不同煎煮方法及时间对炮附子配伍大黄治疗阳虚型便秘的效果及对心脏的影响

张晓芳，刘慧娜

郑州市骨科医院，郑州 450052

附子是毛茛科植物乌头Aconitum carmichaeliiDebx.的子根的加工品，味辛、甘，性大热，归心、肾、脾经，有毒，其功效主要为回阳救逆、补火助阳、散寒止痛，常用于亡阳虚脱、心腹冷痛、寒湿痹痛等[1]。大黄为蓼科掌叶大黄Rheum palmatumL.、唐古特大黄Rheum tanguticumMaxim. ex Bal£.或药用大黄Rheum officinaleBail1.的干燥根或根茎，味苦，性寒，归胃、大肠、肝、脾、心包经，具有泻下攻积、清热泻火、凉血解毒、逐瘀通经、利湿退黄的功效，主治实热便秘、湿热泻痢、黄疸等[2]。附子与大黄配伍用药首见于《金匮要略》记载的大黄附子汤，附子辛热散寒、大黄苦寒攻下，寒热并用，主要用于治疗寒积便秘[3]。在现代临床研究中，大黄附子汤加减方已在老年脾气虚弱型便秘患者的治疗中取得一定成效[4]。附子的主要活性成份乌头类生物碱具有毒性，虽经过炮制后可减缓毒性，但仍有可能引发机体中毒，造成心律失常等[5]，因此，应严格把控附子的用药剂量、煎煮方法、煎煮时间及配伍等。煎煮方法及时间可直接影响药物活性成份的溶出，与临床疗效和毒性密切相关。基于此，本研究探讨不同煎煮方法及时间对炮附子配伍大黄治疗阳虚型便秘的效果及对心脏的影响，以期为临床应用提供参考，详情如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物

无特定病原体健康成年SD大鼠共210只，体重220～240g，购于河南省实验动物中心，许可证号：SYXK（豫）2020-0002，由本院实验动物房饲养。大鼠自由饮食饮水，环境条件：温度为22～25℃，湿度45%～70%，光照黑暗交替。实验经本院伦理委员会批准（伦理批号：202011-006）。

1.2 仪器

BL-420E生物信号采集系统（成都泰盟科技有限公司）；ADVIA2400西门子全自动生化分析仪（德国拜尔公司）；RE-20L旋转蒸发仪（常州亚旺仪器有限公司）；1ml注射器（山东朱氏药业）。

1.3 药品与试剂

炮附子（产地四川江油，批号：20200708）、大黄（产地青海，批号：20200912）均购于宁波药材股份有限公司，且经本院中药师鉴定；胃泌素（gastrin，GAS）、胃动素（motilin，MTL）、血管活性肠肽（vasoactine intrestinal peptide，VIP）、内皮素（endothelin，ET）试剂盒均购自上海晶抗生物工程有限公司，型号分别为BIO-JK60577、BIO-JK60429、BIO-JK60431、BIO-JK60235；白醋（山西老陈醋厂，总酸度>4.5g/100ml，批号：20200617）；活性炭（重庆东试化工有限公司，批号：20201152）；0.9%氯化钠溶液（浙江吉诺生物医药技术有限公司，批号：2020-1064）；阿霉素（成都百裕制药股份有限公司，批号：2020-0384）；乌拉坦（山东齐鲁兴华制药有限公司，批号：2020-2564）。

1.4 药液制备

1.4.1 炮附子、大黄单煎液

平行称取炮附子10g，共5份，均加8倍量水浸泡30min，然后分别煎煮60、90、120、150、180min，纱布过滤出药液后，再加入6倍量水并煎煮30min，纱布过滤。合并两次药液，采用旋转蒸发仪将药液减压浓缩成2g/ml的炮附子水煎液；平行称取大黄10g，共5份，煎煮方法同炮附子，得到浓度为2g/ml的大黄水煎液。按照煎煮时间的不同，分别合并炮附子和大黄的水煎液。

1.4.2 炮附子、大黄合煎液

平行称取5份样品，每份炮附子、大黄各10g，一起煎煮，均加8倍量水浸泡30min，其余同“1.4.1”项下方法，并将药液减压浓缩至2g/ml即得。

1.5 大鼠分组方法及阳虚型便秘大鼠模型建立

采用随机数字表法将大鼠分为单煎组、合煎组与空白对照组，并进一步按照煎煮时间分为60、90、120、150、180min共5个亚组，每个亚组7只。

采用白醋、0℃活性炭冰水建立阳虚便秘模型[6]（白醋首剂量5ml/只，从第2天开始3ml/200g，连续9天；从第7天开始给予0℃活性炭冰水，5ml/200g，连续3天）。

