乌药不同提取物对急性酒精性肝损伤小鼠肠推进率的影响*

季梦漂 谭明明 王军伟 丁慧珍 楼招欢

1 浙江省天台县人民医院 浙江 天台 317200 2 浙江中医药大学 浙江 杭州 310053

中药研究

乌药不同提取物对急性酒精性肝损伤小鼠肠推进率的影响*

季梦漂1谭明明1王军伟1丁慧珍1楼招欢2#

1 浙江省天台县人民医院 浙江 天台 317200 2 浙江中医药大学 浙江 杭州 310053

乌药 急性酒精性肝损伤 肠推进率 小鼠随着饮酒人群的逐年增加，急性酒精性肝损伤的发病率持续上升。目前，酒精引起急性肝损伤伴肠道粘膜受损、屏障功能障碍等方面多有探讨[1-2]，而造成肠道动力障碍的却鲜有研究。殊不知肠道动力障碍导致酒精代谢物停留小肠时间增长，给毒物的吸收提供机会，而内毒素吸收入血，刺激炎性细胞因子大量释放，将导致肝脏遭遇“二次攻击”。因此增强胃肠动力，加快肠源性内毒素排泄，是治疗急性酒精性肝损伤的重要途径。本课题组前期的研究表明乌药可通过抑制抗氧化损伤[3]、减轻炎症反应[4]等作用保护肝组织，故本实验以小肠推进率为研究要点，探讨酒精对肠道运动的作用以及乌药不同提取物干预后的影响。

1 材料

1.1 药物与试剂：①乌药，由浙江省天台山乌药生物工程有限公司提供，2013年8月采自浙江省天台县三州乡，经该公司陈方标药师鉴定为樟科（Lauraceae）山胡椒属（Lindera）植物乌药Lindera aggregate（Sims）

Kosterm的干燥块根。②阳性对照药：思密达[博福-益普生（天津）制药有限公司，批号：K030407]，规格3g× 10袋，用蒸馏水配制成浓度为0.18g/ml的混悬液备用。③白酒：红星二锅头酒（酒精度52%），2.0L/瓶，北京红星股份有限公司。与双蒸水按一定体积比例稀释，酒精体积分数为50%。

1.2 实验动物：昆明小鼠64只，雌雄各半，体重18～22g（购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，动物质量合格证号：0198894、0197965）。

2 方法

2.1 乌药提取物制备：乌药水提取物制备：取乌药适量，加入12BV水提取1.5h，滤取药液，药渣继用10BV水提取1h，滤取药液，合并2次药液，减压回收并适当浓缩，即得乌药水提取物（WYSTW）。乌药醇提取物制备：取乌药适量，加入12BV 75%乙醇提取1.5h，滤取药液，药渣继用10BV乙醇提取1h，滤取药液，合并两次药液，减压回收乙醇，并适当浓缩，即得乌药醇提取物（WYCTW）。乌药醇提取物各萃取物：取乌药醇提取物适量依次用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇，分次萃取至色淡，分取并合并各萃取层，减压回收溶剂，分别得乌药醇提取物石油醚萃取物（WYCTC1）、乌药醇提取物乙酸乙酯萃取物（WYCTC2）、乌药醇提取物正丁醇萃取物（WYCTC3）。取乌药醇提取物各萃取物，用适量吐温-80研磨后，加水置磁力搅拌器上混匀，加纯水稀释，使每毫升药液相当于1g生药，即得各萃取物溶液。上述各溶液，临用前用适量纯水稀释，使每毫升药液相当于0.5g生药。

2.2 动物处理：选取昆明小鼠64只，随机分为8组，每组8只，雌雄各半，即正常对照组、模型对照组、阳性对照组、乌药水提物（8g/kg）组、乌药醇提物（8g/kg）组、乌药醇提石油醚萃取物（8g/kg）组、乌药醇提乙酸乙酯萃取物（8g/kg）组、乌药醇提正丁醇萃取物（8g/kg）组，所有小鼠均给予基础饲料，自由采食饮水。除正常对照组（以等体积的蒸馏水灌胃）外，其余各组小鼠均给予酒精体积浓度50%的白酒灌胃造模，每日1次，灌胃容积0.12ml/10g，连续14天造模结束。自造模第1天起，除正常对照组和模型对照组灌服蒸馏水外，其余各给药组分别给予相应的药物灌胃，每日1次，灌胃容积为0.1ml/ 10g体重，连续15天。

