多发性硬化血清麻疹、风疹和水痘-带状疱疹病毒IgG抗体水平及临床意义

王 芮， 郭亚珂， 彭 静， 邢燕蒙， 赵志慷， 黄晓曦， 刘洪波， 方树友

多发性硬化血清麻疹、风疹和水痘-带状疱疹病毒IgG抗体水平及临床意义

王 芮1， 郭亚珂2， 彭 静1， 邢燕蒙2， 赵志慷1， 黄晓曦1， 刘洪波1， 方树友1

目的 通过检测多发性硬化(Multiple sclerosis，MS)患者血清中麻疹病毒、风疹病毒和水痘-带状疱疹病毒的免疫球蛋白G(Immunoglobulin G，IgG)抗体浓度，并进行扩展残疾状态量表(Expanded disability status scale，EDSS)评分，探讨上述病毒在MS发病中的临床意义及其与临床神经功能缺失的相关性。方法 收集2013年9月-2015年2月郑州大学第一附属医院神经内科收治的50例MS患者急性期(复发期)的血清标本，其中临床孤立综合征(CIS亚组)22例，复发-缓解型MS(RRMS亚组)28例，对照组收集同一时期我院体检结果正常的37例健康志愿者的血清标本。采用双抗体夹心酶联免疫吸附方法(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)测定并比较血清中3种病毒IgG抗体的浓度，分析血清中各病毒抗体水平与EDSS评分的相关性。 结果 (1)MS病例组麻疹病毒、风疹病毒、水痘-带状疱疹病毒IgG抗体的血清浓度高于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05);(2)CIS亚组患者血清中麻疹病毒、风疹病毒、水痘-带状疱疹病毒IgG抗体水平低于RRMS亚组，EDSS评分亦低于RRMS亚组，差异均具有统计学意义(P<0.05);(3)MS病例组血清中麻疹病毒、风疹病毒、水痘-带状疱疹病毒IgG抗体与EDSS评分无相关性(P>0.05)。结论 MS患者血清中的麻疹病毒、风疹病毒和水痘-带状疱疹病毒可能不仅与MS的发病相关，而且与疾病的复发有关。

多发性硬化； 病毒IgG抗体； EDSS

多发性硬化(Multiple sclerosis，MS)是一种中枢神经系统(Central nervous system，CNS)的自身免疫性疾病，以中枢神经系统的多发炎性脱髓鞘、轴索变性和胶质瘢痕形成为主要病理学特点，可累及CNS多个部位，临床表现多变，同时可伴有周围神经损害和其他自身免疫性疾病。MS通常在20～40岁发病，全球范围内约有200～500万患者，该疾病致残率高，经济负担重[1]。MS的病因尚不明确，可能与遗传、环境、病毒感染等多种因素相关。1992年Felgenhauer等首次描述了针对麻疹病毒(M)、风疹病毒(R)和水痘-带状疱疹病毒(Z)产生的鞘内多特异性体液免疫应答，即“MRZ反应”[2]，许多研究表明MRZ反应在MS中具有较高特异性。临床孤立综合征(Clinically isolated syndrome，CIS)是MS的早期表现，复发-缓解型MS(Relapsing-remitting multiple sclerosis，RRMS)是MS最常见的类型，本研究通过检测MS患者血清中麻疹病毒、风疹病毒和水痘-带状疱疹病毒的IgG抗体浓度及其EDSS评分，分析其在MS发病中的临床意义及其与临床神经功能缺失的相关性，并探讨MRZ反应在MS早期病情评估及预测预后中的作用。

1 材料与方法

1.1 研究对象 收集2013年9月-2015年2月间在郑州大学第一附属医院神经内科住院的MS患者50例，包括临床孤立综合征(Clinically isolated syndrome，CIS)22例和复发-缓解型MS(Relapsing-remitting multiple sclerosis，RRMS)28例，其中男性19例，女性31例，年龄7～78岁，平均年龄(40.34±19.21)岁，所有入选的患者均经过郑州大学第一附属医院神经内科两名以上医师详询病史、神经系统专科检查、肌肉神经电图检查及脑脊液检查，入选的MS患者均符合2010年修订的McDonald诊断标准[3]。

正常对照组则选取同一时期在我院体检结果正常的健康志愿者37例，其中男性13例，女性24例，年龄8～83岁，平均(40.61±18.27)岁。采血前无手术史及免疫治疗史，无免疫相关疾病、感染性疾病、肿瘤疾病及心脑血管疾病等。所有入选者均被告知相关研究信息，并签署知情同意书。

1.2 研究方法

1.2.1 标本的采集及处理 正常对照组和病例组均于清晨空腹抽静脉血3 ml，置于真空采血管中(无抗凝剂)。将血液标本离心，取上层血清置于0.5 ml EP管内，-80 ℃保存。

