滤过膜与擦镜纸双层包埋法在细胞块制作中应用

程新宇，周成美，赵天翔，孙 虓，栾 岚，吴 非，王翠芳

滤过膜与擦镜纸双层包埋法在细胞块制作中应用

程新宇1，周成美2，赵天翔3，孙 虓1，栾 岚1，吴 非1，王翠芳1

滤过膜；双层包埋；细胞块

随着分子生物学飞速发展，靶向治疗在肿瘤治疗中被广泛应用。传统脱落细胞学制作方法，不能满足临床需求。如何在量少的标本中尽可能大量收集细胞，减少细胞丢失在细胞块制作中显得尤为重要。本科室在实践工作中将膜式液基薄层制作过滤器上的滤过膜(简称滤过膜)用刀裁剪，放在包埋时裁好的擦镜纸上，对收集的细胞沉淀物进行双层包埋，形成细胞块。该方法操作简便，最大限度收集细胞，有利于恶性肿瘤类型的鉴别及靶向治疗的开展，现介绍如下。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1标本与材料 收集沈阳医学院附属中心医院病理科2013～2016年各临床科室送检的脱落细胞学标本，包括胸水、腹水、心包积液及各种冲洗液。

1.1.2试剂与仪器 单克隆抗体一抗(即用型)CK7购自福州迈新公司，所有标本均经10%中性福尔马林固定。滤过膜，中佳SC-3612低速离心机，Leica-Asp300s全自动脱水机，Leica-HM315R石蜡切片机，Leica-G-1140(C)石蜡包埋机，VENTANA-BenchMark XT全自动免疫组化仪。

1.2方法

1.2.1传统方法离心 将送检标本室温静置15 min，取底部液体200 mL，分别装入50 mL塑料尖底离心管4瓶，以800g离心10 min，弃去上清液，留下细胞沉淀物。在其中1瓶50 mL塑料尖底离心管底部取2滴细胞沉淀物，制备2张细胞传统涂片，HE染色。

1.2.2乙醇固定单层包埋法 (1)传统方法得到的细胞沉淀物，用95%乙醇10 mL固定6 h，入离心机800g离心10 min，吸去上清，留下细胞沉淀物；(2)用吸管挑出细胞沉淀物，放入裁好擦镜纸上，将擦镜纸对折包裹，入包埋盒；(3)按常规组织块处理，固定、脱水、浸蜡、包埋、切片、HE染色及免疫组化SP法染色

1.2.3滤过膜双层包埋法 (1)传统方法得到的细胞沉淀物，经10%中性福尔马林3 mL固定1 h，入离心机800g离心10 min，吸去上清，留下细胞沉淀物；(2)用刀将滤过膜裁下，对折压紧后再对折压紧，形成一个敞口锥形，放在包埋盒的擦镜纸上(图1)；(3)将准备好的细胞沉淀物用吸管挑出，放在敞口锥形滤过膜锥底，再用裁好擦镜纸包裹，放入包埋盒中(图2)；(4)按常规组织块处理，固定、脱水、浸蜡、包埋、切片、HE染色及免疫组化SP法染色。

2 结果

乙醇固定单层包埋法，细胞分散，背景干净(图3)；滤过膜双层包埋法，细胞量较多，细胞聚集，免疫组化SP法染色显示CK7阳性结果定位准确，背景清晰，易于诊断(图4)。

①②③④

图1滤过膜双层包埋法制作流程图2细胞沉淀物用吸管挑出，放在敞口锥形滤过膜锥底，再用裁好擦镜纸包裹图3乙醇固定单层包埋法(胸水)，细胞分散，恶性图4滤过膜双层包埋法(胸水)，细胞量较多，CK7呈阳性，恶性，SP法

3 讨论

随着分子生物学飞速发展，临床个体化治疗备受患者重视。传统涂片制作方法的癌细胞检出率低，重复性差，不能满足临床需求。近年脱落细胞学细胞块制作备受推崇，有报道采用2%～4%琼脂糖凝胶、石蜡双重包埋法[1]等制作，终因制作方法复杂难以推广。如何能最大限度保留细胞，并使散在分布细胞聚集成团，防止细胞沉淀物丢失且操作简便的制作方法，是病理技术人员探索细胞块制作的关键[2]。

