盐酸金霉素中氯乙烷的气相色谱检测方法

欧阳文浩韩明梅云鹏飞云喜报王鹏飞

（1.内蒙古师范大学化学与环境科学院，内蒙古呼和浩特 010020；2.内蒙古呼和浩特市托克托县兽药检验所监察所，内蒙古托县 010200；3.金河生物科技股份有限公司，内蒙古呼和浩特 010200）

盐酸金霉素中氯乙烷的气相色谱检测方法

欧阳文浩1韩明梅1云鹏飞2云喜报3王鹏飞3

（1.内蒙古师范大学化学与环境科学院，内蒙古呼和浩特 010020；2.内蒙古呼和浩特市托克托县兽药检验所监察所，内蒙古托县 010200；3.金河生物科技股份有限公司，内蒙古呼和浩特 010200）

目的：用气相色谱法定量测定盐酸金霉素中次生残留氯乙烷的含量。方法：气相色谱法，采用DB-624石英毛细管柱（30m×0.53mm×3um，固定液为聚乙二醇20-M）；FID检测器；柱温：40℃；进样温度：180℃；检测器温度：250℃；载气为氮气；添加标准为氯乙烷。结果：氯乙烷在3～25 μg/ml时线性良好，线性方程为得Y=9.653×103X-3.183×103（Y氯乙烷峰面积，X氯乙烷标准液浓度），相关系数为r=0.9997；RSD（%）=7.1%～11.6%，平均回收率为97.8%；检测限为1.0ppm。结论：本方法简便、准确快速，可适用于对药品质量的监控。

气相色谱 盐酸金霉素 氯乙烷 含量测定

盐酸金霉素又名盐酸氯四环素，属广谱抗生素，抗菌谱同四环素，对耐青霉素，金黄色葡萄球菌的疗效比四环素稍强，对革兰阳性菌和阴性菌均有抗菌作用。但是，在盐酸金霉素产品提取、干燥加温时，乙醇与盐酸在一定温度条件下反应生成次生残留氯乙烷。由于氯乙烷属于一类残留，接触或摄取后会引起麻醉，出现中枢神经和呼吸抑制，对禽畜或人体可造成伤害。

目前，氯乙烷常用的检测方法是气相色谱法不锈钢填充柱检测，操作烦琐，且检测时间长，灵敏度低，耗费人力、物力。为确保药品质量和对次生残留溶剂残留量的控制，特开发出本文介绍的方法：采用顶空进样技术，用大口径毛细管气相色谱法进行测定，方法分离效果好，速度快、准确度和精密度良好，并可有效规避以往测定方法存在的弊端。

1 仪器和试药

岛津 GC-2014 气相色谱仪，带顶空自动进样器，DB-624石英毛细管柱（30m×0.53mm×3um，固定液为聚乙二醇20-M，FID检测器，岛津GCSolution 2.3版。

氯乙烷来自SIGMA-ALORICH（批号：SHBB5265），色谱纯；二甲基甲酰胺（DMF）：分析纯以上；重蒸馏水。

盐酸金霉素（批号：H20081201，H20081202，H20081203）为金河生物科技股份有限公司生产。

2 色谱条件

毛细管柱：DB-624石英毛细管柱（30m×0.53mm×3um，固定液为聚乙二醇20-M）；柱温：40°C；FID检测器；检测器温度：250°C；载气：氮气（99.999%）；进样温度：180°C；进样体积：1.0ml；

3 方法与结果

3.1 溶液的制备

3.1.1 标准贮备液的制备 精密量取氯乙烷2M甲基叔丁基醚溶液0.97ml，置于50ml量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度，摇匀，继续精密量取稀释液1.0ml，置于50ml量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，继续精密量二次稀释液2.0ml，置于100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，使溶液含氯乙烷为1.0014μg·ml-1（氯乙烷分子量64.5145）。

3.1.2 供试溶液的制备 取盐酸金霉素约0.05g，精密称定，置于20ml顶空瓶中，精密加入水10ml，封瓶，超声并振摇使溶解，摇匀。

3.1.3 参比溶液的制备 取贮备液适量，加水稀释成每1ml中含氯乙烷0.1μg的溶液。取参比溶液10ml，加入20ml顶空瓶中，再精密称取盐酸金霉素样品约0.05g，封瓶，超声并振摇使溶解。

3.1.4 空白溶液的制备 精密量取水10ml，置于20ml顶空瓶中，封瓶。

3.2 测定法

取装有供试溶液的顶空瓶，在60℃平衡45min后进样，在以上色谱条件下测定，记录氯乙烷的保留时间和峰面积；取装有参比溶液的顶空瓶，同法测定，记录氯乙烷的保留时间和峰面积。