2.3 指标检测：小肠推进率：给药14天后，禁食16h，末次给药后2h，每只小鼠灌服墨汁0.4ml，15min后脱颈椎处死，迅速取小肠，计算肠推进率。小肠推进率（%）=墨汁在肠内推进距离/小肠全长×100%。

3 结果

与正常对照组相比，模型对照组小鼠小肠推进率显著减少（P＜0.01）。与模型对照组比较，阳性对照组、WYSTW、WYCTW、WYCTC1及WYCTC3组小鼠小肠推进率明显提高（P＜0.05或P＜0.01）。见表1。

表1 乌药不同提取物对急性酒精性肝损伤模型小鼠小肠推进率的影响（±s）

表1 乌药不同提取物对急性酒精性肝损伤模型小鼠小肠推进率的影响（±s）

注：与正常对照组比较，△△P＜0.01；与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

小肠推进率（%）60.00± 7.71 42.85± 9.41ΔΔ60.41±12.50**60.20±10.64**58.61± 8.81**54.48± 9.32*47.02± 6.16 54.40± 7.07*组别正常对照组模型对照组阳性对照组WYSTW组WYCTW组WYCTC1组WYCTC2组WYCTC3组剂量（g/kg）——1.8 8 8 8 8 8

4 讨论

乌药具有理气止痛、温肾散寒之功效[5]。现代研究表明，乌药对胃肠平滑肌有双向调节作用，既能促进肠蠕动，又能缓解胃肠平滑肌痉挛。在单药方面，李氏等[6]研究表明，乌药提取物在动物体内、体外作用表现出的药理效应不同，对小鼠的体内作用表现为促进胃肠收缩，提高小肠炭末推进率；对家兔的体外作用表现为抑制效应。龚氏等[7-8]实验发现乌药不同提取物对新斯的明所致小鼠小肠推进功能亢进有一定抑制作用，对阿托品所致小肠推进功能抑制有一定促进作用。在方药协同方面，发现以乌药为君的四磨汤有调理肠胃机能的作用。另有研究[9]显示，四磨汤能加快小鼠胃排空和肠推进。刘氏等[10]也发现四磨汤四味组成药物均能影响胃肠运动，促进慢性应激小鼠肠推进。酒精引起急性酒精性肝损伤的机制非常复杂，肠渗漏和肠道内毒素是目前研究热点。然而正常的肠道屏障有阻止内毒素等大分子毒性物质入血的栅栏作用[11]。研究表明，乙醇摄入肠道，其与代谢产物积聚释放大量炎性因子，破坏肠粘膜上皮细胞的紧密连接，导致肠粘膜损伤及通透性增加[12]，同时造成肠道蠕动减慢，胃肠传输时间延长，细菌过度繁殖，产生大量内毒素，基于“肠-肝循环”理论，从而造成肝脏二次损伤。目前肠道屏障功能障碍的致病机制已较明晰，因此本实验侧重于肠道动力方面的研究。

在本研究中，急性酒精性肝损伤模型组小鼠与正常对照组相比，小肠推进率明显降低，差异有统计学意义（P＜0.01），说明酒精抑制了小肠正常运动。根据药效结果显示，与模型对照组比较，阳性对照组、乌药水提取物、醇提取物、乌药醇提石油醚萃取物及乌药醇提正丁醇萃取物组均能不同程度地提高模型小鼠小肠推进率（P＜0.05或P＜0.01），提示药物干预后小肠运动较损伤后活跃，各给药组对模型小鼠小肠运动功能具有一定的改善作用。药效作用对比，发现乌药醇提取物、水提取物与阳性对照组作用相当；醇提取物三个萃取部位中，乌药醇提石油醚萃取物和醇提正丁醇萃取物效果较优。综上所述，乌药不同提取物对急性酒精性肝损伤小鼠具有一定保护作用，其机制可能与改善酒精损伤后小鼠的小肠运动功能，加快内毒素排泄有关。

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2017-02-26

国家自然科学基金项目基于“肠-肝轴”的乌药抗慢性酒精性肝损伤的作用机制研究，编号：81503328；浙江省医药卫生科技计划项目乌药不同提取物对慢性酒精性肝损伤模型大鼠肠源性内毒素血症的干预作用，编号：2015DTA021；浙江省科技计划项目乌药抗酒精性肝损伤有效部位研究，编号：2016C33184；台州市科技计划项目乌药对急性酒精性肝损伤模型大鼠肠源性内毒素血症的干预作用，编号：2014A33339

# 通讯作者：楼招欢，E-mail：lou_jasmine@163.com