小鼠酚红排泌实验影响因素的考察

赵思俊，曲 萍，李 洋，张 蕻

（1.山西省食品药品检验所，山西太原030001； 2.山西大学中医药现代研究中心，山西太原030006）

小鼠酚红排泌实验影响因素的考察

赵思俊1，2，曲 萍1，李 洋1，张 蕻1

（1.山西省食品药品检验所，山西太原030001； 2.山西大学中医药现代研究中心，山西太原030006）

目的：对小鼠酚红排泌实验的主要影响因素进行考察，提高小鼠酚红排泌实验的规范性。方法：通过对动物的品系、体质量、实验前禁食与否、处死时间、酚红浓度等可能影响酚红排泌实验的因素逐一进行考察。结果：动物的品系、体质量、处死时间对该实验有影响，实验前禁食与否、酚红浓度对该实验无影响。结论：通过控制实验影响因素能完善小鼠酚红排泌实验方法。

酚红；排泌；模型小鼠

酚红排泌是实验药理学中祛痰的经典实验之一，该方法被广泛应用于新药筛选和药效学评价，但是，目前的文献报道中该实验方法并不统一［1-4］，影响实验结果，给研究人员带来极大的困惑和浪费。为规范和增加该实验的重现性，提高成功率，我们针对该实验的影响因素逐一进行了考察，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 SPF级小鼠，雌雄各半，体质量18~22 g，中国人民解放军军事医学科学院实验研究中心提供，合格证号：SCXK-（军）2012-0004。实验期间室温22℃~25℃，相对湿度40%~60%，12 h/12 h交替照明，自由摄食饮水。

1.1.2 试剂与仪器 苯酚红，天津市光复精细化工研究所，批号20140530；其他试剂均为分析纯，由国药集团化学试剂有限公司提供。Multiskan Go全波长酶标仪（Thermo Fisher）。

1.2 实验方法

取昆明种健康小鼠，每组10只，雌雄各半。实验前禁食不禁水12 h，于最后一次给药后30 min腹腔注射1%酚红生理盐水50 mL/kg。注射酚红1 h后，处死动物，剪开颈前皮肤，剥离气管周围组织，剪下甲状软骨下缘至气管分叉处的一段气管，放入盛有2 mL生理盐水与5%碳酸氢钠溶液0.1 mL中，旋涡振荡1 min，波长546 nm处测吸光度值［5-7］。

1.2.1 动物品系对实验结果的影响 取KM、ICR、NIH种小鼠各10只，其余按上法操作。

1.2.2 动物体质量对实验结果的影响 取初始体质量15~18 g，18~22 g，23~30 g，30~35 g小鼠各10只，其余按上法操作。

1.2.3 酚红浓度对实验结果的影响 取小鼠40只，随机分成4组，腹腔注射不同浓度的酚红溶液，①0.5%、100 mL/kg；②1%、50 mL/kg；③2.5%、20 mL/kg，其余按上法操作。

1.2.4 禁食与否对实验结果的影响 取小鼠20只，随机分成2组，一组实验前禁食，另一组不禁食，其余按上法操作。

1.2.5 处死时间对实验结果的影响 取小鼠20只，随机分成2组，一组处死时间为30 min，另一组处死时间为1 h，其余按上法操作。

1.3 统计学分析

采用SPSS 17.0软件进行分析，数据以吸光度值的均数±标准差（±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，两组之间比较采用独立样本t检验，P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 动物品系对实验结果的影响

结果见表1。

表1 不同品系小鼠对实验结果的影响 （±s）

表1 不同品系小鼠对实验结果的影响 （±s）

品系 n KM 10 ICR 10 NIH 10 OD值 F P 0.112 3±0.035 1 8.262 ＜0.001 0.054 8±0.040 2 0.112 9±0.034 5

结果如表1所示，ICR种小鼠与KM种小鼠、NIH种小鼠OD值比较差异具有统计学意义（P< 0.01），其OD值偏小，表明动物品系对实验结果有影响，由于KM小鼠被广泛应用于药理毒理评价，较易获得且价格便宜，故建议进行该实验可优先选用KM小鼠。

2.2 动物体质量对实验结果的影响

除了18~22 g与23~30 g两组以外，其他任何2组比较差异均有统计学意义（P<0.05），表明动物体质量对实验结果有明显影响。考虑到中药药理实验中给药时间较长，动物体质量偏大，影响小鼠对酚红排泌的敏感性，建议选用初始体质量为18~22 g小鼠。结果见表2。

表2 不同体质量小鼠对实验结果的影响 （±s）

表2 不同体质量小鼠对实验结果的影响 （±s）

体重（g） n 15~18 10 18~22 10 23~30 10 0.270 5±0.023 9 0.266 4±0.024 1 30~35 10 OD值 F P 0.132 3±0.050 6 12.364 ＜0.001 0.204 1±0.034 5

2.3 酚红浓度对实验结果的影响结果见表3。

表3 不同酚红浓度对实验结果的影响 （±s）

表3 不同酚红浓度对实验结果的影响 （±s）

浓度（%）0.5 1.0 2.5 n 体积（mL/kg）10 100 10 50 10 20 OD值 F P 0.227 3±0.073 8 1.903＞0.05 0.174 4±0.070 6 0.244 3±0.102 6