1.6 不同煎煮方法及时间对炮附子配伍大黄对阳虚型便秘大鼠的干预

除空白对照组各亚组外，单煎组、合煎组各亚组均在造模（阳虚型便秘模型）的同时给予相应药物灌胃（3g/kg），单煎组各亚组分别给予煎煮时间为60、90、120、150、180min的炮附子、大黄单煎合并水煎液；合煎组各亚组分别给予煎煮时间为60、90、120、150、180min炮附子、大黄合煎水煎液；空白对照组给予等体积0.9%氯化钠溶液灌胃。

1.7 大鼠排便情况及血清GAS、血浆MTL、VIP、ET水平检测

于第9天末次给药后，禁食24h，观察各亚组大鼠首粒排便时间及24h内排便颗粒数。采集大鼠眼眶静脉丛血，采用全自动生化分析仪检测血清GAS及血浆MTL、VIP、ET水平。

1.8 心功能检查及心律失常发生情况

对所有亚组大鼠均一次性腹腔注射阿霉素（10mg/kg）建造急性心衰模型，按“1.6”项下方法给药。给药2h后，各亚组大鼠腹腔注射20%乌拉坦溶液，待大鼠麻醉后，经右颈总动脉插管入左室腔，采用BL-420E生物信号采集系统对大鼠左室收缩压（left ventricular systolic pressure，LVSP）、左室舒张末期压（left ventricular end diastolic pressure，LVEDP）及左室内最大下降速率（rate of pressure decline during myocardial relaxation，-dp/dtmax）、左室内最大上升速率（rate of pressure development during myocardial contraction，+dp/dtmax）进行测定，并检测10min大鼠心电图。心电图显示正常后，打开腹腔，暴露胃、十二指肠，分别将药物（单煎组各亚组分别给予煎煮时间为60、90、120、150、180min的炮附子、大黄单煎合并水煎液，合煎组各亚组分别给予煎煮时间为60、90、120、150、180min的炮附子、大黄合煎水煎液）或0.9%氯化钠溶液注入十二指肠（16g/kg）。给药5min后，采用BL-420E生物信号采集系统监测心电图变化情况，持续60min，统计心律失常发生情况。

1.9 统计学方法

采用SPSS 21.0软件对数据进行统计学分析。计量资料用±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用SNK-q检验；重复测量计量资料采用重复测量方差分析，两两比较采用LSD-t检验，组内比较采用配对t检验。计数资料用n（%）表示，行χ2检验。P<0.05为有统计学差异。

2 结果

2.1 各亚组排便情况比较

单煎组、合煎组各亚组的首粒排便时间均短于空白对照组（P<0.05）；24h内排便颗粒数均大于空白对照组（P<0.05）。合煎组各亚组的首粒排便时间均短于单煎组（P<0.05），24h内排便颗粒数均大于单煎组（P<0.05）。单煎组及合煎组组内煎煮120min亚组的首粒排便时间均短于同组内煎煮

60min亚组、90min亚组（P<0.05），24h内排便颗粒数均大于同组内煎煮60min亚组、90min亚组（P<0.05）。单煎组及合煎组组内煎煮120min亚组的首粒排便时间均稍短于同组内煎煮150min亚组、180min亚组，24h内排便颗粒数均稍大于同组内煎煮150min亚组、180min亚组，但比较均无统计学差异（P>0.05）。单煎组及合煎组组内煎煮150min亚组的首粒排便时间、24h内排便颗粒数与同组内煎煮180min亚组比较差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

表1 排便情况比较 n=7，±s

表1 排便情况比较 n=7，±s

a：与同组60min亚组比较，P<0.05；b：与同组90min亚组比较，P<0.05；c：与单煎组同时间亚组比较，P<0.05；d：与合煎组同时间亚组比较，P<0.05。下同

组别 煎煮时间（min） 首粒排便时间（min） 24h内排便颗粒数（粒）单煎组 60 57.94±10.21 14.01±2.33 90 59.13±10.38 15.47±2.41 120 44.07±8.46ab 21.94±4.05ab 150 49.14±8.69 17.26±3.27 180 53.28±9.52 17.03±3.16合煎组 60 46.24±7.83c 20.75±3.81c 90 48.03±8.24c 19.41±3.43c 120 35.76±5.22abc 27.42±5.06abc 150 40.08±5.14c 23.88±4.46c 180 40.15±6.35c 23.58±4.39c空白对照组 60 105.62±13.48cd 5.62±1.03cd 90 108.94±14.21cd 5.94±1.15cd 120 110.32±13.67cd 5.28±0.94cd 150 104.21±12.09cd 5.46±1.12cd 180 107.58±12.54cd 5.79±1.24cd

