乳腺浸润性导管癌中CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR的表达及其临床意义

2017-09-20章青波卢玫瑰徐宝福周巧霞王超群黄飞骏

临床与实验病理学杂志 2017年7期

章青波，卢玫瑰，徐宝福，王拴，赵丽，周巧霞，严赫，王超群，黄飞骏

章青波1，卢玫瑰1，徐宝福1，王拴1，赵丽1，周巧霞1，严赫1，王超群2，黄飞骏1

目的探讨PI3K-AKT信号通路分子CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR在乳腺浸润性导管癌中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化EnVision两步法检测73例乳腺浸润性导管癌组织中CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR的表达，分析其与临床病理特征的关系及表达的相关性。结果CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR的表达与患者年龄、肿瘤大小、组织学分级及淋巴结转移无明显相关性。CD44与TAGLN-2表达呈正相关(r=0.311，P=0.007)；TRIM24与TAGLN-2表达呈正相关(r=0.421，P=0.000)；CD44与ER表达呈负相关(r=-0.285，P=0.015)；ER与PR表达呈正相关(r=0.598，P=0.000)。CD44阳性组患者术后5年累积生存率低于CD44阴性组(P=0.002)；ER阳性组患者术后5年累积生存率高于ER阴性组(P=0.026)。结论在乳腺癌中CD44、TRIM24可能通过激活PI3K-AKT信号通路上调TAGLN-2表达，CD44可能通过激活PI3K-AKT信号通路下调ER表达。CD44、ER有望成为预测乳腺浸润性导管癌患者预后的辅助因子，联合检测CD44、ER、PR的表达有助于乳腺浸润性导管癌治疗策略的选择及优化。

乳腺肿瘤；浸润性导管癌；CD44；TRIM24；TAGLN-2；ER；PR；临床病理特征

乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，其中70%以上为乳腺浸润性导管癌[1]。乳腺癌的发生、发展与多种信号通路的异常激活相关，阐明这些信号通路在乳腺癌发生、发展过程中的作用，对乳腺癌的防治有重要意义[2]。PI3K-AKT信号通路与肿瘤细胞的周期、增殖、侵袭、转移等密切相关，很多肿瘤中均检测到PI3K编码基因(PIK3)突变和AKT的活化[3]，其中Luminal B型乳腺癌 PIK3CA基因突变率达29%[4]。研究显示PI3K-AKT信号通路与乳腺癌密切相关，但其作用机制尚待进一步分析。本文采用免疫组化EnVision两步法检测PI3K-AKT通路上游分子CD44、三重基序蛋白24(tripartite motif-containing 24, TRIM24)及下游分子转胶蛋白-2(transgelin-2, TAGLN-2)、ER、PR在乳腺浸润性导管癌中的表达，着重探讨其与乳腺癌临床病理特征的关系及意义，以期为乳腺癌的分子靶向治疗提供新思路。

1 材料与方法

1.1临床资料收集2008年1月～10月徐州医学院附属医院收治的73例乳腺浸润性导管癌患者，所有组织均经HE染色观察确诊。73例患者均为女性，年龄27～87岁，平均52.3岁。

1.2方法将组织制作成病理组织芯片，4 μm厚切片，免疫组化采用EnVision两步法，切片脱蜡、复水、高压热处理抗原修复、封闭等，具体操作按试剂盒说明书进行。兔抗人CD44单克隆抗体(1 ∶200)购自英国Abcam公司，兔抗人TRIM24单克隆抗体(1 ∶200)、兔抗人TAGLN-2单克隆抗体(1 ∶150)、兔抗人ER单克隆抗体(1 ∶200)、兔抗人PR单克隆抗体(1 ∶200)，均购自美国Proteintech公司；4 ℃孵育过夜，羊抗兔二抗(北京中杉金桥公司)37 ℃孵育1 h，经DAB显色，苏木精复染，脱水、透明、封固等。

1.3结果判断免疫组化结果由两名病理医师共同观察评估，每个标本选择5个在10×40倍随机视野下进行观察。(1)CD44、TRIM24及TAGLN-2阳性判断：按染色强度评分：0分为无着色、1分为淡黄色、2分为棕黄色、3分为褐色；按癌细胞染色阳性率评分：无阳性细胞为0分、1%～10%为1分、11%～50%为2分、51%～75%为3分、76%～100%为4分；将两项得分结果相乘：>3分者为阳性，≤3分者为阴性。(2)ER、PR阳性判断：细胞核出现明显的棕黄色颗粒为阳性细胞，阳性细胞率<10%为阴性，≥10%为阳性[5]。