结果如表3所示，在预实验过程中还考察了5 %酚红溶液，其容易分层，溶解不彻底，注射难度较大，故未进行该浓度的实验。虽然0.5%、1.0%、2.5%的酚红对该实验结果无影响，但是，考虑到注射体积的可操作性，建议选用1.0%的酚红溶液，50 mL/kg。

2.4 禁食与否对实验结果的影响

结果见表4。

表4 禁食与否对实验结果的影响 （±s）

表4 禁食与否对实验结果的影响 （±s）

禁食情况 n禁食 10未禁食 10 OD值 t P 0.114 7+0.041 2 1.922 ＞0.05 0.079 2+0.038 8

结果如表4所示，实验前小鼠禁食与未禁食比较差异无统计学意义，但禁食状态下的吸光度值较未禁食状态下测定更准确，同时为了避免食物对酚红排泌量造成影响，导致实验测定结果不准确，故建议选用禁食状态。

2.5 处死时间对实验结果的影响

结果见表5。

表5 不同处死时间的影响 （±s）

表5 不同处死时间的影响 （±s）

处死时间 n 30 min 10 1 h 10 OD值 t P 0.107 9±0.072 1 -3.525 ＜0.05 0.276 8±0.070 9

结果如表5所示，处死时间为1 h测定的吸光度值更符合紫外-可见分光光度计的数据要求，标准差较小，而处死时间为30 min测定的数据偏小，同时考虑到解剖操作时间的合理性，建议选择处死时间为1 h。

3 讨论

利用酚红作为祛痰效果指示剂，在祛痰药的影响下，随着支气管分泌液的增加，由呼吸道黏膜排出的酚红越多，表现为支气管灌洗液中酚红浓度越高［7］。由于本实验主要是考察各影响因素，故采用吸光度值代替酚红排出量给予报道，由于两者统计结果一致，并不影响实验的结论。

本文对动物的品系、体质量、实验前禁食与否、处死时间、酚红浓度等可能影响酚红排泌实验的因素逐一进行了考察，实验结果显示：实验前禁食与否、酚红浓度对该实验无影响；动物的品系、体质量、处死时间对该实验有影响。

根据考察的影响因素，得到该实验的最优方法：实验前各组小鼠禁食不禁水12 h，于末次给药后30 min腹腔注射1.0%酚红生理盐水50 mL/kg。注射酚红1 h后，处死动物，剪开颈前皮肤，剥离气管周围组织，剪下甲状软骨下缘至气管分叉处的一段气管，放入盛有2 mL生理盐水、5%碳酸氢钠溶液0.1 mL中，旋涡振荡1 min，随即用酶标仪在波长546 nm处测吸光度值。

［1］朱智强，牛勃，谢秋，等.地龙祛痰制剂的止咳祛痰抗炎作用研究［J］.时珍国医国药，2014，25（10）：2 379-2 381.

［2］杨鸿，孔冬冬.金黄止咳颗粒的止咳化痰抗炎作用实验研究［J］.中国药物警戒，2014，11（6）：325-330.

［3］邓恢进，李霞，张金美，等.苦橘咳喘合剂的止咳化痰作用与急性毒性［J］.医药导报，2015，34（5）：603-605.

［4］陈常莲，吴香杰，布和巴特尔，等.蒙药材悬钩子木不同溶剂提取物的镇咳祛痰作用比较研究［J］.中国民族医药杂志，2014，6（6）：41-42.

［5］徐叔云，卞如濂.药理实验方法学［M］.北京：人民卫生出版社，2003：1 165.

［6］陈奇.中药药理研究方法学［M］.北京：人民卫生出版社，2006：625-626.

［7］李仪奎.中药药理实验方法学［M］.上海：上海科学技术出版社，2006：428.

（编辑：翟春涛）

Study on the influence factors of phenolsulfonphthalein excretion in mice

Zhao Sijun1，2，Qu Ping1，Li Yang1，Zhang Hong1
（1.Shanxi Institute for Food and Drug Control，Taiyuan Shanxi 030001；2.Modern Research Center for Traditinal Chinese Medicine，Shanxi University，Taiyuan Shanxi 030006）

Objective：To study the main influence factors of phenolsulfonphthalein excretion in mice to improve the standardization and reproducibility of the model mice.Methods：Factors that may affect the phenolsulfonphthalein excretion suchasthebreedsofmouse，bodyweight，fastingbeforeexperimentornot，thetimeofkillingthemouseandphenolsulfonphthalein concentration were invested.Results：The breeds of mouse，the weight of mouse and the time of killing mouse have effects on the experiment while fasting before the experiment or not and phenolsulfonphthalein concentration have no effect.Conclusion：Phenolsulfonphthalein excretion experiment method in mice can be improved by controlling the experimental factors.

phenolsulfonphthalein；excretion；the model mouse

R285.5

A

1671-0258（2017）04-0005-03

山西省实验动物专项资金项目（2014k14）

赵思俊，硕士，主管药师，研究方向为中药药理，E-mail：zsj4429731@163.com

●“实验”虽然是现代科学研究常用的方法，然在我国却自古有之。古代学者王冲说“等类众多，行事比肩，略举较著，以定实验也”，颜之推说“昔在江南，不信有千 人帐，及来河北，不信有二万斛船，皆实验也”，大凡此义均与现代科学意义上的experiment相通。照此，传统中医药学并非只是经验之学，而更充满实验的思想和方法。实验中医药学，将现代实验科学的方法和传统中医药学的实验方法融合起来，开拓现代实验生物学、医学和药物科学的新领域。