条叶龙胆中环烯醚萜类化学成分及细胞毒活性研究△

周艳丽，张艳，李硕熙，李英琴，李博谦，王爱莉

(黑龙江中医药大学 佳木斯学院，黑龙江 佳木斯 154007)

·基础研究·

条叶龙胆中环烯醚萜类化学成分及细胞毒活性研究△

周艳丽，张艳*，李硕熙，李英琴，李博谦，王爱莉

(黑龙江中医药大学 佳木斯学院，黑龙江 佳木斯 154007)

目的利用植物化学和现代谱学分析相结合的手段，针对性地开展条叶龙胆中特征性成分——环烯醚萜类化学成分的研究，并对所分离得到的环烯醚萜类单体成分进行细胞毒活性试验，为新的抗肿瘤药物研发提供物质基础。方法运用现代植物化学的研究手段对条叶龙胆进行针对性的提取、分离，并利用包括核磁共振(1D，2D NMR)、质谱等多种谱学手段对其进行结构鉴定，采用MTT方法测定各单体环烯醚萜类化合物的细胞毒活性。结果从条叶龙胆乙醇提取物中分离得到了9个环烯醚萜类成分，分别鉴定为天目地黄苷A(1)，天目地黄苷E(2)，6-酮基-8-乙酰钩果草苷(3)，6，7-去氢-8-乙酰钩果草苷(4)，齿叶玄参苷A(5)，大花木巴戟苷C(morinlongoside C，6)，3′-O-β-D-吡喃葡萄糖基獐牙菜苷(7)，地黄新苷B(8)和地黄新苷C(9)。采用MTT方法对化合物1～9进行细胞毒活性评价，结果显示化合物1、4、5、8对人源肝癌细胞HepG2增殖具有抑制活性，IC50值分别为13.6、12.0、7.5、9.0 μmol·L-1。结论环烯醚萜类化合物1～9均为从该植物中首次分离得到，且发现了对人源肝癌细胞HepG2增殖有一定抑制活性的环烯醚萜类成分。

条叶龙胆；环烯醚萜；细胞毒活性

条叶龙胆GentianamanshuricaKitag.为龙胆科(Gentianaceae)龙胆属(Gentiana)多年生草本植物，生长在海拔 100～1100 m的山坡草地、湿草地、路旁处，在我国多个省份均有分布[1]。该属植物物种多样，世界范围内有400余种，分布于欧洲、亚洲等地，而我国有247种，分布遍及全国[1]。文献调研发现从该属植物中分离得到的化学成分主要为环烯醚萜、黄酮等类成分[2-4]。现代药理研究不但显示出其与传统功效一致的保肝活性，而且呈现出了抗炎、止痛、抗病毒、抗肿瘤等方面的活性[2-4]。基于龙胆属植物富含具有良好抗肿瘤活性的环烯醚萜类成分，为了给新的抗肿瘤药物研发提供一定的数据支撑，笔者对条叶龙胆环烯醚萜类成分进行了定向研究，从其乙醇提取物中共分离得到9个环烯醚萜类结构，采用MTT方法对化合物1～9进行细胞毒活性评价。

1 仪器与材料

Bruker DRX-600核磁共振仪，Bruker HTC/Esquire 质谱仪，硅胶(200～300目)、硅胶板(高效板，青岛海洋化学有限责任公司)，凝胶LH-20(GE公司)，高效液相色谱仪(Agilent 1260)、Multiskan MK3酶标仪(热电公司)，Quintix125D-1CN分析天平(德国赛多利斯集团)。

HepG2、HCT-1116、BGC-823细胞(中国医学科学院基础研究所)，四甲基偶氮唑盐(MTT，Gibco公司)。

条叶龙胆于2014年7月采集于黑龙江省齐齐哈尔市碾子山地区，经黑龙江中医药大学陈效忠副教授鉴定为龙胆科龙胆属植物条叶龙胆GentianamanshuricaKitag.的根及根茎。药材存放于黑龙江中医药大学佳木斯学院标本馆(编号：2014090703)。

