神经外科ICU鲍曼不动杆菌耐药基因检测分析

马英花 曹银光

神经外科ICU鲍曼不动杆菌耐药基因检测分析

马英花 曹银光

目的分析ICU中109株鲍曼不动杆菌耐药性及β-内酰胺酶基因型。方法测定109株鲍曼不动杆菌对13种抗菌药的耐药性及β-内酰胺酶耐药基因型。结果109 株鲍曼不动杆菌对13种抗菌药的敏感率均较低，除AMS、LEV和IPM，均≤36．7%，耐药较高。109株鲍不动杆菌中有11株扩增到的基因大小一致，约1 000 bp的条带，为blaOXA-23；109株鲍不动杆菌中有5株扩增出条带，其中3株为3条单一条带，分别约150 bp、300 bp和450 bp，分别是blaSHV、blaCTX-M-14和blaCTX-M-3，2株出现大小一致的双条带，均为 150 bp、300 bp，分别为blaSHV、blaCTX-M-1两种基因型。结论ICU病房常见鲍曼不动杆菌多重耐药，是否与鲍曼不动杆菌基因型有关仍需要考察。

鲍曼不动杆菌；β-内酰胺酶；基因型

鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii，Ab）具有不发酵糖类和氧化酶阴性等生理特征，是近年来医院感染中增长较快最常见的不动杆菌。该菌生存能力较强，在医院内分布广泛，且存活时间长，很容易造成院内感染，因此常从被感染患者的血、体液、脓液及呼吸道分泌物等标本中分离出，其中危重患者因抵抗力严重降低，是鲍曼不动杆菌感染的高发人群[1-2]。本研究检测了2014年3月—2016年3月收集的109株鲍曼不动杆菌标本的耐药表型及β-内酰胺酶基因类型。

1 材料与方法

1.1 研究材料

2014年3月—2016年3月从聊城市人民医院神经外科ICU住院患者送检标本中分离出鲍曼不动杆菌109株作为研究对象。标本类型包括痰液、创面分泌物、血液、导管等。

1.2 药敏试验

采用K-B法测定13种抗菌药物的敏感性。本实验采用的方法和判读标准均按照美国CLSI2014的规定进行。

1.3 AmpC粗提酶液制备与三维试验

参照文献[3]，在Eppendorf管中加入无菌蒸馏水1.5 ml，加入35℃过夜培养的菌落3个，菌液浓度调整为1×109个/ml，放入-20℃环境反复冻融6次，取出后，0℃解冻，10 000 rpm离心5 min，取上清液，即得AmpC粗提酶液。将大肠埃希菌ATCC25922稀释为0.5麦氏单位，平涂在90 mm M-H平板，平板中心贴头孢西丁纸片，距离纸片边缘5 mm，采用无菌刀片向外切1 mm×15 mm的长方条形，剔除琼脂，将30 μl AmpC粗提酶液置于长方条中，35℃培养过夜观察。

1.4 PCR法检测β-内酰胺酶基因

采用PCR法，检测β-内酰胺酶基因[4]，本研究共进行了18种β-内酰胺酶、氨基糖苷类修饰酶基因检测，引物和产物见表1。通过加热裂解法制备总DNA模板，采用PCR筛选所提取的总DNA。

2 结果

2.1 109株鲍曼不动杆菌对13种抗菌药的药敏

109株鲍曼不动杆菌对13种抗菌药的敏感率均较低，除了AMS、LEV和IPM，均≤36.7%，耐药较高。见表2。

2.2 109株鲍不动杆菌基因扩增

109株鲍不动杆菌中有11株扩增到的基因大小一致，约1 000 bp的条带，考虑其为blaOXA-23，见图1；109株鲍不动杆菌中有5株扩增出条带，其中3株为3条单一条带，分别约150 bp、300 bp和450 bp，分别是blaSHV、blaCTX-M-14和blaCTX-M-3；2株出现大小一致的双条带，均为 150 bp、300 bp，分别为blaSHV、blaCTX-M-1两种基因型，见图2。

