巨细胞病毒性肺炎儿童体内中性粒细胞表面黏附分子CD11b表达及临床意义

杨立娜

(辽阳市第三人民医院 检验科， 辽宁 辽阳 111000)

·论著·

巨细胞病毒性肺炎儿童体内中性粒细胞表面黏附分子CD11b表达及临床意义

杨立娜

(辽阳市第三人民医院 检验科， 辽宁 辽阳 111000)

目的 探讨感染巨细胞病毒(CMV)感染性肺炎的儿童体内中性粒细胞表面黏附分子CD11b的表达及诊断价值。方法 收集2014年11月至2016年10月在我院收治的CMV感染性肺炎儿童113例，年龄2～4岁，其中男80例，女33例，通过CMV-pp65抗原检测将CMV肺炎的儿童分为CMV肺炎高活动性感染组、CMV肺炎活动性感染组和非CMV肺炎感染阴性对照组，同时选取我院门诊体检健康同年龄段儿童男21例、女12例作为健康对照组。采用流式细胞仪分别检测上述各组的中性粒细胞表面黏附分子CD11b表达比例。计算CD11b在诊断儿童CMV肺炎过程中的受试者工作曲线(ROC曲线)。结果CMV肺炎高活动性感染的儿童中性粒细胞表达CD11b的比例与非CMV肺炎感染阴性对照组和健康对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。CD11b诊断儿童CMV肺炎高活动性感染组的最佳临界值为表达率40.11%，敏感度为100%，特异度为63.19%，受试者工作曲线下面积为0.612；CD11b诊断儿童CMV肺炎活动性感染组的最佳临界值为表达率63.87%，敏感度为92.87%，特异度为98.34%，受试者工作曲线下面积为0.991。结论 儿童CMV肺炎感染后中性粒细胞CD11b表达下调，可以作为鉴别诊断儿童CMV肺炎活动性感染的实验室依据。

肺炎，病毒性；巨细胞病毒；细胞活素类；流式细胞术

人巨细胞病毒(humancytomegalovirus，HCMV)是具有双螺旋结构的DNA病毒，属于疱疹病毒科中的β亚科，在疱疹病毒家族中，其基因结构最为复杂，且碱基的长度也最长[1]。巨细胞病毒(CMV)属于条件致病病毒，在健康人体内，CMV虽然可以检测出阳性抗体，由于健康人免疫系统的监视作用，能够有效地防止CMV活动性感染的发生。但是，在免疫力低下的人群体内，则容易发生CMV活动性感染，目前报道的容易发生CMV活动性感染的主要人群为婴幼儿和长期服用免疫抑制剂的患者如移植术后的患者和因疾病需要大量服用激素的患者等[2-5]。CMV具有组织和细胞的泛嗜性，因此临床表现也不一，可以累及泌尿生殖系统、中枢神经系统、肝脏、肺、血液循环系统等病变，其中以巨细胞病毒性肺炎最为常见[6-7]。我国属于CMV病毒感染的高发区域，有研究显示在我国通过CMVIgG抗体检测方法检测健康人群，其CMV的阳性感染率高达70%～100%，而孕妇CMV的感染率更是高达95%以上，对于周岁儿童CMV的阳性率约为80%[8-9]。由于儿童免疫系统尚处于发育期，其免疫功能有待完善，因此儿童CMV肺炎的发生比例较高，有研究报道，2～6岁CMV抗体检测阳性的儿童罹患CMV肺炎比例可达13%[10]。如果儿童CMV肺炎活动性感染不能得到有的救治则病程发展迅速，病情凶险，严重者可能危及生命，因此在临床上早期发现并明确诊断CMV感染对于治疗该病具有重要的意义。

1 资料与方法

1.1 研究对象 2014年11月至2016年10月在我院收治的儿童CMV肺炎感染者113例，其中男80例，女33例，年龄2～4岁，平均(3.3±0.2)岁；同时选取我院门诊体检健康同龄儿童33例，男21例，女12例，作为健康对照组，本研究经我院伦理学委员会批准，选择研究纳入人群均获得其儿童监护人的同意并签署知情同意书。

1.2 试剂及检测方法CMV-pp65抗原检测：采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)定性检测，采用CMVBriteTMTurboKit试剂盒(荷兰IQ公司)，将儿童的血液在肝素抗凝后采用密度梯度离心法分离白细胞，并调整白细胞的密度为2×106/ml，将调整好的白细胞液滴入载玻片内并使用试剂盒中的固定液和打孔剂分别处理白细胞，将pp65的一抗在湿盒中孵育6小时后，取出在避光条件下使用高倍镜下镜检。CD11b检测：CD11b购买于美国BD公司，使用破膜固定液将白细胞分离后，使用磷酸盐缓冲溶液(PBS)将白细胞密度调整为5×106/ml细胞悬液，取出195μl，并加入5μlCD11b流式抗体，避光保存20分钟后，采用流式细胞仪检测。