1.2.2 ELISA法检测风疹病毒、麻疹病毒、水痘-带状疱疹病毒IgG抗体 采用ELISA法分别检测血清中人麻疹病毒、风疹病毒和水痘-带状疱疹病毒IgG抗体的水平，试验步骤严格按照ELISA试剂盒(美国R&D公司)说明书操作。

1.2.3 EDSS评分 留取血清标本的同时对病例组患者进行EDSS评分，EDSS评分是目前国际通用的MS评价系统，有助于对病情变化进行全面评估。每项功能分为5～6个等级，评分范围为0～10分，得分越高说明神经功能缺失越严重。

2 结 果

2.1 性别与年龄 病例组及对照组的性别构成和年龄的差异无统计学意义(P>0.05)(见表1)。

2.2 病例组与对照组血清中各病毒IgG抗体水平的比较 病例组血清中麻疹病毒、风疹病毒、水痘-带状疱疹病毒IgG抗体水平均明显高于对照组(P<0.05)(见表2)。

2.3 MS患者亚组间血清中各病毒IgG抗体水平和EDSS评分的比较 CIS亚组患者血清中麻疹病毒、风疹病毒、水痘-带状疱疹病毒IgG抗体水平低于RRMS亚组(P<0.05)，EDSS评分亦低于RRMS亚组(P<0.05)(见表3)。

2.4 MS患者血清各病毒IgG抗体水平与EDSS评分的相关性分析 Spearman相关性分析显示，病例组患者血清中麻疹病毒、风疹病毒、水痘-带状疱疹病毒IgG抗体水平与EDSS评分无相关性(P>0.05)(见表4)。

表1 病例组及对照组的性别及年龄比较

表2 病例组与对照组血清各病毒IgG抗体水平比较

与正常对照组比较*P均<0.05

表3 MS亚组患者血清中各病毒IgG抗体水平及EDSS评分比较

与CIS亚组比较*P均<0.05

表4 病例组血清各病毒抗体IgG抗体水平与EDSS评分相关性(r)

双变量相关性*P均>0.05

3 讨 论

MS是一种病因不明，发病机制复杂的中枢神经系统自身免疫性疾病。流行病学数据显示，MS是遗传易感个体在环境因素作用下发生的慢性自身免疫性疾病，男女比例约为1∶1.5～2.5[4]。大量证据表明遗传因素与环境因素的综合作用对于MS的发病具有重要作用[5]。1886年Pierre Marie首先提出了感染在MS发病中的作用[6]。Adams和Imagawa[7]在1962年的研究中首次发现了病毒与MS之间关系的证据。90%的MS患者脑脊液中存在不同病毒的抗体，但是MS患者的分离脑组织培养并没有发现这些病毒的存在[8]。1992年Felgenhauer等首次描述了针对麻疹病毒(M)、风疹病毒(R)和水痘-带状疱疹病毒(Z)产生的鞘内多特异性体液免疫应答，即“MRZ反应”，其在MS诊断中具有高度特异性[2]。而MRZ反应在视神经脊髓炎、周围神经病、神经莱姆病、病毒性脑炎、脊髓炎和周围神经病中少见[9]。虽然约95%的MS患者脑脊液中出现寡克隆区带(Oligoclonal bands，OCB)，但它不是MS唯一的指标，还有一部分MS患者缺乏OCB的存在[8]。2012年Brecht[10]在OCB阴性的MS患者CSF中发现麻疹病毒、风疹病毒、带状疱疹病毒抗体(MRZ反应)，或单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus，HSV)抗体，研究表明检测MRZ反应或单纯疱疹病毒抗体有助于OCB阴性患者的诊断。

这些研究表明OCB在MS中灵敏度高，但是MRZ反应相对OCB具有较高特异性。2016年Huss[11]用多重免疫分析技术(Multiplexing technique)测定97例MS患者血清和CSF中的麻疹病毒、风疹病毒、水痘-带状疱疹病毒、单纯疱疹病毒抗体，其与ELISA法的结果高度一致，再次证明了MS患者鞘内免疫活跃。