3 讨论

鲍曼不动杆菌是医院感染重要的条件致病菌，其环境释放能力强，传播速度快，已成为呼吸道院内感染的主要致病菌，也可引发菌血症、尿道感染、继发性脑膜炎等。鲍曼不动杆菌的环境生存能力强、耐药率高，近年来已成为重要的院内感染条件致病菌，其在医院环境中广泛分布且可长期存活，易在老弱危重及免疫力低下的人群中爆发流行[5-6]。耐药率相对较低的为头孢哌酮/舒巴坦及氨苄西林/舒巴坦，与β-内酰胺酶能够被舒巴坦可抑制有关。阿米卡星单独使用疗效不佳，左旋氧氟沙星耐药率＞39%，与临床广泛使用这类抗生素有关。鲍曼不动杆菌对IPM耐药率最低（3.7%），IPM对多数β-内酰胺酶稳定。鲍曼不动杆菌已经出现广泛耐药菌株，除IPM、AMS和LEV，其余药物耐药率≥70.6%，该结果与文献报道类似[5-7]。

表1 靶基因PCR引物序列

表2 109株鲍曼不动杆菌对13种抗菌药的敏感率（S）、中介（M）和耐药率（R）（%）

图1 PCR产物的电泳结果

图2 PCR产物的电泳结果

对109株鲍曼不动杆菌基因行PCR扩增，获得以下几种基因，分别为1 000 bp的 blaOXA-23、150 bp的blaSHV、300 bp的blaCTX-M-14和450 bp的blaCTX-M-3，2株出现150 bp和300 bp双条带分别为blaSHV、blaCTX-M-1两种基因型。结合临床，鲍曼不动杆菌的上述基因可能是导致较高的耐药性的生物学基础，研究也显示鲍曼不动杆菌对IPM和MER等碳青霉烯类耐药可能与鲍曼不动杆菌的blaOXA-23基因相关[8-10]。但是，上述基因检测并不是在所有菌株中检测到，而且检测阳性率也较低，提示上述基因型在鲍曼不动杆菌少量出现，可能与耐药鲍曼不动杆菌院感流行无关。本课题组认为，虽然这些基因型在鲍曼不动杆菌中发生率虽然不高，可能与院感的传播关系不大，但质粒水平传递的可能性应引起临床医生高度重视。

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Analysis of the Detection of the Resistance Genes of Acinetobacter Baumannii at ICU, Department of Neurosurgery

MA Yinghua CAO Yin'guang Department of Neurosurgery, Liaocheng People's Hospital, Liaocheng Shandong 252000, China

ObjectiveTo analyze the resistance and β-lactamase genotype of 109 strains of Acinetobacter baumannii in ICU.MethodsThe resistance of 109 strains of Acinetobacter baumannii to 13 types of antimicrobial agents and β-lactamase resistant genotypes of Bauman were measured.Results109 strains of Acinetobacter baumannii on 13 kinds of antimicrobial susceptibility were low, except AMS, LEV and IPM, all susceptibility rate were ≤ 36.7%, resistant rate were high. 109 strains of Acinetobacter baumannii were amplified about 1 000 bp of blaOXA-23in 11 strains; 150 bp of blaSHV, 300 bp of blaCTX-M-14and 450 bp of blaCTX-M-3, respectively in 3strains, 150bp of blaSHVand 300bp of blaCTX-M-1both in 2 strains.ConclusionICU ward have common Acinetobacter baumannii multi-drug resistance, which are not defnitely connected with the genotype of Acinetobacter baumannii and need further study.

Acinetobacter baumannii; β-lactamases; genotype

R97

A

1674-9316（2017）18-0040-03

10．3969/j．issn．1674-9316．2017．18．018

聊城市人民医院神经外科，山东 聊城 252000