HPLC测定黄褐毛忍冬中木犀草苷的含量

范红梅 刘志海 任国文 金 昭 余 兰

黔西南州食品药品检验检测中心，贵州 兴义 562400

HPLC测定黄褐毛忍冬中木犀草苷的含量

范红梅 刘志海 任国文 金 昭 余 兰

黔西南州食品药品检验检测中心，贵州 兴义 562400

目的：建立黄褐毛忍冬中木犀草苷的含量测定方法，提高药材质量标准，进一步作为该药材控制种植、加工、使用的质量依据。 方法：采用HPLC法，Agilent ZORBAX SB-Phenyl (5μm，4.6mm×250mm)色谱柱,以乙腈-0.5%冰醋酸溶液进行梯度洗脱，在波长350 μm处检测黄褐毛忍冬中木犀草苷的含量。结果：木犀草苷在4.12～50.22μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9999,n=5)；加样回收率为91.2%，RSD为0.6%。结论：该研究建立的方法简便、准确、灵敏、重复性较好，可用于黄褐毛忍冬的质量控制。

黄褐毛忍冬；高效液相色谱；木犀草苷；含量测定

黄褐毛忍冬为忍冬科忍冬属植物LonicerafulvotomentosaHsu et S.C. Cheng的干燥花蕾或带初开的花(生药学图片如图1所示)，有清热解毒、疏风散热之功效；主要分布于贵州西南部、广西西北部、云南东南部，被2015版《中国药典》收载，为药典规定的忍冬科忍冬属植物山银花的多基源植物来源之一[1]。其同时收载于贵州省地方标准，黄褐毛忍冬种质资源丰富、易于栽培，人工栽培的初步结果表明，平均单株产量为550g，单株最高产量可达5500g[2]；同时，其生长适应性强抗逆性好，保水固土作用显著，是治理喀斯特地区石漠化的优良物种，在前西南地区已大面积推广种植，黔西南州现有保存黄褐毛忍冬林分面积约17万亩，产花面积已达6万多亩[3]。黄褐毛忍冬主要含挥发油、黄酮、有机酸、三萜等化学成份[4-5]，其中木犀草苷是黄褐毛忍冬中重要的黄酮类成分，具有抗炎、抗病毒、抗氧化和抗肿瘤等多种药理作用[6-7]。本实验建立HPLC测定黄褐毛忍冬中木犀草苷含量的方法，为黄褐毛忍冬的资源开发及质量评价和控制进一步提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Waters e2695型高效液相色谱仪，Empower色谱数据工作站；日本岛津AUY220电子天平(万分子一)；岛津AUW220D电子天平(十万分子一)；电热恒温干燥箱(上海博讯实验有限公式医疗设备)，超声波清洗仪(天津上达公司)。

1.2 试药 木犀草苷(北京禾原天然产物科技有限公司，批号050236)；样品经黔西南州食品药品检验检测中心林廷龙副主任药师鉴定为黄褐毛忍冬LonicerafulvotomentosaHsu et S. C. Cheng(样品由兴仁县东湖街道办事处提供)。乙腈(色谱纯)、水(超纯水)，冰醋酸、95%乙醇、其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent ZORBAX SB-Phenyl (5μm，4.6mm×250mm)； 流动相：以乙腈为流动相A,以0. 5%冰醋酸为流动相B，按表1进行梯度洗脱，柱温：30℃; 进样量：10μL; 检测波长：350nm。见表1。

表1 流动相梯度洗脱表

2.2 对照品溶液的制备 取木犀草苷对照品10mg，精密称定，置100mL量瓶中,加70%乙醇稀释至刻度，精密量取2mL，置10mL量瓶中加70%乙醇稀释至刻度，即得。所得对照品图谱如图2所示。

2.3 供试品溶液的制备 取本品粉末2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70% 乙醇50mL，称定重量，超声处理(功率250W，频率35kHz)1h，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10mL，回收溶剂至干，残渣用 70%乙醇溶解，转移至5mL量瓶中，加70%乙醇至刻度，即得。所得供试品图谱如图3所示。2.4 线性关系的考察 分别取上述木犀草苷对照品混合溶液2、5、10、20、25μL注入液相色谱仪，按2.1项下进行色谱分析，以对照品进样量为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y),计算回归方程，为Y=19894X+1989,R=0.9999，回归方程如图4所示，结果表明：木犀草苷在4.12～50.22μg范围内线性关系良好。

2.5 精密度的考察 精密吸对照品溶液10μL，连续进样6次，按2.1项下进行色谱分析，计算RSD值为0.6%。

2.6 重复性试验 精密称取同一批黄褐毛忍冬粉末6份，按2.3操作，制备供试品溶液，按1.1项下进行色谱分析，计算其含量，结果木犀草苷含量RSD值为1.3%。

2.7 稳定性考察 取同一批黄褐毛忍冬供试品溶液，在0、2、4、8、12h,按2.1项下进行色谱分析，计算木犀草苷峰面积RSD值为0.9%。

2.8 加样回收率试验 称取已知含量的黄褐毛忍冬6份，每份约1g，加入同等量的木犀草苷对照品，按2.2供试品的制备方法制备，按2.1项下进行色谱分析，记录峰面积，计算回收率，木犀草苷平均加样回收率为91.2%。