本研究显示MS患者血清中麻疹病毒、风疹病毒、水痘-带状疱疹病毒IgG抗体较对照组明显升高，提示检测MRZ反应可能与MS的发病有关，其在CIS患者血清中病毒IgG抗体升高有助于MS的早期诊断，与国内外研究结果一致。2016年Saeideh发现MS患者CSF和白细胞中水痘-带状疱疹病毒DNA复制量高仅限于MS复发的过渡阶段，在缓解期消失。RRMS患者水痘-带状疱疹病毒DNA较对照组高，表明病毒感染在MS的发病机制中具有重要作用[12]。本研究中RRMS亚组患者血清中各病毒IgG抗体水平较CIS亚组患者明显升高，且EDSS评分亦显著高于CIS亚组患者，提示MRZ反应及EDSS评分可能与疾病的发展相关，进一步提示了MRZ反应与MS的发病、CIS向RRMS转变密切相关。但是本研究中MS患者血清中麻疹病毒、风疹病毒、水痘-带状疱疹病毒IgG抗体水平与EDSS评分无相关性，表明血清中病毒IgG抗体水平的高低与神经功能的缺失程度不相关，可能由于MS患者神经功能的障碍不仅仅受单一因素的影响，与病程、抑郁焦虑状态、复发次数、首次发病年龄等多种因素有关。近年研究显示MS患者CSF中组胺水平与神经功能缺失程度呈正相关[13]。

麻疹病毒、风疹病毒和水痘带状疱疹病毒均为噬神经病毒。人群中感染较为普遍，大多数人群在早期至少感染过其中一种病毒。病毒导致MS的具体机制尚不清楚，可能是潜伏在外周系统中噬神经病毒的病毒蛋白与人体自身蛋白具有相似的氨基酸序列，针对病毒产生的免疫应答，导致人体产生自身免疫[14]，即分子模拟。Zhao等[15]的研究证实通过分子模拟，病毒感染能引起自身免疫的产生。也可能是一些病毒的急性感染如EB病毒引起了存在于系统中的成分(如细胞产生的麻疹病毒、风疹病毒或水痘-带状疱疹病毒抗体)侵入中枢神经系统，因此发展为MS[16]。也可能是病毒的隐蔽表位在机体初始的免疫应答中未被清除，而在后续的应答过程中，被抗原提呈细胞(Antigen presenting cells，APC)提呈给机体自身反应性淋巴细胞克隆，从而诱发自身免疫性疾病。随着疾病的进展，免疫系统不断扩大所识别的自身抗原表位的范围，使更多自身抗原遭受免疫攻击，导致疾病迁延不愈并不断加重。在MS发病过程中，包括B细胞和T细胞的免疫反应，可首先针对急性或者慢性病毒感染，而后通过分子模拟、旁路活化及表位扩增攻击自身组织[6]，从而引发CNS的自身免疫反应，导致脱髓鞘的产生。其他可能的机制包括超抗原活化，αB-晶状体蛋白的表达增加，或自身反应性B淋巴细胞的感染[17]。综上，考虑到MS病变的病理异质性，可能导致MS患者发病机制的不同。且在某一特定地区，MRZ反应的阳性率与病毒的自然感染率、疫苗接种率有关。

本研究通过ELISA方法测定了MS患者与健康对照组血清中麻疹病毒、风疹病毒和水痘带状疱疹病毒IgG抗体的浓度并对MS患者进行EDSS评分，结果显示MS组各病毒IgG抗体水平均高于健康对照组， RRMS亚组患者血清中病毒IgG抗体水平及EDSS评分均高于CIS亚组，与国内外学者的研究结果一致。之前的研究多检测CSF中MRZ反应，本研究发现MS患者血清中麻疹病毒、风疹病毒、水痘-带状疱疹病毒IgG抗体(MRZ反应)也较对照组升高，且可能与疾病的转归相关，这将更有利于患者的随访及病情的监测。MS是一种复杂的疾病，单一的生物学标志物水平可能只能反映其疾病过程的某一方面，因此，需结合病史、体征及影像学检查结果综合考虑，才能确立MS诊断以及评估预后等。

检测患者血清中麻疹病毒、风疹病毒、水痘-带状疱疹病毒IgG抗体水平，可以辅助MS的诊断以及判断疾病转归。本研究首次证明MS患者在疾病初期和复发期，外周系统中存在针对这3种病毒的免疫反应，即MRZ反应。未来研究病毒诱导的MS动物模型，高度敏感的病原体检测方法以及有效的抗病毒药物的临床试验，将能更好的探究病毒与MS的关系。

[1]Ernstsson O,Gyllensten H,Alexanderson K,et al.Cost of illness of multiple sclerosis-A systematic review[J].PLoS One,2016,11(7):1-25.

[2]Felgenhauer K,Reiber H.The diagnostic signifcance of antibody specifcity indices in multiple sclerosis and herpes virus induced diseases of the nervous system[J].Clin Investig,1992,70:28-37.

[3]Polman CH,Reingold SC,Banwell B,et al.Diagnostic criteria for multiple sclerosis:2010 revisions to the McDonald criteria[J].Ann Neurol,2011,69(2):292-302.

[4]Ascherio A,Munger KL.Epidemiology of multiple sclerosis:from risk factors to prevention-An update[J].Semin Neurol,2016,36(2):103-114.