滤过膜原本是膜式液基薄层制作中过滤器的一部分，过滤器直径2 cm蓝色管状，一端敞口，一端有滤过膜，膜的过滤孔径0.5 μm，功能是过滤器一端敞口套在机器负压口吸引带有保存液的液体标本，液体标本通过滤过孔径0.5 μm滤过膜时，将液体标本中细胞，收集在滤过膜内、外两侧，解除负压后制成液基薄片。

本实验组将过滤器上有滤过功能、滤过孔径0.5 μm滤过膜，沿直径2 cm蓝色管口裁剪下来，形成直径为2 cm的滤过膜，对折压紧后再对折压紧，形成敞口锥形，放在包埋的擦镜纸上，离心后得到的细胞沉淀物入敞口锥形滤过膜锥形底，进行双层包埋。该方法是病理技术上的创新，国内尚未见文献报道。

在制作细胞块实验过程中，推荐使用乙醇固定单层包埋法。但此方法也有不足之处——细胞沉淀物经乙醇固定，再用裁好擦镜纸对折包好，入包埋盒，经过固定、脱水、透明、浸蜡，包埋时易与薄薄的擦镜纸粘在一起，需有经验技术人员细心打开，耗费一定时间。若擦镜纸质量差，擦镜纸打开过程中碎裂，导致细胞块制作失败。另外，细胞沉淀物大多呈灰白色，与擦镜纸颜色基本一致，分辨有一定难度，通常会丢失一部分细胞。因此，我们寻找既能与细胞沉淀物一同固定脱水浸蜡，又能使包埋方法简便，还能防止细胞沉淀物不丢失的新材料。滤过膜高温塑料材质，过滤孔径0.5 μm能使液体通过，并能与细胞沉淀物一起固定脱水透明浸蜡，形成蜡块。滤过膜有韧性，对折压紧再对折压紧后，在包埋的擦镜纸上，会形成敞口锥形，细胞沉淀物放入敞口锥形滤过膜锥形底，起到网住细胞沉淀物作用，防止细胞沉淀物丢失。内层敞口锥形滤过膜是细胞沉淀物的第一道防线，外层包埋的擦镜纸遇水紧紧粘在一起，是细胞沉淀物的第二道防线。包埋时病理技术人员直接用镊子撕开擦镜纸，露出滤过膜，灰白色细胞沉淀物在敞口锥形滤过膜锥形底中，使细胞沉淀物易于寻找收集。该方法简便且包埋节省时间，脱落细胞沉淀物得到最大限度收集，易于操作和推广。

日常工作中将该方法用在膜式液基薄层制作后，临床再次要求细胞块制作收到良好效果。在乙醇固定单层包埋法中，我们将乙醇固定细胞沉淀物6 h，改为采用10%中性福尔马林3 mL固定1 h，节省制作细胞块时间。将该方法运用到胃镜、细针穿刺小标本活检包埋中，其方法简便安全且提高了工作效率，有效防止小标本的丢失。

总之，在细胞块制作中采用滤过膜与擦镜纸双层包埋法值得进一步推广应用。

[1] 黄雅萍，蔡路兵，翟梅娟，等. 胸腹水细胞沉渣包埋技术及应用[J]. 临床与实验病理学杂志, 2004,20(1):112-113.

[2] 张 洋，车千红， 闫禄春. TCT细胞标本保存液及其滤过膜管在胸腹水细胞沉渣提取中的应用[J]. 临床与实验病理学杂志, 2004,20(1):1410.

时间：2017-7-18 11:52 网络出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170718.1152.031.html

1沈阳医学院附属中心医院病理科，沈阳 1100242锦州医科大学第三临床学院2015级临床医学17班，锦州 1210003沈阳医学院基础医学院2013级医学检验技术专业1班，沈阳 110020

程新宇，女，硕士，主任技师。Tel：(024)85715736，E-mail：cxy6816@126.com 王翠芳，女，硕士生导师，主任医师，教授，通讯作者。 E-mail：1310214448@qq.com

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1001-7399(2017)07-0818-02

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.07.031

接受日期：2017-05-20