纸过滤，将滤液真空干燥至干，立即加入2 mL乙腈洗脱溶解，经针头过滤器过滤后待测。在同样的条件下，采用超声波辅助提取。

2.3 柠檬苦素的测定方法

色谱柱：ZORBAX SB-C18StableBond Analytical 4.6×250 mm 5-Micron；进样量：10 μL；流动相乙腈∶水为45∶55；紫外检测器波长：210 nm；流动相流速：1.0 mL/min。以标样的保留时间和峰面积进行定性、定量计算柠檬苦素含量Y。

式中：m1——提取物中柠檬苦素含量，mg；

m0——胡柚样品重量，g。

3 结果与分析

3.1 常山县不同区域胡柚基地土壤的基本肥力

常山县胡柚种植面积达7.4×103hm2，本次研究选取了常山东案乡、青石镇和球川镇3个不同的胡柚种植基地，这3个胡柚基地均为多年丰产果园。在3个基地周边选取了具有代表性的土壤样本39个，对土壤中的全氮、速效磷、速效钾、pH值及有机质进行测定。所取土壤为胡柚开始结果实时的土壤样本，整个胡柚生长期未施肥。测定结果如下页表1、表2、表3。

由表1、表2、表3可知，3个乡镇胡柚生长基地土壤中速效磷、速效钾的含量差异较大，其他指标差异不大，东案乡胡柚生长基地土壤中速效磷、速效钾的含量明显高于其他2个镇。

3.2 柠檬苦素的检测方法

柠檬苦素的检测质量浓度在50μg/mL～800μg/mL范围内，按选定的色谱条件进行HPLC分析，以保留时间定性，以峰面积对标准品的质量浓度绘制工作曲线。结果表明，在该浓度范围内呈良好线性关系，峰面积与质量浓度的线性回归方程为Y=109 741X-607 677，相关系数 r=0.999 6。当信噪比S/N=3时，柠檬苦素的检测限为0.028 μg/g。精密度好，稳定性好，加标回收率在90%以上。

表1 青石镇胡柚基地周边范围内土壤基本肥力

表2 东案乡胡柚基地周边范围内土壤基本肥力

表3 球川镇胡柚基地周边范围土壤基本肥力

3.3 不同胡柚基地的胡柚样品中柠檬苦素含量

本研究选取3个乡镇常山胡柚基地的3个胡柚专业合作社的胡柚样品。因为胡柚种子量少，不利于胡柚深加工规模发展，所以分别取胡柚皮、海绵层、囊衣进行研究。以水作为提取溶剂，在一定的提取条件下，得到的胡柚不同部位的柠檬苦素含量见表4。

表4 胡柚不同部位的柠檬苦素含量（水提取）

由表4可知，不同胡柚基地的常山胡柚不同部位中柠檬苦素含量变化规律基本相同，胡柚皮中最多，其次是囊衣，最后是海绵层。

3.3.1 以水作为提取溶剂进行提取

以水作为提取溶剂，提取温度80℃，料液比1∶25（g∶mL），提取时间90 min，胡柚皮中柠檬苦素含量可达2.68 mg/g，囊衣中柠檬苦素含量可达1.13 mg/g，海绵层中柠檬苦素含量可达0.88 mg/g。

3.3.2 以水作为提取溶剂超声提取

以水作为提取溶剂超声提取，提取温度80℃，料液比1∶25（g∶mL），提取时间90min，胡柚皮中柠檬苦素含量可达3.01 mg/g，囊衣中柠檬苦素含量可达1.37mg/g，海绵层中柠檬苦素含量可达1.12mg/g。

表5 胡柚不同部位的柠檬苦素含量（超声水提取）

4 结论

本研究主要是为常山胡柚中柠檬苦素物质的功能性应用及胡柚深加工行业中的脱苦提供理论基础。研究结果表明，常山胡柚不同部位中柠檬苦素的含量也不同，胡柚皮中含量最高，囊衣次之，海绵层中含量最低。土壤中的速效磷、速效钾的含量对胡柚中柠檬苦素的含量有一定的影响，速效磷、速效钾含量高的土壤，胡柚中柠檬苦素的含量相对较低。以水作为提取溶剂，提取温度80℃，料液比1∶25（g∶mL），提取时间90 min，胡柚皮中柠檬苦素含量可达2.68 mg/g，囊衣中柠檬苦素含量可达1.13 mg/g，海绵层中柠檬苦素含量可达0.88 mg/g。超声辅助提取，胡柚皮中柠檬苦素含量可达3.01 mg/g，囊衣中柠檬苦素含量可达1.37 mg/g，海绵层中柠檬苦素含量可达1.12 mg/g。

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Study on content of limonin in different tissues of citrus changshan-huyou*

LIU Xiaozheng**YAN XiaoliHU Dan SHI Tanghong ZHAN Yuanyi
（Testing center for fruit quality of Zhejiang province，Zhejiang Changshan 324200，China）

利用高效液相色谱法检测常山胡柚中柠檬苦素的含量，并对常山3个不同胡柚基地的胡柚不同部位中柠檬苦素的含量进行了对比分析。结果表明，不同基地的常山胡柚不同部位中柠檬苦素含量变化规律基本相同，其中胡柚皮中含量最多，其次是囊衣，最后是海绵层。用水作为提取溶剂，提取温度80℃，料液比1∶25(g∶mL)，提取时间90 min，胡柚皮中柠檬苦素含量达2.68 mg/g，囊衣中柠檬苦素含量可达1.13 mg/g，海绵层中柠檬苦素含量可达0.88 mg/g。超声辅助提取时，含量依次为3.01 mg/g、1.37 mg/g、1.12 mg/g。

常山胡柚；柠檬苦素；提取；检测

Todevelopasensitivehighperformanceliquidchromatography（HPLC）methodtodeterminelimoninin Citrus chang shan-huyou.Citrus changshan-huyou of three bases in changshan were selected.Results showed:the changelawoflimonincontentofcitruschangshan-huyouindifferentbaseswasthesame.Thelimonincontentofcitrus chang shan-huyou peel was the highest and the limonin content of interlayer took second place,the limonin content of cystmembranewasleast.Theoptimumconditionsofwaterextractionwereachievedasfollows:soakingtemperatureas 80℃,the ratio of materials to solution as 1∶25(g∶mL),extraction time as 90 min.The limonin content of citrus chang shan-huyoupeelwas2.68mg/g.Thelimonincontentofcitruschangshan-huyouinterlayerwas1.13mg/g.Thelimonin content of citrus chang shan-huyou cyst membrane was 0.88 mg/g.The limonin content with ultrasonic extraction underthesameconditionwas3.01mg/ginpeel,1.37mg/gininterlayerand1.12mg/gincystmembrane.

citrus changshan-huyou peel；limonin；extraction；determine

TS255.7

A

1673-6044（2017）02-0054-04

10.3969/j.issn.1673-6044.2017.02.015

国家质检总局项目，（2012QK317）。

**刘晓政，女，1982年出生，2009年毕业于浙江工商大学食品科学专业，硕士，工程师。

2017-03-19