乳腔镜腋窝淋巴结清扫对外周血ICAM-1、CD44表达的影响及其意义*

骆成玉 王 萌 葛沙沙 崔智淼

(首都医科大学附属复兴医院乳腺微创中心，北京 100038)

·临床研究·

乳腔镜腋窝淋巴结清扫对外周血ICAM-1、CD44表达的影响及其意义*

骆成玉**王 萌 葛沙沙 崔智淼

(首都医科大学附属复兴医院乳腺微创中心，北京 100038)

目的探讨乳腔镜腋窝淋巴结清扫治疗乳腺癌的肿瘤学安全性。方法2013年4月～2014年4月，将我院收治的52例乳腺癌患者按患者意愿分成乳腔镜腋窝淋巴结清扫组(乳腔镜组，26例)和常规腋窝淋巴结清扫组(常规组，26例)。术前、术后1天、术后3天、术后5天抽取静脉血，应用ELISA法分析2组细胞间黏附分子1(ICAM-1)及CD44的表达水平。结果乳腔镜组与常规组术前、术后1天、术后3天、术后5天静脉血ICAM-1及CD44水平均无明显差异(P>0.05)。结论乳腔镜腋窝淋巴结清扫术与常规清扫手术一样，没有增加外周血ICAM-1、CD44的表达，具有一定的肿瘤学安全性。

乳腺癌； 血液播散； 乳腔镜腋窝淋巴结清扫； 细胞间黏附分子1； CD44

在乳腺癌手术中，腔镜腋窝淋巴结清扫术的彻底性已被广泛认可，但腋窝脂肪溶解抽吸是否使得肿瘤细胞入血从而增加术后血循环微转移的风险的问题仍存在争议。诊断肿瘤的血循环微转移尚无直接证据。现有研究显示，细胞间黏附分子(intercellular adhesion molecule 1，ICAM-1)和CD44等细胞表面黏附分子对细胞间的相互作用具有重要意义，通过与其配体结合介导白细胞与血管内皮细胞的黏附并降低自然杀伤细胞的活性，增加肿瘤细胞浸润及转移功能，促进肿瘤转移。其在外周血中的表达可以为肿瘤的转移或预后提供有效的预测信息，可以用来监测肿瘤分期和疾病分级，评价各种治疗方法的有效性[1～4]。肿瘤患者血清ICAM-1及CD44水平与肿瘤存在及治疗反应有关，提示其可作为疾病监测的标志物，是一种检测肿瘤存在及转移的非创伤性方法，在评价乳腺癌术后癌细胞有无血循环微转移方面具有重要作用[5～7]。本研究应用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)，通过测定乳腔镜腋窝淋巴结清扫术(mastoscopic axillary lymph node dissection，MALND)和常规腋窝淋巴结清扫术(conventional axillary lymph node dissection，CALND)的术前、术后1天、术后3天、术后5天血ICAM-1及CD44的表达水平，探讨MALND对乳腺癌血行转移的可能影响。

1 临床资料与方法

1.1 一般资料

本研究经医院伦理委员会审批(2013HY第018号)，所有入组者均被详细告知研究细节并签署书面知情同意书。纳入标准：病理确诊乳腺癌，年龄<80岁，腋窝淋巴结经术前临床触诊、彩超检查阳性或术前病理明确转移。排除标准：有远处转移的Ⅳ期，合并其他部位恶性肿瘤病史，已存在引起患侧上肢水肿的疾病，既往有患侧腋窝手术史。2013年4月～2014年4月，在充分沟通的基础上，以患者意愿为主要参照行乳腔镜腋窝淋巴结清扫(乳腔镜组)和常规腋窝淋巴结清扫(常规组)各26例，2组一般资料无统计学差异(P>0.05)，具有可比性，见表1。

表1 2组一般资料比较

1.2 方法

1.2.1 手术方法 2组手术均为同一组医师实施。

常规组：按照传统开放手术方式完成CALND和乳腺癌改良根治术。

乳腔镜组[6]：先行腋窝脂肪溶解抽吸MALND，再行乳腺癌改良根治术。MALND主要步骤：固定体位以充分暴露术区；配制脂肪溶解液并注入腋区；溶脂起效后行腋窝脂肪抽吸；建立腋窝气腔以制造手术操作空间；行腋窝淋巴结清扫。

1.2.2 样本的采集、处理、保存和测定 术前、术后1天、术后3天、术后5天采集外周静脉血约5 ml，肝素抗凝，离心后取上清液置于-80 ℃冰箱保存，统一检测。ELISA步骤：向孔内加入100 μl生物素标记的抗ICAM-1或CD44抗体，室温下放置30 min；洗涤4次；加入100 μl辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素抗体，用黏性纸张贴在板子上，室温下放置30 min；洗涤4次；加入100 μl四甲基联苯胺(TMB)底物反应液，室温下放置10～20 min；加入100 μl终止液。溶液颜色应该从蓝色变成黄色。轻轻拍板子，保证孔内液体充分混匀，在30 min内用酶标仪测定OD值，波长为450 nm，630 nm波长OD值为参照， 分别得到ICAM-1、CD44的浓度和其对应OD值，结果见表2，绘制标准曲线。根据标准曲线得到相应的稀释样品的值，ICAM-1乘80，CD44乘20，从而得到各自的蛋白浓度。

