沙棘提取物一般药理学实验研究

童东，魏志成，左芳，王丽，罗煜，孟宪丽，曾勇

·药理毒理·

沙棘提取物一般药理学实验研究

童东，魏志成，左芳，王丽，罗煜，孟宪丽，曾勇

目的:为探讨沙棘提取物的安全性，观察沙棘提取物的一般药理作用，以供临床用药参考。方法:观察沙棘提取物对家犬血压、呼吸频率、呼吸振幅和心电图标准Ⅱ导联的影响,对小鼠自发活动的影响，对戊巴比妥钠阈剂量致小鼠睡眠时间的影响，对戊巴比妥钠阈下剂量致小鼠催眠有无明显协同作用，对小鼠的转棒运动有无明显的影响。结果: 沙棘提取物在155 mg(原料药).kg-1体重给药剂量内，对家犬心血管系统和呼吸系统均无明显影响；在754mg(原料药).kg-1体重给药剂量范围内，对小鼠的中枢神经系统没有明显的抑制作用，对小鼠的机能协调运动也无明显影响。结论:一般药理作用研究表明，在上述剂量内沙棘提取物对动物心血管系统、呼吸系统及中枢神经系统均无明显影响，提示其不良反应小。

沙棘提取物；药理作用；心血管系统；呼吸系统；中枢神经系统

沙棘(Hippophae rhamnoidesL. )是我国蒙医、藏医传统习用药材 ，1977年首次被卫生部正式收载于《中华人民共和国国药典》[1]，具有活血散瘀、止咳祛痰 、消食化滞的功效。本实验通过沙棘提取物对家犬心血管系统、呼吸系统和小鼠中枢神经系统的一般药理学作用的研究，为其临床用药安全性提供依据。

1 材料

1.1 受试药物

沙棘提取物，成都中医药大学民族医药学院提供，批号：20150312。主要含沙棘果油和总黄酮，实验时用蒸馏水将沙棘提取物分别配制成高、中、低三个剂量组，其家犬的分别为155，77.5，38.75 mg原料药/kg，相当于临床成人用量倍数9、4.5、2.25倍。ICR小鼠的分别为54，377，188.5 mg原料药/kg，相当于临床成人用量倍数43、21.5、10.75倍，安定(天津金耀药业有限公司，H12020957)，给药量10 mg．kg-1，使用时用蒸馏水配置。

1.2 主要试剂、仪器

戊巴比妥钠，含量≥95.0%，批号：F20130816，中国医药（集团）上海化学试剂公司进口分装，用氯化钠注射液配制成3%浓度备用；肝素钠注射液，批号：20140205，12500单位/ml/支，天津市生物化学制药厂生产，用氯化钠注射液配制成50 U.ml-1备用；氯化钠注射液，规格：500 ml：4.5 g，批号：20140705，四川奇力同心制药有限公司生产；仪器BL-420型生物机能实验系统，成都泰盟电子有限公司产品；心电图记录仪（ECG-6511），上海光电医用电子仪器有限公司产品；YH-4型生理压力传感器，北京航天生物医学工程研究所产品；HXH-101型呼吸波传感器；高碑店市新航机电设备有限公司产品；YLS-1A多功能小鼠自发活动记录仪，YLS—4C转棒式疲劳仪，均由山东省医学科学院设备站生产。

1.3 实验动物

家犬24只，（♀12只、♂12只），体重9～13 kg，市购。ICR小鼠，体重18～22 g，雌雄各半，由四川省医学科学院实验动物研究所提供。实验动物生产许可证号：SCXK（川）2014-16。

2 实验方法

2.1 对家犬血压、呼吸、心电图的影响。

将符合实验要求的家犬随机分为4组：空白对照组和沙棘提取物高、中、低3个剂量组分别为155，77.5，38.75 mg原料药/kg，每组6只，雌雄各半。试验在屏蔽室内进行，空调室温20-24℃，相对湿度65%-75%，将犬用戊巴比妥钠(30 mg．kg-1)静脉注射麻醉，四肢接心电图肢导联，描记标准Ⅱ导联；HXH-101型呼吸传感器固定于犬剑状软骨处，分离颈总动脉，将动脉插管（管内充满50 U.mL-1肝素钠氯化钠注射液）插入颈总动脉内，用线固定，动脉插管与YH-4型生理压力传感器连接。呼吸波传感器接入BL-420系统的通道1，生理压力传感器接入通道2，记录呼吸、血压和Ⅱ导联心电。

