高效液相色谱—蒸发光散射检测器法测定芪芳气血颗粒中黄芪甲苷含量分析

赵晓丽

（河南省驻马店市食品药品检验所，河南 驻马店463000）

高效液相色谱—蒸发光散射检测器法测定芪芳气血颗粒中黄芪甲苷含量分析

赵晓丽

（河南省驻马店市食品药品检验所，河南 驻马店463000）

目的：用高效液相色谱——蒸发光散的检测器（HPLC—ELSD）法对芪芳气血颗粒中黄芪甲苷含量进行测定。方法：运用HPLC法测定芪芳气血颗粒中的黄芪甲苷含量，其中流速为0.9mL/min，流动相为乙腈-水为（34︰66），色谱柱为Ultimate XB-C18柱（4.6mm×250mm，5µm）。结果：芪芳气血颗粒中的黄芪甲苷回收率为95.78%，进样量为2.38～11.85µg，峰面积与范围内具有良好的线性关系。结论：（HPLC—ELSD）法测定芪芳气血颗粒中黄芪甲苷含量具有重复性好、准确、操作简单等优点。

高效液相色谱-蒸发光散射检测器法；芪芳气血颗粒；黄芪甲苷

芪芳气血颗粒由熟地黄、当归、黄芪等多味中药组成，具有调经止痛、补血和血、益气补肾功效，被广泛运用于妇科疾病治疗中，尤其是妇女产后气血亏虚证［1］。通常情况下，测量芪芳气血颗粒中的黄芪甲苷含量用薄层扫描是常用方法，但是在实际操作中容易受到诸多因素影响，并且结果不稳定，需显色后扫描，重复性也无法满足要求。蒸发光散射检测器（ELSD）作为通用型的一种质量检测器，能够对无紫外线吸收或不含共轭结构的物质进行分析，并且其基线稳定，能够获得比较理想的分辨率［2］。因此，本研究用高效液相色谱——蒸发光散射检测器（HPLCELSD）法测定黄芪甲苷的含量，报道如下。

1 仪器与试剂

仪器：选择上海梅特勒-托利多公司生产的XS-105型电子天平，精密度为0.01mg，美国Wates公司生产的Waters Alliance 2695型高效液相色谱仪，包括2424ELS Detector Empower工作站和e2695溶剂管理系统。

试剂：芪芳气血颗粒（恒拓集团广西圣康制药有限公司生产，国药准字B20020825，规格15g）。黄芪甲苷对照品由中国食品药品检定研究院提供，含量95.8%，批号110781-201314。水为纯化水，乙腈为色谱纯。

2 方 法

色谱条件：柱温为30℃，空气压力为20.0psi（1psi=6.895kPa），数据率为1PPS，增益为40，漂移管温度为65℃，流速为0.9mL/min，流动相乙腈-水（34∶66），色谱柱Ultimate XB-C18柱（250mm×4.6mm，5µg）。

制备溶液：按照常规方法，精密称取12.38mg黄芪甲苷对照品，放置在25mL容量瓶中，加入适量甲醇直到刻度，制备成对照品溶液，即每1mL含有0.5mg。精密称取15g芪芳气血颗粒，加入50mL纯化水进行溶解，用水饱和的正丁醇振动摇晃，每次40mL，连续进行4次提取，然后与正丁醇提取液合并，运用浓氨试液对正丁醇提取液洗涤2次，每次40mL，将洗涤液弃去，蒸干正丁醇液，用甲醇溶液将残渣转移至5mL容量瓶中，加入适量甲醇直到刻度，摇晃均匀后，滤过，选择滤液作为供试品溶液。同时，根据芪芳气血颗粒处方比例，选择缺黄芪方中其他药材制成阴性样品，再根据供试品溶液制备方法，对阴性对照品溶液进行制备。

3 结 果

阴性干扰试验：分别选择制备溶液中的3种溶液各20µL，根据色谱条件进行进样测定，对色谱图进行记录。结果显示，在供试品溶液色谱中，阴性对照品溶液色谱不存在吸收峰，但是对照品溶液色谱相同保留时间处存在一致的色谱峰，见图1。

图1 高效液相色谱图

1.黄芪甲苷

A.对照品溶液；B.阴性对照品溶液；C.供试品溶液

重复性试验：选择批号为130202的芪芳气血颗粒，按照常规方法，制备6份供试品溶液，在高效液相色谱仪中注入10µL，对黄芪甲苷的含量进行计算，结果显示每袋的平均含量为1.41mL，RSD为1.31%，说明这一方法具有较好的重复性。

稳定性试验：选择批号为130202的供试品溶液，于0、3、6、9、12以及24h时进样，分别对峰面积进行测定，结果显示RSD为0.83%，说明在24h内，供试品溶液比较稳定。

加样回收试验：精密称取7.5mg样品，将1.5mL对照品溶液加入，再加入50mL水进行溶解，按照常规方法，制备6份质量浓度相同的供试品溶液，进样测定，计算回收率，见表1。