1.3CMV活动性感染诊断标准 儿童外周血中CMV-pp65抗原检测阳性，CMV-pp65抗原检验阳性细胞>100个/5×104白细胞为高活动性CMV感染，CMV-pp65抗原检验阳性细胞<100个/5×104白细胞诊断为CMV活动性感染。

儿童CMV肺炎的诊断标准参照1998年由中华医学会儿科分会制定的《CMV感染诊断方案》[11]：①从儿童受检的血、尿、唾液或组织等任何一种中分离出CMV；②用特异的单克隆抗体从受检的组织或细胞中检测到CMV抗原如早期速发抗原(IEA)、热病抗原(FA)或pp65等；③从外周血白细胞中查得CMV抗原(以上3项中有任何一项阳性时，不仅可以诊断CMV感染，并能诊断为产毒性感染)；④用分子杂交或PCR法从受检材料中检出CMV-mRNA，表明产毒性感染，如检出CMV-DNA特异片段，只能表明CMV感染，不能区分为产毒性或潜伏性感染。

2 结 果

2.1CMV-pp65抗原检测结果 根据CMV-pp65抗原检测结果，将儿童分为CMV高活动性感染组、CMV活动性感染组和非CMV感染阴性对照组。其中儿童CMV高活动性感染组20例，占试验组儿童总数的17.7%，CMV活动性感染组48例，占试验组儿童总数的42.48%，阴性对照组45例，占试验组儿童总数的39.82%。

2.2CD11b在中性粒细胞表达 经过流式CD11b抗体标记后，儿童CMV肺炎高活动性感染儿童体内中性粒细胞可以检测CD11b表达的比例占中性粒细胞总数的(38.17±5.22)%，与CMV活动性感染组(49.23±4.22)%、阴性对照组(61.56±4.37)%和健康对照组(63.34±5.27)%比较差异有统计学意义(P<0.05)(图1)。CD11b诊断儿童CMV高活动性感染的最佳临界值为表达率40.11%，敏感度为100%，特异度为63.19%，受试者工作曲线下面积为0.612；CD11b诊断儿童CMV活动性感染的最佳临界值为表达率63.87%，敏感度为92.87%，特异度为98.34%，受试者工作曲线下面积为0.991(图2)。

与健康对照组比较，**P<0.01；与非CMV感染阴性对照组比较，##P<0.01

图1 各组中CD11b在中性粒细胞表面的表达

图2CD11b诊断儿童CMV高活动性感染和CMV活动性感染的ROC曲线

3 讨 论

婴幼儿由于免疫力低下容易诱发丙型肝炎病毒、柯萨奇B病毒、风疹病毒、流行性腮腺炎病毒、轮状病毒和CMV等病毒感染[12]。而CMV是已知的病原微生物中最容易引起婴幼儿急、慢性感染的病毒之一，而且CMV具有潜伏-活化的生物学特征，有研究显示1周岁儿童CMV抗原的阳性检出率高达80%，一旦儿童的免疫功能低下，CMV就可以直接诱发CMV的活化并最终导致CMV活动性感染，其临床表现以儿童CMV肺炎最为常见[10]。儿童CMV肺炎的病理改变主要集中在细支气管，可以出现细支气管周围炎，临床表现则与间质性肺炎相似，主要表现为发热、咳嗽并伴有肺哮鸣音，严重者可以出现呼吸困难。在早期由于缺乏特异性的检测指标，因此极易引起误诊，造成病情延误[13-14]。同时，CMV具有泛嗜性的特点，特别是在免疫力低下的患者中，CMV感染可以引起多个器官的病变，而且临床表现往往不典型，临床上鉴别诊断CMV感染十分困难。如果长时间不能得到有效的救治，还可以并发儿童免疫功能的损伤，严重危害儿童的身体健康。因此，临床上应对儿童CMV性肺炎引起高度重视，及时完善相关检查，做好鉴别诊断并采用适当治疗方案，实现抢先治疗，以改善儿童病情及预后，提高儿童生存质量。