待各项观察指标稳定后，分别在给药前检测二次心电图、呼吸和血压，间隔约30 min检测一次，取二次平均值作为药前基础值。将导尿管经口缓慢插入食管和胃, 沙棘提取物高、中、低三个剂量组按上述剂量灌胃给药，给药体积均为1 mL．kg-1，各组分别于给药后30、60、90、120、180、240 min检测血压、心电图、呼吸各参数。

2.2 对小鼠自发活动的影响

将合格ICR小鼠在实验环境中适应性饲养1周，给药前让小鼠在YLS-1A多功能小鼠自发活动记录仪的测试箱内适应5 min后立即测试小鼠在5 min内的活动次数，按选择活动次数在100～200次/5 min的小鼠按活动次数和体重、性别随机分为5组：空白对照组、阳性对照组（安定）和沙棘提取物高、中、低剂量组分别为754，377，188.5 mg原料药/kg每组10只，雌雄各半。然后各组均按0.2 mL．10g-1灌胃给予相应的受试液，给药后60 min时，同前法记录各组小鼠5 min内的活动次数。

2.3 对戊巴比妥钠阈剂量致小鼠睡眠时间的影响

ICR小鼠60只，将小鼠随机分为沙棘提取物高、中、低剂量组、阳性对照组（安定）和空白对照组5组，每组12只，雌雄各半。试验在室温22-24℃的空调温度条件下进行，各组按相应剂量以0.2 mL/10g灌胃给予相应受试液(空白对照组给予蒸馏水)。给药后30 min，按35 mg．kg-1（给药体积为0.2 mL．g-1）尾静脉注射阈剂量戊巴比妥钠，以小鼠翻正反射消失1 min以上为入睡指标，从翻正反射消失至恢复时间为睡眠持续时间，观察记录各组小鼠的睡眠持续时间。

2.4 对小鼠戊巴比妥钠阈下剂量催眠的协同作用

ICR小鼠60只，随机分组，每组12只，雌雄各半。小鼠在室温22-24℃的实验环境中适应性饲养1周后，各组均按相应剂量以0.2 mL．10g-1灌胃给予相应受试液，给药后30 min，按28 mg．kg-1（给药体积为0.2 ml．g-1）尾静脉注射戊巴比妥钠，以小鼠翻正反射消失1 min以上为入睡指标，观察各组小鼠的入睡只数。

2.5 对小鼠转棒运动的影响

试验在22-24℃空调室温条件下进行，试验前对动物进行训练、筛选，捏住小鼠尾中部，使小鼠在转棒上爬行，转速为30 rpm．min-1，爬行一段时间后逐渐放松鼠尾，当其不再依靠鼠尾平衡身体时完全松开鼠尾，对于跳跃或团身抱轴的小鼠弃之不用，每批训练30 min，连续训练3 d。选取第3 d训练时未掉棒的合格小鼠50只，将小鼠随机分为沙棘叶提取物高、中、低剂量组、阳性对照组和空白对照组五组，每组10只，雌雄各半。各组按相应剂量以0.2 mL/10g灌胃给予相应受试液，给药后30 min，测量各组小鼠10 min内的落棒只数。

2.6 统计方法

所有实验数据采用SPSS21.0统计软件进行统计分析。以（±s）表示结果的数据用单因数方差分析进行组间比较,以(%)表示结果的数据用χ2检验检测其组间差异的显著性。

3 实验结果

3.1 对家犬血压、呼吸系统及心电图的影响

血压、呼吸检测统计结果见表1～表4；心电图（Ⅱ导联）记录结果见表5 ,沙棘提取物在155 mg原料药/kg剂量范围内对家犬的血压、呼吸振幅、呼吸频率及心电图（Ⅱ导联）的心率、均无明显影响, 给药前及给药后各检测时间点的检测值与空白对照组比较其差别均无显著意义（P＞0.05），心律均为窦性。

表1 沙棘提取物对家犬收缩压测定值（n=6，±s，kPa）

表1 沙棘提取物对家犬收缩压测定值（n=6，±s，kPa）

注:与空白对照组比较，P＞0.05

检测时间（min） 空白对照组 高剂量组 中剂量组 低剂量组基础值 16.16±1.38 15.37±1.19 16.25±0.94 16.17±1.58 30 16.07±1.26 15.54±1.04 16.45±1.09 16.11±1.67 60 16.24±1.50 15.41±1.06 16.45±1.19 16.18±1.64 90 16.22±1.45 15.55±1.14 16.09±1.18 16.11±1.58 120 16.39±1.28 15.47±1.07 16.34±1.02 16.11±1.64 180 16.31±1.41 15.39±1.01 16.50±1.33 16.13±1.75 240 16.28±1.33 15.41±1.07 16.36±1.28 16.17±1.69