2.9 样品含量测定 分别称取5个批次的黄褐毛忍冬粉末，按2.3项操作，平行制备供试品溶液，按2.1项方法进行分析，记录峰面积，测定药材中木犀草苷含量。结果见表2。

表2 样品含量测定

3 讨论

从实验数据可知，本研究建立的HPLC测定黄褐毛忍冬中木犀草苷的方法能在19min实现木犀草苷的完全分离，方法简单，灵敏，精确度高。通过5批黄褐毛忍冬样品的考察，木犀草苷含量在0.02%～0.03%，结果表明各批次之间无显著差异，重复性、稳定性、回收率符合分析测定的要求。

黄褐毛忍冬与其同科同属药材金银花被2015版《中国药典》分开收载，其中两药的性味归经、功能主治内容完全一致[1]。研究表明[8-9]，黄褐毛忍冬与金银花在有机酸、黄酮类、挥发油等方面存在化学成分的一致性，但在含量上存在一定差异：金银花中活性成分绿原酸含量低于黄褐毛忍冬；但金银花中木犀草苷含较高。2015版《中国药典》规定，绿原酸、木犀草苷是金银花的质量控制指标，黄褐毛忍冬与其化学成分相似、功能主治一致，金银花价格昂贵，虽黄褐毛忍冬经济效益不及金银花，但黄褐毛忍冬有利于改善贵州省黔西南州石漠化现状，在贵州省黔西南州推广种植中已发挥明显的生态及经济效益[10-12]。本实验建立了HPLC测定黄褐毛忍冬中木犀草苷的方法，该方法可作为黄褐毛忍冬的又一个质量控制指标，可为黄褐毛忍冬药材种植、加工及质量控制提供科学依据。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京：中国医药科技出版社，2015.

[2]聂莼，程若敏，陈少容，等.黄褐毛忍冬的研究进展[J].安徽农业科学，2011，39(28):17239-17240.

[3]陇光国.喀斯特山区生态建设与金银花(黄褐毛忍冬)产业发展[J].贵州农业科学，2005，33(2):103-104.

[4]茅青，贾宪生.黄褐毛忍冬化学成分的研究[J]. 药学学报, 1989(4):273-281.

[5]温建辉，倪付勇，赵袆武，等.山银花化学成分研究[J]. 中草药，2015，46(13):1883-1886.

[6]柴兴云，王林，宋越，等.山银花中黄酮类成分的研究[J].中国药科大学学报，2004，35(4):299-302.

[7]祝德秋，刘皋林.木樨草素的药理作用研究进展[J].中国药房,2010(19):1807-1810.

[8]泮玉华，詹敏.大荆山银花和山东金银花的含量比较[J].浙江中医药大学学报,2010，34(5):768-769.

[9]杨倩茹，赵媛媛，郝江波，等.金银花与山银花化学成分及其差异的研究进展[J].中国中药杂志,2016，41(7):1204-1211.

[10]颜艳.黔西南州不同立地条件下黄褐毛忍冬的生长发育与产量调查[J]. 农技服务,2014(4):8-9.

[11]薛红卫，周超凡.金银花和山银花的合理使用[J]. 中国新药杂志,2011(22):2211-2214.

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Determination of Luteoloside in theLoniceraFulvotometosaby HPLC

FAN Hongmei LIU Zhihai REN Guowen JIN Zhao YU Lan

Qianxinan Food and Drug Testing Center，Xinyi 562400，China

Objective To establish a HPLC method for the determination of Luteoloside in theLoniceraFulvotometosaand to improve its quality standard, further providing the foundation for the quality control methods of planting, processing and using. Methods The HPLC analysis was performed on an Agilent ZORBAX SB-Phenyl column (5μm, 4.6mm×250mm) with the gradient elution of acetonitrile-0.5% glacial acetic acid solution; detection wavelength was 210nm. Results Luteoloside showed a good linear relationship in 4.12～50.22μg(r=0.9999，n=5) with the recovery of standard additon of 91.2%;RSDwas 0.6%.Conclusion The method established is convenient, accurate, sensitive and reproducible, which could be used for quality control ofLoniceraFulvotometosa.

LoniceraFulvotometosaHsu et S.C.Cheng; HPLC; Luteoloside; Content Determination

范红梅(1964-)，女，汉族，本科，副主任药师，研究方向为药品检验及药品质量标准研究。E-mail:1144376264@qq.com

R284.1

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1007-8517(2017)16-0037-03

2017-07-26 编辑：程鹏飞)