1.4统计学分析所有数据均通过IBM SPSS Statistics 21.0软件进行统计学分析。采用χ2检验分析CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR蛋白表达与乳腺浸润性导管癌患者年龄、病理组织学分级、肿瘤大小、淋巴结转移的相关性。采用Pearson或Spearman相关性检验分析以上标志物表达之间的相关性。采用Kaplan-Meier法分析CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR表达对患者术后5年生存率的影响。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR的表达及与乳腺浸润性导管癌临床病理特征的关系73例乳腺浸润性导管癌组织中蛋白表达：CD44主要表达于胞膜；TRIM24主要表达于胞核；TAGLN-2主要表达于胞质，部分表达于胞核；ER及PR主要表达于胞核。CD44阳性者48例(65.8%)，TRIM24阳性者60例(82.2%)，TAGLN-2阳性者67例(91.8%)，ER阳性者58例(79.5%)，PR阳性者54例(74.0%)。经统计学分析，以上5种蛋白表达在患者不同年龄、不同肿瘤大小、不同组织学分级及淋巴结有无转移分组之间的差异均无统计学意义(P>0.05，表1)。

2.2CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR表达与乳腺浸润性导管癌患者预后的关系Kaplan-Meier生存曲线显示乳腺浸润性导管癌组织中CD44阳性组患者术后5年累积生存率低于阴性组，两组之间差异有统计学意义(P=0.002，图1A)；ER阳性组患者术后5年累积生存率高于阴性组，两组之间差异有统计学意义(P=0.026，图1B)；PR阳性组患者术后5年累积生存率高于阴性组(P=0.091，图1C)；TRIM24、TAGLN-2表达对不同组患者术后5年累积生存率影响差异无统计学意义(P>0.05，图1D、E)。

2.3CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR表达的相关性Pearson/Spearman相关性检验发现，CD44与TAGLN-2表达呈正相关(r=0.311，P=0.007)，CD44与ER表达呈负相关(r=-0.285,P=0.015)；TRIM24表达与TAGLN-2表达呈正相关(r=0.421，P=0.000)；ER表达与PR表达呈正相关(r=0.598，P=0.000，表2)。

表2 乳腺浸润性导管癌中CD44、TAGLN-2、TRIM24、ER、PR表达的相关性

3 讨论

PI3K-AKT信号通路与乳腺癌发生、发展密切相关，本实验选取PI3K-AKT信号通路上游分子CD44、TRIM24及下游分子TAGLN-2、ER及PR，采用免疫组化EnVision两步法检测5种蛋白在乳腺浸润性导管癌中的表达，分析它们的相关性及临床意义，为进一步阐明PI3K-AKT在乳腺癌发生、发展中的作用奠定理论基础。

表1 CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR表达与乳腺浸润性导管癌临床病理特征的关系

图1乳腺浸润性导管癌中CD44(A)、ER(B)、PR(C)、TRIM24(D)及TAGLN-2(E)表达水平患者预后情况

CD44属于膜表面糖蛋白，参与细胞黏附、迁移等过程，与乳腺癌淋巴结转移相关[6]。CD44处于PI3K/AKT信号通路上游，其对肿瘤细胞活动的调节可能通过PI3K/AKT通路实现[7-8]。TRIM24是含表皮生长因子反应成分的反式激活因子，可与PI3K结合并激活PI3K/AKT通路[9]。TAGLN-2属于骨架蛋白，PI3K-AKT激活后可增加其表达，从而提高肿瘤细胞的侵袭能力[10]。ER和(或)PR阳性乳腺癌患者对激素治疗敏感性更高、预后更好，ER、PR阳性与PIK3CA基因突变相关，其中40%的ER阳性乳腺癌患者存在PIK3CA基因突变[3]。Bosch等[11]发现ER是PI3K/AKT下游分子，PI3K抑制剂可促进激素受体阳性乳腺癌患者ER的表达。

本实验发现CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR表达与患者年龄、肿瘤大小、癌组织学分级、淋巴结转移均无显著相关性。其中CD44表达与淋巴结转移相关性结果和以往文献报道不一致，可能与本实验所选乳腺癌组织皆为乳腺浸润性导管癌有关，而以往报道包含不同组织病理类型乳腺癌，提示CD44在不同组织病理类型乳腺癌中的作用可能存在差异。本实验还发现CD44阳性组患者术后5年累积生存率低于阴性组(P=0.002)，提示CD44高表达者预后差；ER阳性组患者术后5年累积生存率高于阴性组(P=0.026)，提示ER高表达者预后较好，该结果与Lin等[12]报道一致。

