不同固定剂对冰冻切片免疫组化结果的影响

岳灵萍

213000常州市第四人民医院病理科

不同固定剂对冰冻切片免疫组化结果的影响

岳灵萍

213000常州市第四人民医院病理科

目的：探讨不同固定剂对冰冻切片免疫组化结果的影响。方法：选择从手术室送检的被检测抗体能表达的正常组织或肿瘤冰冻切片标本6例，分别为常见的组织或肿瘤6种，置于6种不同冰冻固定液，分别对6种固定剂制作完成的冰冻切片的免疫组化染色效果进行评价。结果：EAF固定剂与丙酮固定剂、EAF固定剂与AAF固定剂、EAF固定剂与95%酒精固定剂，以及甲醇固定剂与丙酮固定剂之间对冰冻切片免疫组化染色结果的影响，差异均具有统计学意义(P＜0.05)；EAF固定剂的冰冻切片免疫组化染色效果优于其他固定剂，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论：使用EAF固定剂进行冰冻切片制作，可获得最佳的免疫组化染色效果。

固定剂；冰冻切片；免疫组化

积极探讨不同固定剂对冰冻切片免疫组化染色结果的影响，规避不利因素，从而促使冰冻切片免疫组化染色质量的不断提升，具有重要的意义。笔者以下就对这一问题进行了研究。

资料与方法

选取从我院手术室送检的被检测抗体能表达的正常组织或肿瘤冰冻切片标本6例，6例冰冻切片标本分别是子宫内膜癌切除标本、子宫肌瘤切除标本、乳癌清扫淋巴结标本、乳腺癌切除标本、胃癌根治术下切缘标本及甲状腺肿块切除标本各1例。

研究方法：6种冰冻切片分别置于6种不同冰冻固定液，分别为95%酒精、4%甲醛、甲醇、丙酮、EAF(成分：冰醋酸5 mL+无水乙醇85 mL+浓度40%的甲醛10 mL)、AAF（成分：冰醋酸5 mL+丙酮85 mL+浓度为40%的甲醛10 mL)，固定5 min，根据组织含有的特定抗原进行相应抗体的免疫组化染色，对6种固定剂制作完成的冰冻切片的免疫组化染色效果进行评价，以此来分析6种固定剂对冰冻切片免疫组化染色效果的影响[1]。

免疫组化染色结果评价标准：按照中国病理学工作者委员会免疫组化质控中心推荐的免疫组化质控评分标准进行。考评项目有阳性信号的定位、信号的强度和分布、交叉反应，背景着色及复染。结果分4个等级，①优：免疫组化染色效果很理想，或者接近理想水平，即阳性信号很强，定位准确，分布恰当，没有交叉反应和背景着色；②良：免疫组化染色良好，但是有些背景着色；③中：免疫组化染色普遍较弱，偶见假阴性或假阳性；④差：免疫组化染色非常弱，可见假阴性或假阳性[2]。4个等级分别对应的分数为4、3、2、1[3]。

统计学方法：本试验采取统计学软件SPSS 19.0进行统计分析，其中计数资料用率(%)表示，用χ2检验；计量资料采取(±s)表示，用t检验，检验水平为α=0.05。

结 果

95%酒精、4%甲醛、甲醇等固定剂对冰冻切片免疫组化染色结果的影响，差异无统计学意义(P＞0.05)；EAF固定剂与丙酮固定剂、EAF固定剂与AAF固定剂、EAF固定剂与95%酒精固定剂，以及甲醇固定剂与丙酮固定剂之间对冰冻切片免疫组化染色结果的影响，差异均具有统计学意义(P＜0.05)；EAF固定剂的冰冻切片免疫组化染色效果优于其他固定剂，差异有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

讨 论

EAF固定剂中，无水乙醇虽然具备固定、脱水的双重作用，但脱水作用更突出，易引起组织和细胞发生皱缩；甲醛虽然具备良好的固定作用，但是存在固定速度缓慢的问题；冰醋酸具备助染，能够使组织、细胞发生轻度膨胀的作用[4]。因此，单独使用以上任何1种试剂都达不到良好的固定效果，很难获得理想的免疫组化染色效果。而将这3种试剂以合理的配比方式进行组合配制，即可获得最佳的效果，其中的冰醋酸与甲醛配合，即可解决甲醛固定速度慢的问题；而冰醋酸与无水乙醇配合，则能够解决无水乙醇对组织、细胞产生的皱缩作用[5]。因此，使用EAF固定剂进行冰冻切片制作，可获得最佳的免疫组化染色效果。

表1 不同固定剂对冰冻切片免疫组化染色结果的影响分析

[1]万鸿飞,周全,张盛忠,等.固定时间对不同组织染色的影响[J].诊断病理学杂志,2011,18(6)：476.

[2]徐云生,倪开志.6种固定液短时间固定对冰冻切片制片效果影响[J].中国实用医药,2011,6(35)：47-48.

[3]梁英杰.免疫组织化学技术制片的规范和质量控制[J].中国组织化学与细胞化学杂志,2004,13(2)：262-264.

[4]周会芹,杨江辉,余琦,等.不同组织固定液对免疫组化结果的影响[J].诊断病理学杂志,2009,16(6)：478.

[5]蔡翠珠,张红,贾晓云.胰腺冰冻切片免疫组化中组织的固定方法比较[J].中国现代医药杂志,2008,7(10)：78-79.

Effect of different fixative on immunohistochemical staining of frozen section

Yue Lingping
Department of Pathology,the Fourth People's Hospital of Changzhou City 213000

Objective：To investigate the effect of different fixative on immunohistochemical staining of frozen section.Methods：The detection of antibodies can be expressed in normal tissue or tumor frozen section specimens in 6 cases from the operation room were selected,took 6 kinds of common tissues or tumors,after frozen section,they were put in 6 different frozen liquid.The immunohistochemical staining effect of frozen sections on the preparation of six kinds of fixatives was evaluated.Results：There were significant differences in EAF fixing agent and acetone fixing agent,fixing agent EAF and AAF EAF fixing agent,fixing agent and fixing agent,and 95%alcohol of frozen section immunohistochemistry results between methanol fixed agent and acetone fixed agent(P＜0.05).EAF fixing agent in frozen section immunohistochemical staining was better than the other fixing agent,with significant difference(P＜0.05).Conclusion：The best immunohistochemical staining effect can be obtained by frozen section with EAF fixative.

Fixative;Frozen section;Immunohistochemistry

10.3969/j.issn.1007-614x.2017.22.75