白细胞黏附分子是介导细胞之间的相互接触和结合分子的统称，其主要是存在于细胞表面或者细胞基质中的糖蛋白，发挥作用形式是通过受体与配体的相结合介导细胞间的信号传导。当受体与配体结合后，细胞之间、细胞与周围的基质间和细胞-基质-细胞之间的相互黏附，参与了细胞信号的整个转导与活化的过程。在中性粒细胞表面有多种黏附分子，其中包括整合素家族、选择素家族、黏蛋白样家族、免疫球蛋白超家族和钙粘素家族[15]。其中整合素是一种能够介导细胞与其周围环境之间的连接的跨膜受体。在细胞间信号转导过程中，整合素可以将细胞外基质的信号等有关信息传入细胞，同时也可以由细胞内向细胞外传递信号。整合素是由α(120 000～185 000)和β(90 000～110 000)两个亚单位形成的异二聚体[16]。CD11b是整合素家族中β2亚族的中的一员，相对分子质量约为160 000，基因位点在16号染色体短臂p11～p13.1，单核巨噬细胞和自然杀伤(NK)细胞表面均可以表达，成熟的中性粒细胞表面CD11b处于非活化状态，在在体内的其他细胞中仅有低水平表达。CD11b的活化与多种因素有关，其中包括补体片段、一些趋化因子和细菌代谢的内毒素和脂多糖等，当白细胞与上述小分子接触后在数分钟内就可以高表达CD11b，因此CD11b的上调被认为是炎症相关的早期标志物之一。因此，CD11b的上调被认为是中性粒细胞被激活的标志。有研究报道，新生儿在重症肺炎的早期就有中性粒细胞表面CD11b高表达，且随着病情好转CD11b表达逐渐降低[17]。这一过程提示CD11b在重症肺炎早期就可发生变化。儿童发生CMV病毒感染时，病毒的代谢产物可以引起机体内肿瘤坏死因子α等炎症趋化因子的高表达，这些炎症因子则可以诱发早期中性粒细胞表面黏附分子CD11b的变化[18]。但是，这个过程在体内存在时间很短，如果当诱发因素没有得到有效控制，CD11b上调的现象会随着时间而下降，这一过程可能与中性粒细胞转变为脓细胞而失去生物学活性有关。

由于儿童CMV感染型肺炎的特点为隐匿性发病，早期的临床症状不典型，不易被察觉，因此儿童CMV感染性肺炎在早期往往不能被及时发现，出现临床症状后，感染程度加重，CD11b的表达下调。CD11b诊断儿童CMV肺炎活动性感染的ROC曲线下面积为0.991，具有较好的诊断价值，特异度可达98.34%，即出现CMV活动性感染后中性粒细胞表面CD11b表达明显降低，对鉴别诊断CMV活动性感染具有重要价值；而诊断CMV高活动感染ROC曲线下面积为仅0.612，诊断价值不如CMV活动性感染高，但敏感度仍较高可达100%。

综上所述，儿童CMV感染性肺炎外周血中性粒细胞表面CD11b表达下调这一现象对CMV活动感染的诊断有重要意义。配合中性粒细胞表面CD11b指标可以有效地提高CMV感染的检出率，使儿童在早期能够得到有效地诊治，实现“抢先治疗”。

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ExpressionandsignificanceofneutrophilsurfaceadhesionmoleculesCD11bfromcytomegalovirusinfectioninchildren

YangLina

DepartmentofLaboratory，theThirdPeople’sHospitalofLiaoyang，Liaoyang111010，China

YangLina，Email：lindayony2014@hotmail.com

ObjectiveTostudydiagnosisandclinicalsignificanceofneutrophilsurfaceadhesionmoleculesincludingCD11bfromcytomegalovirus(CMV)infectionpneumoniainchildren.MethodsBloodsampleswerecollectedfrom113childrenofCMVinfectionpneumoniaincludingmale80andfemale40casesbetweenNovember2014andOctober2016.Healthymale21casesandfemale12casesservedashealthycontrolgroupfromoutpatientsinthesameperiod.ChildrenofCMVinfectionpneumoniaweredividedintohighactiveCMVinfectiongroup，CMVinfectiongroupandthenegativecontrolgroup，andhealthygroupasnormalcontrolgroupaccordingtoCMV-pp65antigendetection.NeutrophilsurfaceadhesionmoleculeCD11bwasanalyzedbyflowcytometryandcomparedrespectively.ROCcurveofCD11binchildrenofCMVinfectionpneumoniawasmade.ResultsTheexpressionratioofCD11binhighactiveCMVinfectiongroupwassignificantlydifferentascomparedwithnegativecontrolgroupandcontrolgroup(P<0.05);optimalcut-offvalueofCD11binhighactiveCMVinfectiongroupwas40.11%，thesensitivitywas100%，thespecificityinhighactiveCMVinfectiongroupwas63.19%，andtheareaundertheROCwas0.612.Theoptimalcut-offvalueofCD11binCMVinfectiongroupwas63.87%，thesensitivityofCD11bwas92.87%，thespecificityofCD11bwas98.34%，andtheareaunderofROCofCD11bwas0.991.ConclusionTheneutrophilsCD11bexpressioninchildrenofCMVinfectionpneumoniaisdownregulation.CD11bexpressioncanbeusedasalaboratorydiagnosisbasisofchildren’sCMVinfection.

pneumonia，viral;cytomegalovirus;cytokines;flowcytometry

杨立娜，Email：lindayony2014@hotmail.com

R

A

1004-583X(2017)08-0703-04

10.3969/j.issn.1004-583X.2017.08.014

2017-05-05 编辑:武峪峰