本组中CD44、TRIM24均与TAGLN-2表达呈正相关，提示CD44、TRIM24可能通过激活PI3K-AKT信号通路上调TAGLN-2的表达。此外，CD44与ER表达呈负相关(r=-0.285，P=0.015)，且与PR表达呈负相关趋势(r=-0.219，P=0.062)；ER、PR表达呈正相关(r=0.598，P=0.000)，提示CD44可能通过激活PI3K-AKT信号通路下调ER、PR的表达，该结果从反面印证了Bosch等关于PI3K抑制剂促进ER表达的观点，ER、PR表达的相关性与谭敏华等[13]报道一致。

综上所述，本实验结果表明，CD44、TRIM24可能通过PI3K-AKT信号通路上调TAGLN-2的表达，且CD44可能通过PI3K-AKT信号通路下调ER、PR的表达，其具体机制值得进一步分析。在乳腺癌治疗中，可以将CD44、ER及ER作为判断乳腺浸润性导管癌患者预后的辅助因子，联合检测CD44、ER、PR对乳腺浸润性导管癌患者的预后评估及优化治疗策略具有重要的临床意义。

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ExpressionofCD44,TRIM24,TAGLN-2,ERandPRinbreastinvasiveductalcarcinomaandtheirclinicopathologicsignificance

ZHANG Qing-bo1, LU Mei-gui1, XU Bao-fu1, WANG Shuan1, ZHAO Li1, ZHOU Qiao-xia1, YAN He1, WANG Chao-qun2, HUANG Fei-jun1

(1DepartmentofForensicPathology,WestChinaSchoolofPreclinicalandForensicMedicine,SichuanUniversity,Chengdu610041,China;2DepartmentofPathology,AffiliatedHospitalofXuzhouMedicalCollege,Xuzhou221006,China)

PurposeTo study the expression of biomolecules of PI3K-AKT signaling pathway including CD44, TRIM24, TAGLN-2, ER and PR in breast invasive ductal carcinoma, and to explore their clinicopathologic significance.MethodsThe expression of CD44, TRIM24, TAGLN-2, ER and PR in 73 cases of breast invasive ductal carcinoma were detected by immunohistochemistry (IHC) technology. And the relationship between the expression of these biomarkers and the age of patients, tumor size, histological grade, lymph node metastasis was analyzed. Besides, the influence of these biomarkers on prognosis and the relationship between the expression of these biomarkers were also analyzed.ResultsThere was no significant relationship between the expression of these biomarkers and the age of patients, tumor size, histological grade, lymph node metastasis. CD44 expression was positively correlated with TAGLN-2 expression (r=0.311,P=0.007), TRIM24 expression was positively correlated with TAGLN-2 expression (r=0.421,P=0.000). CD44 expression was negatively correlated with ER expression (r=-0.285,P=0.015). ER expression was positively correlated with PR expression (r=0.598,P=0.000). The postoperative 5-year cumulative survival-rate of CD44 positive group was lower than those of CD44 negative group (P=0.002), in contrast, the postoperative 5-year survival rate of ER positive group was higher than those of ER negative group (P=0.026).ConclusionThrough PI3K-AKT signaling pathway, CD44 and TRIM24 may up- regulate TAGLN-2 expression, however, CD44 may down-regulate ER and PR expression. CD44 and ER may act an useful predictor for the prognosis of breast invasive ductal carcinoma. Combined detection of CD44, ER and PR may provide additional therapeutic information which may be useful in breast cancer treatment.

breast neoplasm; invasive ductal carcinoma； CD44； TRIM24； TAGLN-2； ER； PR； clinicopathology

时间：2017-7-18 11:51 网络出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170718.1151.004.html

1四川大学华西基础医学与法医学院法医病理教研室，成都 6100412徐州医学院附属医院病理科，徐州 221006

章青波，男，硕士研究生。E-mail： zqb335101@163.com 黄飞骏，男，硕士，教授，通讯作者。E-mail： fjhuang60123@163.com

R 737.9

:1001-7399(2017)07-0724-04

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.07.004

接受日期：2017-05-11