[5]Frohman EM,Racke MK,Raine CS.Multiple sclerosis-the plaque and its pathogenesis[J].N Engl J Med,2006,354(9):942-955.

[6]Kakalacheva K,Munz C,Lunemann JD.Viral triggers of multiple sclerosis[J].Biochim Biophys Acta,2011,1812(2):132-140.

[7]John M,David T.Measles antibodies in multiple sclerosis[J].P Soc Exp Biol Med,1962,111:562-566.

[8]Godec MS,Asher DM,Murray RS,et al.Absence of measles,mumps and rubella viral genome sequences from MS brain tissue by polymerase chain reaction[J].Ann Neurol,1992,32:401-404.

[9]Jarius S,Eichhorn P,Jacobi C,et al.The intrathecal,polyspecific antiviral immune response:Specific for MS or a general marker of CNS autoimmunity[J].J Neurol Sci,2009,280(1-2):98-100.

[10] Brecht I,Weissbrich B,Braun J,et al.Intrathecal,polyspecific antiviral immune response in oligoclonal band negative multiple sclerosis[J].PLoS One,2012,7(7):e40431.

[11] Huss A,Weishaupt A.Validation of a multiplexing technique to determine the intrathecal,polyspecific antiviral immune response in multiple sclerosis[J].Expert Rev Mol Diagn,2016,16(12):1353-1356.

[12]Najafi S,Ghane M,Yousefzadeh-Chabok S,et al.The high prevalence of the varicella zoster virus in patients with relapsing-remitting multiple sclerosis:A case-control study in the north of Iran[J].Jundishapur J Microbiol,2016,9(3):e34158.

[13]耿 嘉，朱晓斐，马 舒，等.多发性硬化患者脑脊液组胺水平与EDSS评分的相关性分析[J].疑难病杂志，2016,5:441-444.

[14]Fujinami RS,Oldstone MB.Amino acid homology between the encephalitogenic site of myelin basic protein and virus:mechanism for autoimmunity[J].Science,1985,230:1043-1045.

[15] Zhao ZS,Granucci F,Yeh L,et al.Molecular mimicry by herpes simplex virus-type 1:autoimmune disease after viral infection[J].Science,1998,279(5355):1344-1347.

[16] Otto C,Hofmann J,Ruprecht K.Antibody producing B lineage cells invade the central nervous system predominantly at the time of and triggered by acute Epstein-Barr virus infection:A hypothesis on the origin of intrathecal immunoglobulin synthesis in multiple sclerosis[J].Med Hypotheses,2016,91:109-113.

[17] Ascherio A,Munger KL.Environmental risk factors for multiple sclerosis.Part I:the role of infection[J].Ann Neurol,2007,61(4):288-299.

The clinical significance of serum IgG antibodies against measles,rubella and varicella zoster virus of multiple sclerosis

WANG Rui,GUO Yake,PENG Jing,et al.

(Department of Neurology，the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University，Zhengzhou 450052，China)

Objective To investigate the role of measles virus,rubella virus and varicella zoster virus in the pathogenesis of Multiple Sclerosis and its correlation with clinical neurological dysfunction.Methods From September 2013 to February 2015,50 MS patients who were admitted to Department of Neurology,Zhengzhou University First Affiliated Hospital,were enrolled as observation group,including clinically isolated syndrome (CIS) subgroup of patients (22 cases) and relapsing-remitting multiple sclerosis (RRMS) of 28 patients.37 healthy volunteers were enrolled as the healthy control group during the same period in our clinic examination.Using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to detect the level of three kinds of virus IgG antibodies in serum.We compared the results and analyzed the correlation between serum antibody level and expanded disability status scale (EDSS) score.Results (1)The measles virus,rubella virus,varicella zoster virus IgG antibody level in MS cases was statistically higher than the control group(P<0.05).(2)The measles virus,rubella virus,varicella zoster virus IgG antibody level in CIS subgroup patients was statistically lower than the RRMS subgroup (P<0.05),EDSS score was statistically lower than that of RRMS subgroup(P<0.05).(3)There was no correlation between IgG antibody of measles virus,rubella virus,varicella zoster virus in MS patients serum and EDSS score (P>0.05).Conclusions Measles virus,rubella virus and varicella zoster virus may be associated not noly with the pathogenesis of MS,but also the development of the disease.

Multiple Sclerosis; Virus IgG antibody; EDSS

2017-04-13；

2017-05-30

河南省科技厅普通攻关资助项目(No.142102310057)

(1.郑州大学第一附属医院神经内科，河南 郑州 450052： 2.郑州市中心医院神经内科，河南 郑州 450052)

刘洪波，E-mail:liuhongbo6279@126.com

1003-2754(2017)08-0707-04

R744.5+1

A