表2 沙棘提取物对家犬舒张压测定值（n=6，±s，kPa）

表2 沙棘提取物对家犬舒张压测定值（n=6，±s，kPa）

注：与空白对照组比较同，P＞0.05

检测时间（min） 空白对照组 高剂量组 中剂量组 低剂量组基础值 13.03±1.02 11.95±1.08 12.88±1.16 12.82±1.04 30 13.04±1.12 11.73±1.14 12.98±1.28 12.80±0.98 60 13．15±1．13 11．98±1．15 12．81±1．07 12．95±1．07 90 13．25±1．14 12．06±1．22 12．77±1．42 12．92±1．02 120 13．36±1．09 11．87±1．42 12．70±1．62 12．97±1．04 180 13．34±1．11 11．83±1．71 12．77±1．28 13．00±1．07 240 13．24±0．98 12．07±1．28 12．99±1．25 13．03±1．05

表3 沙棘提取物对家犬呼吸振幅测定值（n=6，±s，g）

表3 沙棘提取物对家犬呼吸振幅测定值（n=6，±s，g）

注：与空白对照组比较，P＞0.05

检测时间（min） 空白对照组 高剂量组 中剂量组 低剂量组基础值 3.20±1.12 3.38±0.79 4.02±1.22 3.57±0.88 30 3.18±1.08 3.33±0.72 3.98±1.28 3.61±0.89 60 3.19±1.12 3.34±0.74 3.97±1.21 3.62±0.88 90 3.19±1.07 3.42±0.77 4.00±1.26 3.62±0.85 120 3.21±1.10 3.36±0.76 3.96±1.19 3.64±0.87 180 3.21±1.12 3.39±0.78 4.02±1.18 3.64±0.88 240 3.26±1.15 3.37±0.76 3.97±1.21 3.62±0.91

表4 沙棘提取物对家犬呼吸频率测定值（n=6，±s，次/分）

表4 沙棘提取物对家犬呼吸频率测定值（n=6，±s，次/分）

检测时间（min） 空白对照组 高剂量组 中剂量组 低剂量组基础值 10.9±2.15 11.25±2.70 10.83±1.51 12.08±3.53 30 11.3±2.66 11.17±2.86 11.00±2.00 12.33±3.61

注：与空白对照组比较，P＞0.05

表5 沙棘提取物对家犬心率测定值（n=6，±s，次/分）

表5 沙棘提取物对家犬心率测定值（n=6，±s，次/分）

注：与空白对照组比较，P＞0.05

检测时间（min） 空白对照组 高剂量组 中剂量组 低剂量组基础值 196.58±40.60 190.25±18.49 197.17±22.00 196.00±20.43 30 176.67±37.17 186.83±23.60 196.17±23.01 195.83±20.33 60 184.00±31.27 183.67±21.30 193.50±27.96 192.83±18.49 90 181.83±30.60 183.83±19.15 187.50±23.35 187.33±24.65 120 178.67±29.22 179.67±18.55 188.50±25.19 195.67±19.94 180 177.33±28.51 176.17±18.89 181.50±27.13 189.83±24.81 240 170.50±28.93 174.83±21.35 183.33±29.49 188.33±26.49

3.2 对小鼠自发活动的影响

沙棘提取物各剂量组小鼠给药后90 min内，一般行为状态无异常现象，未见跳跃、抽搐、流涎、肌颤及瞳孔变化等异常反应；阳性组小鼠给药后约10 min时开始活动减少、懒动、嗜睡现象。结果详见表6。

表6 沙棘提取物对小鼠自发活动的影响

表6显示：沙棘提取物高、中、低剂量组在给药后60 min时小鼠的活动次数与空白对照组比较差别无显著意义（P＞0.05）。阳性对照组在给药后60 min时，小鼠5 min内的活动次数明显减少，与空白对照组比较差别有非常显著意义（P＜0.01）。