2 提取与分离

取干燥药材10 kg，粉碎后用95%乙醇水溶液回流提取3次，每次1 h。将3次提取得到的提取液合并，经减压干燥得到干浸膏2.0 kg，加水混悬后，依次用乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，萃取液分别进行减压浓缩干燥，得到乙酸乙酯部分和正丁醇部分。取正丁醇部分(共300.0 g)用D101大孔吸附树脂柱色谱(12.0 cm×80.0 cm)分离，依次选用适量的纯水，30%、60%、95%乙醇水溶液进行分段洗脱。其中，60%乙醇水溶液洗脱部分经真空干燥得到洗脱物78.0 g，运用硅胶柱色谱法进行进一步色谱分离，梯度洗脱溶剂选用三氯甲烷-甲醇系统(体积比依次为20∶1，10∶1，6∶1，4∶1，3∶1，1∶1，0∶1)，经收集合并洗脱液得到10个流分Fr.1～10。流分Fr.8(13.8 g)经硅胶柱色谱[三氯甲烷-甲醇(50∶50)洗脱]得到16个亚组分Subfr.8(1～16)。流分Subfr.8(7)(3.0 g)经过反复硅胶柱色谱后又经LH-20凝胶柱色谱纯化得到化合物3(17.0 mg)和4(15.0 mg)。Subfr.8(8)(2.0 g)经LH-20凝胶柱色谱纯化得到化合物2(8.1 mg)。流分Subfr.10(5.3 g)首先经C18反相柱色谱进行纯化，再经半制备HPLC(甲醇-水为流动相，体积比为30∶70，流速为3.0 mL·min-1)进一步纯化得到化合物1(9.3 mg)和7(2.7 mg)。流分Fr.12(10.0 g)经C18反相柱色谱分离，得到20个流分Subfr.12(1～20)。Subfr.12(5)(1.5 g)经过制备型HPLC(甲醇-水为流动相，体积比为40∶60，流速为5.0 mL·min-1)得到化合物5(12.0 mg)和6(8.5 mg)。Subfr.12(7)(1.0 g)经过制备型HPLC(甲醇-水为流动相，体积比为50∶50，流速为5.0 mL·min-1)得到化合物8(8.0 mg)和9(5.0 mg)。

3 体外抑制肿瘤细胞增殖活性评价(MTT法)

将3种待测细胞株(HepG2，HCT-1116，BGC-823)配制成1×105浓度的悬液，接种100 μL于96孔板，培养24 h；将待测样品配制6个梯度浓度(0.10、0.50、0.25、1.25、6.25、31.25 μmol·L-1)，每个梯度浓度做6个重复，分别取100 μL至96孔板实验组，另外设空白组和对照组(紫杉醇)；作用48 h后，离心，弃上清液，加100 μL MTT，再使其作用4 h后，再次离心，弃上清液，加150 μL二甲基亚砜(DMSO)，振荡约10 min，于570 nm下测其吸光度值[5]。

4 结果

4.1 结构鉴定

化合物1：白色粉末。ESI-MSm/z331 [M+H]+，结合1H-NMR和13C-NMR可知其分子式为C15H22O8。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：5.08(1H，d，J=7.8 Hz，H-1)，4.47(1H，m，Ha-3)，4.28(1H，m，Hb-3)，5.60(1H，dd，J=6.0，2.6 Hz，H-4)，6.26(1H，d，J=6.0 Hz，H-6)，5.97(1H，d，J=6.0 Hz，H-7)，2.75(1H，m，H-9)，1.33(3H，s，H-10)；Glc(葡萄糖基)δ：4.75(1H，d，J=8.4 Hz，H-1′)，3.33(1H，m，H-2′)，3.42(1H，t，J=8.4 Hz，H-3′)，3.37(1H，t，J=8.4 Hz，H-4′)，3.33(1H，m，H-5′)，3.87(1H，dd，J=12.0，2.0 Hz，Ha-6′)，3.71(1H，dd，J=12.0，6.0 Hz，Hb-6′)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：98.9(C-1)，66.6(C-3)，116.8(C-4)，141.7(C-5)，130.6(C-6)，145.7(C-7)，82.8(C-8)，55.9(C-9)，23.3(C-10)；Glcδ：100.5(C-1′)，74.9(C-2′)，77.9(C-3′)，71.8(C-4′)，78.4(C-5′)，62.9(C-6′)。以上数据与文献报道的数据进行比较[6]，确定化合物为天目地黄苷A，从该植物中首次分离得到。

化合物2：白色粉末。ESI-MSm/z635 [M+Na]+，结合1H-NMR和13C-NMR可知其分子式为C30H44O13。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：5.10(1H，d，J=10.0 Hz，H-1)，6.33(1H，m，H-3)，5.08(1H，dd，J=6.0，4.8 Hz，H-4)，3.25(1H，m，H-5)，3.90(1H，d，J=7.8 Hz，H-6)，3.47(1H，s，H-7)，2.47(1H，m，H-9)，4.26(1H，d，J=14.0 Hz，Ha-10)，3.79(1H，d，J=14.0 Hz，Hb-10)；Glcδ：5.00(1H，d，J=8.0 Hz，H-1′)，4.90(1H，dd，J=10.0，8.0 Hz，H-2′)，3.67(1H，m，H-3′)，3.40(1H，m，H-4′)，3.39(1H，m，H-5′)，3.97(1H，d，J=11.4 Hz，Ha-6′)，3.70(1H，m，Hb-6′)；1.70(1H，m，Ha-2″)，1.20(1H，m，Hb-2″)，1.90(1H，m，Ha-3″)，1.40(1H，m，Hb-3″)，1.85(1H，m，Ha-4″)，1.50(1H，m，Hb-4″)，6.78(1H，d，J=16.0 Hz，H-7″)，6.48(1H，d，J=16.0 Hz，H-8″)，5.90(1H，s，H-10″)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：96.0(C-1)，141.9(C-3)，104.8(C-4)，39.2(C-5)，80.0(C-6)，62.6(C-7)，66.6(C-8)，43.7(C-9)，62.1(C-10)；Glcδ：98.3(C-1′)，74.8(C-2′)，75.9(C-3′)，72.1(C-4′)，79.0(C-5′)，63.0(C-6′)；40.3(C-1″)，37.8(C-2″)，19.0(C-3″)，37.2(C-4″)，75.9(C-5″)，80.9(C-6″)，140.9(C-7″)，134.6(C-8″)，155.0(C-9″)，119.1(C-10″)。以上数据与文献的数据进行比较[6]，确定化合物为天目地黄苷E，从该植物中首次分离得到。

