消化后AB-PAS染色法在黏液染色中的应用

陈敬文，张 伟，王天娲，程 俊，罗金风

消化后AB-PAS染色法在黏液染色中的应用

陈敬文1，张 伟2，王天娲1，程 俊1，罗金风1

消化后AB-PAS；黏液染色；特殊染色

AB-PAS是一种常见的特殊染色法，其能较好地显示中性黏液和酸性黏液，但有时组织内含有的糖原也会显示，且无法区分中性黏液，从而影响染色结果的判断。本科室根据糖原可被淀粉酶分解破坏的原理[1]，在染色前用淀粉酶消化切片中的糖原，再进行AB-PAS染色，取得良好的效果，现介绍如下。

1 材料与方法

1.1标本来源收集深圳市人民医院病理科已知AB-PAS染色阳性标本，每份标本石蜡切片2张，厚4 μm，分为两组：(1)常规AB-PAS染色(对照组)，(2)消化后行AB-PAS染色(实验组)。

1.2试剂配制(1)淀粉酶消化液：淀粉酶1 g，蒸馏水100 mL。(2)阿尔辛蓝染色液：阿尔辛蓝8GS 1 g，冰醋酸3 mL，蒸馏水97 mL。(3)3%醋酸溶液：冰醋酸3 mL，蒸馏水97 mL。(4)0.5%过碘酸氧化液：过碘酸0.5 g，蒸馏水100 mL。(5)Schiff染色液：碱性复红1 g，1N盐酸20 mL，偏重亚硫酸钠1 g，重蒸馏水200 mL[2]。

1.3方法对照组AB-PAS染色法：(1)常规石蜡切片，脱蜡至水。(2)蒸馏水洗，3%醋酸水溶液3 min。(3)阿尔辛蓝染色液30 min。(4)蒸馏水洗，过碘酸氧化10 min。(5)自来水冲洗，蒸馏水洗，Schiff染色液15 min。(6)流水冲洗2～5 min，蒸馏水洗。(7)95%乙醇、无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固[3]。

实验组AB-PAS染色法：(1)常规石蜡切片，脱蜡至水。(2)蒸馏水洗，淀粉酶消化液30 min。(3)蒸馏水洗，3%醋酸水溶液3 min。(4)阿尔辛蓝染色液30 min。(5)蒸馏水洗，过碘酸氧化10 min。(6)自来水冲洗，蒸馏水洗，Schiff染色液15 min。(7)流水冲洗2～5 min，蒸馏水洗。(8)95%乙醇、无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

2 结果

对照组AB-PAS染色：中性黏液物质及糖原均呈红色，酸性黏液物质呈蓝色(图1)。实验组AB-PAS染色：中性黏液物质呈红色，酸性黏液物质呈蓝色，糖原已被完全消化(图2)。

①②

图1对照组AB-PAS染色：胃癌组织的中性黏液和糖原呈红色，酸性黏液呈蓝色图2实验组AB-PAS染色：胃癌组织的中性黏液呈红色，酸性黏液呈蓝色

3 讨论

正常黏膜上皮细胞可分泌黏液，分别为中性黏液和酸性黏液，在HE染色中两者黏液物质无法区分，常需用黏液物质染色区分；病理状态下，结缔组织、心肌、肾脏等一些实质性器官，也可出现黏液水肿、黏液变性和黏蛋白增多的现象，也需用黏液物质染色区分和证明；在一些肿瘤的诊断和研究方面，也常常需要黏液染色进行观察和鉴别[4]。在各种黏液物质的特殊染色中，AB-PAS是一种常用的染色方法，它利用阿尔辛蓝和PAS的共同反应，能较好的显示中性黏液和酸性黏液：阿尔辛蓝属于碱性染料，染料分子中带正电荷的盐键和酸性黏液物质中带负电荷的酸性基团结合呈蓝色；中性黏液物质与过碘酸-无色品红起反应，生成红色复合物。但PAS在显示中性黏液的同时，如组织内含有糖原，则糖原也会显示出来，且和中性黏液混合在一起无法区分，影响结果判读，有时需另加做1张消化后PAS才能加以区分和证实。本组采用消化后的AB-PAS染色，用淀粉酶或唾液来消化糖原，经两者消化的切片染色结果并无明显差异，具体使用哪种方法进行消化糖原，可根据自身情况进行选择：(1)淀粉酶使用方便，效果理想，但存放过久或保存不当，导致酶的活性失活，对糖原的消化作用丧失。因此，用淀粉酶染色时均需经阳性对照试验后才能使用。(2)唾液的消化能力较强，效果较好，但获取过程稍嫌复杂，每次收集唾液前先用清水漱口，以清除口腔内的各种残渣，然后用烧杯收集唾液，以玻璃棒搅拌均匀，加9倍蒸馏水稀释，充分搅匀后使用[5]。待充分消化掉组织内的糖原后，再进行阿尔辛蓝和PAS染色，这样染色时就不会出现糖原，对中性黏液及酸性黏液能更好的显示，不会对结果的判读带来影响，也无需再加做消化后的PAS加以证实和区分，既节省了试剂也提高了工作效率。

[1] 龚志锦，詹镕洲. 病理组织制片和染色技术[M].上海:科学技术出版社,1994(1):155.

[2] 梁英杰，凌启波，张 威. 临床病理学技术[M].北京:人民卫生出版社, 2011(1):225-230.

[3] 龚志锦，詹镕洲. 病理组织制片和染色技术[M].上海:科学技术出版社,1994(1):158-160.

[4] 祁珊珊. 过碘酸-Schiff(PAS) 染色方法的改良及其在病理诊断中的应用[J]. 临床与实验病理学杂志, 2016,32(7):825-826.

[5] 凌启波. 实用病理特殊染色和组化技术[M]. 广州：广东高等教育出版社,1989(1):209.

时间：2017-7-18 11:52 网络出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170718.1152.030.html

1深圳市人民医院病理科 5180202广州军区广州总医院病理科，广州 510010

陈敬文，男，主管技师。E-mail： a780916@163.com

R 446

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1001-7399(2017)07-0817-02

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.07.030

接受日期：2017-05-12