表1 黄芪甲苷加样回收试验结果 （n=6）

精密度试验：选择10µL对照品溶液，连续6次进样，对峰面积积分值进行测定，结果显示，RSD为0.57%，说明仪器具有良好的精密度。

线性关系考察：分别提取25、20、15、10以及5µg/L对照品溶液，将拟定色谱条件作为基本依据，对其进行进样测定，以黄芪甲苷进样量峰面积的自然对数（Y）为纵坐标、自然对数（X）为横坐标进行线性回归，得一回归方程，4.4315+1.4713X=Y，r=0.9995（n=5）。结果显示，进样量在2.38～11.85µg范围内时，峰面积与黄芪甲苷具有较好的线性关系。

4 讨 论

蒸发光散射器作为一种质量型检测器，适用于测定无紫外吸收或仅有末端吸收的皂苷类化合物，不容易受到流动相溶剂干扰和官能团的影响，具有较高的回收率和分离度，并且前处理比较简单，是当前测定黄芪甲苷含量的一种有效方法［3］。在本次研究中，运用HPLC-ELSD法对芪芳气血颗粒中的黄芪甲苷含量进行测定，并且对数据率、增益、气流速以及漂移管温度等诸多因素对峰形的影响进行优化，可以确保检测结果的准确性和灵敏度［4］。黄芪甲苷为环菠萝蜜烷型的一种四环三萜类皂苷，在戊醇或含水丁醇中，皂苷具有较好的溶解度，并且样品中已经提取黄芪甲苷，加水直接溶解，提取采用水饱和的正丁醇，再加上正丁醇提取液中通常不含多糖、单糖等杂质，有助于分析［5-6］。同时，在对流动相进行选择时，先对芪芳气血颗粒和黄芪药材进行了实验，通过比较对照品的色谱图，发现黄芪甲苷主峰与其他峰的分离度不高，为了更好分离两个峰，选择乙腈水作为流动相，这一流动相可以排除干扰，有助于分离其他成分。此外，运用1%氢氧化钠溶液（每次20mL，4次）及氨试液（每次40mL，2次）与浓氨试液（每次40mL，2次）对正丁醇提取液进行洗涤，结果显示，与同体积的氨试液相比，1%氢氧化钠溶液及浓氨试液提取黄芪甲苷的含量较高，并且黄芪皂苷Ⅰ和Ⅱ在碱性的条件下转化为黄芪甲苷Ⅳ，说明在一定碱性范围内，黄芪皂苷Ⅰ和Ⅱ转化为黄芪皂苷Ⅳ与碱性程度呈正比关系，即碱性越强，转化越完全。

综上所述，临床上运用HPLC法测定芪芳气血颗粒中的黄芪甲苷含量，具有操作简单、快速、高效等优点，有助于提高该制剂的质量标准，值得推广。

［1］ 吴高芬.高效液相色谱——蒸发光散射器法测定芪芳气血颗粒中黄芪甲苷含量［J］.中国药业，2015，12（22）：60-62.

［2］ 汤淏，崔恩忠，唐安福，等.高效液相色谱-蒸发光散射法测定气血双补口服液中黄芪甲苷的含量［J］.医学研究生学报，2013，3（19）：287-289.

［3］ 许锋，高华宏.高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定健天颗粒中黄芪甲苷含量［J］.中国药业，2011，5（12）：21-22.

［4］ 庞兴寿，牟晓崟.高效液相色谱-蒸发光散射检测器法测定仙芪眩宁颗粒中黄芪甲苷含量［J］.中国药业，2011，17（20）：32-33.

［5］ 刘正磊，冯素香，李娟，等.高效液相-蒸发光散射检测法测定黄芪药材中黄芪甲苷含量［J］.中医学报，2012，27（3）：334-335.

［6］ 谢紫薇，谭天林，王瑷萍，等.高效液相色谱-蒸发光散射检测器法测定健儿宝颗粒中黄芪甲苷含量［J］.中国药业，2016，13（19）：77-79.

Objective：To investigate the clinical effect of HPLC method on the determination of the content of astragaloside in Qifang Qixue Granules. Method：To determine the content of astragaloside in Qifang Qixue Granules by HPLC method，with the flow rate 0.9mL/min and the mobile phase of acetonitrile water（34︰66）.The chromatographic column was Ultimate XB-C18 column（4.6mm×250mm，5µm）. Result：The recovery rate of astragaloside in Qifang Qixue Granules was 95.78% and the injection volume was 2.38～11.85µg，with a good linear relationship between peak area and conclusion range.Conclusion：The clinical application of HPLC method for the determination of the content of astragaloside in Qifang Qixue Granules has the advantages of good repeatability，accuracy，simple operation, and so on.

High performance liquid chromatography evaporative light scattering detector（HPLC）；Qifang Qixue Granules；Astragaloside

R285.5

B

1004-2814（2017）07-0858-03

2017-04-25