计算公式：

At：样品溶液氯乙烷峰面积Ar：参比溶液氯乙烷峰面积 W：样品称样量

3.3 专属性

在本文方法色谱条件下，检测标准溶液中的甲基叔丁基醚溶剂和二甲基甲酰胺稀释剂、盐酸金霉素中乙醇、乙醚、氯仿，以及空白对氯乙烷测定的干扰。

对各制备溶液和制备的混合溶液按上述测定法测定后，氯乙烷能与乙醇、乙醚、甲基叔丁基醚、氯仿和二甲基甲酰胺完全分离，且空白不干扰测定（见图1～图4）。

图1 空白溶液图谱

图2 混合溶液图谱

图3 参比溶液图谱

图4 样品溶液

3.4 线性实验

精密量取标准储备液10ml，置于50ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得到1倍溶液。再精密量取稀释液适量，加水依次稀释得到2倍、4倍、8倍和16倍溶液。量取各倍溶液10ml，分别置于20ml顶空瓶中，封瓶，在该方法色谱条件下测定，记录氯乙烷各浓度对应的峰面积。每一浓度重复3次。以标准溶液各浓度为横坐标（X），对应的平均峰面积为纵坐标（Y）绘制曲线（图5），并计算回归方程和相关系数（r），其结果如下表1：

表1 氯乙烷线性实验结果

Y= 9.653×103X-3.183×103

r=0.9997

氯乙烷浓度在3 ug/ml～25 ug/ml范围线性良好。

3.5 精密度

3.5.1 仪器精密度

精密量取标准储备液10ml，置于20ml顶空瓶中，封瓶，在该方法条件下连续测定5次，记录氯乙烷峰面积（表2），计算RSD为7.5%。

3.5.2 方法精密度

不同日期，由不同化验员采用该方法条件下对3批盐酸金霉素分别平行测定，记录氯乙烷峰面积（表3），计算RSD在7.1%～11.6%。

表2 氯乙烷仪器精密度实验数据

3.6 准确度实验

按照该色谱条件和测定法，对H20081201进行检测和氯乙烷标准含量计算，记录计算结果（图3、图4和表4）与理论值比较，平均回收率为99.99%。

表3 氯乙烷方法精密度实验数据

表4 氯乙烷准确度实验数据

计算说明：

已知At为5222，Ar为11330，样品量为0.05g

样品中含氯乙烷=[5222/（11330-5222）]×0.1 ug/ml×10 ml=0.8549ug

标准氯乙烷实测值=（11330-5222）×0.8549/5222=0.9999 ug

氯乙烷理论加入量=0.1 ug/ml×10 ml=1 ug

回收率%=0.9999/1×100%=99.99%

3.7 检测限和定量限

3.7.1 定量限溶液的制备：取各溶剂贮备液适量，用水多次稀释后配制成含氯乙烷1.50×10-5mg·ml-1的溶液。

3.7.2 检测限溶液的制备：取各溶剂贮备液适量，用水多次稀释后配制成含氯乙烷5.0×10-6mg·ml-1的溶液，即得。

3.7.3 取定量限和检测限溶液各10ml，分别置于20ml顶空瓶中，封瓶，在该方法色谱条件下测定，记录氯乙烷的峰高。当S/N=10时，氯乙烷的定量限为3.0ppm；当S/N=3时，氯乙烷的检测限为1.0ppm（表5）。

表5 定量限与检测限测试结果

4 结论

（1）专属性强。氯乙烷能与乙醇、乙醚、甲基叔丁基醚、氯仿和二甲基甲酰胺完全分离，且空白不干扰测定

（2）氯乙烷在3～25μg/ml时线性良好。r=0.9997，相关系数满足大于0.9的要求。

（3）精密度高。仪器精密度测试峰面积RSD平均为7.5%；方法精密度测试峰面积RSD在7.1%～11.6%。均满足低于15%的要求。

（4）准确度高。标准添加回收为99.99%，满足回收率80%～120%的要求。

（5）定量限为3 ppm，检测限1ppm，满足常规测试要求。

5 讨论

（1）受不同批的柱填充或不同的供应商影响，可能导致运行时间会有一些变化。

（2）实验中如果不是顶空自动进样器，采用水浴一定控制好温度和时间，以确保氯乙烷达到汽液平衡，减少试验误差。

[1]黄铃，关敏.气相色谱法测定氯乙烷的纯度及杂质含量[J].氯碱工业，2016，52（5）：31-35.

[2]周明霞，万仁玲，于靖，等.欧洲药典6.0版介绍[J].中国兽药杂志，2010，44（7）：28-31.