提示：沙棘提取物高、中、低三剂量对小鼠的自发活动没有抑制作用。

3.3 对戊巴比妥钠阈剂量致小鼠睡眠时间的影响

表7 沙棘提取物对戊巴比妥钠阈剂量致小鼠睡眠时间的影响试验结果

注：与空白对照组比较，**P＜0.01

表7结果显示：注射戊巴比妥钠后，沙棘提取物高、中、低剂量组小鼠睡眠时间与空白组比较差别无显著意义（P＞0.05）；阳性对照组的睡眠时间明显长于空白对照组，与空白对照组比较差别有非常显著意义（P＜0.01）。

提示：沙棘提取物对戊巴比妥钠阈剂量致小鼠的睡眠时间没有协同作用。

3.4 对小鼠戊巴比妥钠阈下剂量催眠的协同作用

沙棘提取物高、中、低剂量组和阳性对照组、空白对照组分别有2只、0只、0只、12只、0只小鼠入睡，入睡率依次为16.7%、0%、0%、 100.0%和0%，结果见表18。

表8 沙棘提取物对戊巴比妥钠阈下剂量致小鼠催眠的影响试验结果

表8结果显示：沙棘提取物高、中、低剂量组小鼠入睡个数与空白对照组比较差别无显著意义（P＞0.05）；阳性对照组小鼠入睡个数明显高于空白对照组，与空白对照组比较差别有非常显著意义（P＜0.01）。

提示：沙棘提取物对戊巴比妥钠阈下剂量致小鼠催眠没有协同作用。

3.5 对小鼠转棒运动的影响

给药后30 min，沙棘提取物高、中、低剂量组和空白对照组各小鼠各外观体征无异常，低剂量组和空白对照组各有1只小鼠在转棒过程中出现掉棒现象，掉棒率为10%；阳性组小鼠出现活动减少、懒动、闭眼现象，在10 min的转棒时间内10只小鼠全部掉棒，掉棒率为100.0%，见表9。

表9 沙棘提取物对小鼠转棒活动的影响试验结果

表9结果显示：在给药后30 min，沙棘提取物高、中、低三个剂量对小鼠的转棒活动均无明显影响，掉棒只数与空白对照组差别均无显著意义（P＞0.05）；阳性对照明显使小鼠的转棒活动受阻，掉棒只数与空白对照组比较差别有显著意义（P＜0.01）。

提示：沙棘提取物对小鼠的转棒活动无明显影响。

4 讨论

本实验结果表明，沙棘提取物在155 mg(原料药)．kg-1体重给药剂量内，对家犬心血管系统、呼吸系统均无明显影响；在754 mg(原料药)．kg-1体重给药剂量范围内，对小鼠的中枢神经系统没有明显的抑制作用，对小鼠的机能协调运动无明显影响，说明此临床指导用量是安全可靠的，至于加大剂量是否影响临床治疗效果还应做进一步的探索。

[1] 中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：中国医药科技出版社,2015:285.

（责任编辑：陈思敏）

Study on the general pharmacological effects of extracts of Shaji/

TONG Dong, WEI Zhi-cheng, ZUO Fang, WANG Li,LUO Yu, MENG Xian-li, ZENG Yong //(School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; Key Laboratory of Standardization for Chinese Herbal Medicine, Ministry of Education; National Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources, Chengdu 611137, Sichuan)

Objective: To study the safety of extracts of Shaji and to observe the general pharmacological effects for the reference of clinical therapy.Method:The effects of extracts of Shaji on domestic dogs blood pressure, respiratory rate, respiratory amplitude, and electrocardiogram were observed. The effects of extracts of Shaji on mice spontaneous activity, sleeping time and hypnosis induced by pentobarbital sodium, and moving rod movement were observed.Result:With a dose of 155mg．kg-1, extracts of shaji had no obvious effect on cardiovascular systems and respiratory system of dog. With a dose of 754 mg．kg-1, it didn't inhibit the central nervous system and the coordination function of mice.Conclusion:The result indicates that with the above-mentioned dose of extracts of Shaji, it has no effect on animal's cardiovascular systems, respiratory system and central nervous system.

Extracts of Shaji; pharmacological effects; cardiovascular systems; respiratory systems; central nervous system

R 285.5

] A

] 1674-926X(2017)02-015-04

四川省科技计划项目（2014SZ0071）；四川省科技厅省青年科技创新研究团队专项计划项目（2014TD0007）

成都中医药大学药学院 ，中药材标准化教育部重点实验室 中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地，四川 成都 611137

童东，在读硕士研究生，主要从事中药药效与毒理研究Tel:18382188293 Email:2365975228@qq.com

曾勇，教授，硕士生导师，主要从事中药药效与毒理研究Tel:18982095682 Email:286840942@qq.com

2016-08-09