2.2 血清GAS及血浆MTL、VIP、ET水平比较

单煎组、合煎组各亚组的GAS、MTL、VIP、ET水平均高于空白对照组（P<0.05）；合煎组各亚组均高于单煎组（P<0.05）。单煎组及合煎组组内煎煮120min亚组的GAS、MTL、VIP、ET均高于同组内煎煮60min亚组、90min亚组（P<0.05）。单煎组及合煎组组内煎煮120min亚组的GAS、MTL、VIP、ET水平均稍高于同组内煎煮150min亚组、180min亚组，但比较均无统计学差异（P>0.05）。单煎组及合煎组组内煎煮150min亚组的GAS、MTL、VIP、ET水平与同组内煎煮180min亚组比较差异无统计学意义（P>0.05）。见表2。

表2 血清GAS及血浆MTL、VIP、ET水平比较 n=7，±s，pg/ml

表2 血清GAS及血浆MTL、VIP、ET水平比较 n=7，±s，pg/ml

组别 煎煮时间（min） GAS MTL VIP ET单煎组 60 62.35±10.06 123.45±13.68 63.94±10.78 141.94±13.57 90 63.94±10.17 124.97±12.81 65.01±10.62 143.06±13.19 120 76.78±11.31ab 140.85±13.16ab 78.29±11.38ab 159.26±14.03ab 150 72.18±11.25 136.94±13.07 74.05±11.27 155.14±14.17 180 70.23±10.49 134.62±12.53 70.56±10.43 151.78±14.23合煎组 60 74.61±10.24c 139.81±13.52c 76.31±10.23c 158.24±13.85c 90 76.12±10.59c 140.98±13.67c 77.94±10.51c 159.61±13.76c 120 89.98±11.29abc 157.82±14.23abc 91.92±11.49abc 176.63±14.09abc 150 86.19±11.53c 154.27±15.03c 87.74±11.36c 172.19±14.01c 180 83.26±11.41c 151.28±14.26c 83.21±10.92c 170.28±13.89c空白对照组 60 46.94±8.35cd 96.09±11.28cd 45.18±7.23cd 116.52±13.28cd 90 45.08±8.19cd 99.45±12.17cd 46.79±8.15cd 112.48±12.94cd 120 50.31±9.57cd 106.73±12.34cd 50.68±9.34cd 125.36±14.16cd 150 48.93±9.36cd 103.48±11.96cd 49.17±9.26cd 121.89±13.54cd 180 47.65±9.21cd 100.88±12.09cd 48.02±8.97cd 118.67±14.03cd

2.3 心功能指标水平比较

单煎组及合煎组各亚组的LVSP、+dp/dtmax均高于空白对照组（P<0.05），且合煎组各亚组均高于单煎组（P<0.05）；单煎组及合煎组各亚组的-dp/dtmax、LVEDP均低于空白对照组（P<0.05），且合煎组均低于单煎组（P<0.05）。单煎组及合煎组组内煎煮120min亚组的LVSP、+dp/dtmax均大于同组内煎煮60min亚组、90min亚组（P<0.05），且-dp/dtmax、LVEDP均低于同组内煎煮60min亚组、90min亚组（P<0.05）。单煎组及合煎组组内煎煮120min亚组的LVSP、+dp/dtmax水平均稍高于同组内煎煮150min亚组、180min亚组，-dp/dtmax、LVEDP水平均稍低于同组内煎煮150min亚组、180min亚组，但比较均无统计学差异（P>0.05）。单煎组及合煎组组内煎煮150min亚组的LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax、LVEDP与同组内煎煮180min比较均无统计学差异（P>0.05）。见表3。

表3 心功能变化情况比较 n=7，±s

表3 心功能变化情况比较 n=7，±s

+dp/dtmax（mmHg/s）组别 煎煮时间（min）LVSP（mmHg）LVEDP（mmHg）-dp/dtmax（mmHg/s）单煎组 60 165.97±13.58 10.46±2.01 7125.33±371.43 11665.38±827.63 90 167.01±12.76 10.15±2.03 7034.79±352.68 11984.29±831.04 120 181.85±12.43ab 7.96±1.37ab 6603.17±350.74ab 12976.35±826.17ab 150 177.01±11.49 8.39±1.44 6835.71±356.41 12405.83±840.29 180 174.95±12.36 8.94±1.52 6927.38±363.76 12063.75±816.53合煎组 60 180.95±11.46c 8.31±1.46c 6695.43±355.09c 12654.36±851.39c 90 182.03±12.07c 8.06±1.15c 6574.28±346.37c 12968.73±820.13c 120 197.76±13.45abc 6.38±1.19abc 6123.49±356.84abc 13967.84±835.21abc 150 192.85±12.78c 6.73±1.25c 6359.74±365.29c 13401.22±843.17c 180 189.64±11.39c 7.11±1.36c 6495.72±361.88c 13085.29±838.05c空白对照组 60 141.38±11.29cd 13.47±2.85cd 7768.94±375.83cd 9785.42±759.43cd 90 143.97±11.46cd 14.83±2.71cd 7965.42±361.28cd 10361.46±853.94cd 120 150.72±12.15cd 15.98±3.01cd 7841.56±384.27cd 9895.27±764.23cd 150 145.83±11.67cd 16.72±3.06cd 7623.91±368.23cd 10654.32±866.74cd 180 148.49±11.72cd 15.39±2.94cd 7903.79±382.03cd 9953.84±794.81cd