表2 ICAM-1和CD44样品浓度-OD对应表

1.3 统计学处理

2 结果

2组术前、术后1天、术后3天、术后5天ICAM-1和CD44水平均无统计学差异(P>0.05)，见表3。

表3 2组ICAM-1和CD44水平比较 ng/ml

3 讨论

MALND在保证腋窝淋巴结清扫效果的前提下，进一步降低手术并发症的发生风险，术后能够获得较好的上肢功能，因瘢痕创伤小而具有较佳的胸部及腋窝视觉效果，以及由此产生的乳房功能效果[8～11]，在乳腺癌外科治疗中的地位也逐渐提升，但目前对MALND肿瘤学安全性的研究尚不多。

ICAM-1是作用较强的黏附分子之一，属免疫球蛋白超家族，其特异性抗体为存在于淋巴细胞表面的淋巴细胞功能相关抗原1(lymphocyte function associated antigen 1,LFA-1)，在正常细胞不表达或仅有微量表达，在乳腺癌组织中高表达。ICAM-1促进白细胞与内皮细胞之间的黏附可能是诱导血管生成的起始事件[12]。ICAM-1与肿瘤的生物学行为有关，主要起异嗜黏附作用，且实体肿瘤的生长、转移与肿瘤中表达水平有关。何军等[13]观察到有转移的乳腺癌组织中ICAM-1水平明显高于无转移的乳腺癌组织，淋巴结转移阳性者ICAM-1水平明显高于淋巴结转移阴性者。郑辉等[14]观察到ICAM-1及LFA-1与乳腺癌的淋巴道转移有关，并且通过两者的协同作用促进乳腺癌的淋巴道转移，ICAM-1表达水平与乳腺癌的淋巴道转移呈正相关，可作为数据指标预测和治疗乳腺癌的淋巴转移，其作用机制与增加癌细胞之间排斥、促进癌细胞与淋巴细胞之间黏附有关。CD44即Hermes抗原，是广泛表达于细胞表面的一类单链糖蛋白，参与细胞运动及细胞内外的信号转导，介导淋巴细胞与毛细血管后微静脉的内皮细胞结合，通过与细胞内骨架蛋白结合而增强肿瘤细胞的运动能力，或与透明质酸结合形成降解物而促进肿瘤细胞滋养血管的生长，在肿瘤细胞转移中起重要作用。研究证实乳腺癌转移者CD44高表达，不同病理类型的乳腺癌组织间无统计学差异，但CD44高表达与乳腺癌的总生存期和无病生存期无统计学意义上的紧密联系[15，16]。焦伟等[17]观察到乳腺癌组织中CD44阳性表型细胞比例决定腋窝淋巴结转移程度。包俊杰等[18]观察到CD44阳性表达与乳腺癌浸润转移关系密切。人乳腺癌细胞株的研究证实，CD44参与乳腺癌细胞的运动、黏附和浸润，从而促进转移[19]。吴磊等[20]的研究显示，沉默CD44表达可有效抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力。因此，ICAM-1和CD44等细胞表面黏附分子对细胞间的相互黏附等具有重要作用，对于判断转移具有指导和预测意义。

本研究应用ELISA法测定接受乳腔镜和常规腋窝淋巴结清扫术的乳腺癌患者术前、术后1～5天血ICAM-1及CD44的表达水平，结果显示，2组血ICAM-1及CD44的表达水平在各时点均无明显差异。2组术后ICAM-1及CD44的表达水平均较术前下降，是手术解决了肿瘤负荷的正常现象，侧面反映了ICAM-1及CD44的表达水平对肿瘤的预测及指导作用。因此，我们认为MALND对癌细胞血循环微转移无影响，进一步证明乳腺癌MALND在肿瘤学方面的安全性。

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EffectsandSignificanceofMastoscopicAxillaryNodeDissectiononExpressionofICAM-1andCD44inPeripheralBlood

LuoChengyu,WangMeng,GeShasha,etal.

BreastMinimallyInvasiveCenter,AffiliatedFuxingHospital,CapitalMedicalUniversity,Beijing100038,China

Correspondingauthor:LuoChengyu,E-mail:luochengyu@163.com

ObjectiveTo investigate the oncologic safety of mastoscopic axillary lymph node dissection (MALND).MethodsA total of 52 patients with breast cancer were divided into two groups depending on patient’s choice: the MALND group (mastoscopic axillary lymph node dissection,n=26) and CALND group (conventional axillary lymph node dissection,n=26). The blood samples of the two groups were examined at preoperation and the 1st, 3rd, and 5thday after operation to analyze and compare the expressions of intercellular adhesion molecule 1 (ICAM-1) and CD44.ResultsThere were no statistical differences in serum levels of ICAM-1 and CD44 between the two groups at preoperation and the 1st, 3rd, and 5thday after operation (P>0.05).ConclusionsAs compared with CALND, MALND does not increase the expression of ICAM-1 and CD44 in peripheral blood. MALND is oncologically safe.

Breast cancer; Blood dissemination; Mastoscopic axillary lymph node dissection; Intercellular adhesion molecule 1; CD44

A

：1009-6604(2017)09-0769-03

10.3969/j.issn.1009-6604.2017.09.001

2017-03-11)

(

2017-05-15)

(责任编辑：王惠群)

北京市科学技术委员会“首都临床特色应用研究”(项目编号:Z131107002213145)

**通讯作者，E-mail：luochengyu@163.com