2.4 心律失常发生情况

空白对照组未出现心律失常；单煎组煎煮60min亚组、90min亚组、120min亚组分别有3只（42.86%）、2只（28.57%）、1只（14.29%）大鼠出现心律失常；合煎组煎煮60min亚组有1只（14.29%）出现心律失常。合煎组各亚组的心律失常发生率与空白对照组、单煎组比较均无统计学差异（P>0.05）。

3 讨论

附子为回阳救逆第一要药，是临床治疗心悸、胸痹等病证的常用药物之一[7]。大黄可用于治疗慢性心力衰竭患者的便秘等病证[8]。附子与大黄配伍可增强肠运动、改善心功能等，临床上常用二者治疗老年人便秘、危重脓毒症等[9-10]。有研究表明，在西医常规治疗基础上联合大黄附子汤可提高慢性肺心病并发心力衰竭患者的左室射血分数，降低脑钠肽水平[11]；大黄附子细辛汤治疗阳虚型便秘患者可取得较好的临床疗效[12]。但因炮附子具有一定的毒性，相关研究[13]指出附子可显著降低心力衰竭模型大鼠心肌组织心肌肌钙蛋白T含量，亦可升高正常大鼠心肌组织心肌肌钙蛋白T含量。故临床应用时不仅要保证药物发挥最大药效，且需保证用药安全性。正确把控药方的煎煮方法及时间可起到促进肠运动、改善心功能等作用，本研究针对不同煎煮方法及时间对炮附子配伍大黄的增效减毒作用进行了探讨。

本研究结果显示，单煎组及合煎组各亚组首粒排便时间、24h内排便颗粒数及GAS、MTL、VIP、ET、LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax、LVEDP水平均优于空白对照组，表明炮附子配伍大黄应用时，不论是分开煎煮还是合并煎煮，均可缓解阳虚型便秘大鼠排便困难情况，改善大鼠胃肠功能、心功能。本研究结果还发现，合煎组各亚组首粒排便时间、24h内排便颗粒数及GAS、MTL、VIP、ET、LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax、LVEDP水平均优于单煎组各亚组，表明在相同煎煮时间里，炮附子与大黄合煎的方法在缓解阳虚型便秘大鼠排便困难情况、改善胃肠运动及改善心肌收缩力、舒张功能方面的疗效强于炮附子、大黄单煎后合并的方案。此外，本研究结果发现，单煎组及合煎组组内煎煮120min亚组的首粒排便时间、24h内排便颗粒数及GAS、MTL、VIP、ET、LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax、LVEDP水平均优于同组内煎煮60min亚组、90min亚组，另虽然与同组内煎煮150min亚组、180min亚组相比并未显示出统计学差异，但各指标亦有所升高或降低，该结果提示炮附子与大黄配伍应用时，不论是分开煎煮还是合并煎煮，煎煮120min即可有较佳的疗效。本研究亦显示，合煎组各亚组心律失常发生率与单煎组各亚组、空白对照组比较无统计学差异。根据上述研究结果，在炮附子与大黄配伍应用时，建议合并煎煮120min。

乌头类酯性生物碱是附子的主要毒性成份，可分为单酯与双酯，其中以双酯性生物碱（乌头碱、新乌头碱等）毒性最强。有研究表明，附子配伍大黄的水煎液中，单酯性生物碱及双酯性生物碱含量明显降低，提示二者配伍具有较好的减毒作用[14]。另有研究表明，在一定加水、加热条件下，双酯性生物碱可水解成相应的单酯性生物碱。但单酯性生物碱同时还是附子的有效成份，煎煮时间过长可导致其水解过度而影响药效[15]。

综上所述，炮附子配伍大黄对阳虚型便秘大鼠有确切的治疗效果，可能与促进胃肠功能改善有关，且大黄与附子配伍具有一定的减毒作用，可保护心脏，二者合并煎煮120min时可有较佳疗效。