化合物3：白色粉末。ESI-MSm/z405 [M+H]+，结合1H-NMR和13C-NMR可知其分子式为C17H24O11。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：5.45(1H，d，J=2.0 Hz，H-1)，5.57(1H，d，J=6.0 Hz，H-3)，5.13(1H，dd，J=6.0，2.0 Hz，H-4)，2.45(1H，d，J=6.3 Hz，Ha-7)，2.30(1H，d，J=6.3 Hz，Hb-7)，2.95(1H，d，J=1.6 Hz，H-9)，1.54(3H，s，H-10)，1.91(3H，s，OAc)；Glcδ：4.71(1H，d，J=7.6 Hz，H-1′)，3.45(1H，m，H-2′)，3.30(1H，m，H-3′)，3.37(1H，m，H-4′)，3.53(1H，m，H-5′)，3.82(1H，m，Ha-6′)，3.70(1H，m，Hb-6′)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：95.7(C-1)，145.4(C-3)，109.2(C-4)，73.8(C-5)，213.3(C-6)，50.1(C-7)，87.7(C-8)，56.2(C-9)，23.1(C-10)；Glcδ：99.6(C-1′)，73.8(C-2′)，77.5(C-3′)，71.7(C-4′)，77.2(C-5′)，61.7(C-6′)；171.6(1-OAc)，25.0(2-OAc)。以上数据与已知文献的数据进行比较[7]，确定化合物为6-酮基-8-乙酰钩果草苷，从该植物中首次分离得到。

化合物4：白色粉末。ESI-MSm/z389 [M+H]+，结合1H-NMR和13C-NMR可知其分子式为C17H24O10。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：5.45(1H，d，J=2.0 Hz，H-1)，5.76(1H，d，J=6.0 Hz，H-3)，5.23(1H，dd，J=6.0，2.0 Hz，H-4)，6.07(1H，dd，J=9.0，1.6 Hz，H-6)，5.84(1H，d，J=9.0，3.5 Hz，H-7)，3.26(1H，d，J=2.0 Hz，H-9)，1.40(3H，s，H-10)，2.02(3H，s，OAc)；Glcδ：4.52(1H，d，J=7.6 Hz，H-1′)，3.50(1H，m，2′)，3.56(1H，m，H-3′)，3.23(1H，m，H-4′)，3.37(1H，m，H-5′)，3.75(1H，m，H-6′a)，3.63(1H，m，H-6′b)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：95.0(C-1)，144.1(C-3)，107.8(C-4)，76.3(C-5)，133.9(C-6)，128.8(C-7)，90.7(C-8)，47.3(C-9)，23.5(C-10)；Glcδ：99.3(C-1′)，74.8(C-2′)，77.2(C-3′)，70.8(C-4′)，77.9(C-5′)，62.5(C-6′)；167.2(OAc-1)，25.6(OAc-2)。以上数据与文献的数据进行比较[7]，确定化合物为6，7-去氢-8-乙酰钩果草苷，从该植物中首次分离得到。

化合物5：白色粉末。ESI-MSm/z805 [M+Na]+，结合1H-NMR和13C-NMR可知化合物分子式为C36H46O19。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：5.20(1H，m，H-1)，6.51(1H，m，H-3)，5.11(1H，m，H-4)，2.51(1H，m，H-5)，4.10(1H，d，J=8.0 Hz，H-6)，3.67(1H，s，H-7)，2.61(1H，dd，m，H-9)，4.20(1H，d，J=13.4 Hz，Ha-10)，3.85(1H，d，J=13.4 Hz，Hb-10)；Glcδ：4.80(1H，d，J=7.6 Hz，H-1′)，3.25(1H，m，H-2′)，3.43(1H，t，J=9.0 Hz，H-3′)，3.27(1H，m，H-4′)，3.33(1H，m，H-5′)，3.65(1H，m，H-6′a)，3.95(1H，m，H-6′b)；Rhaδ：5.10(1H，m，H-1″)，5.31(1H，m，H-2″)，5.36(1H，m，H-3″)，5.20(1H，t，J=10.0 Hz，H-4″)，4.10(1H，m，H-5″)，1.25(1H，d，J=6.0 Hz，H-6″)，7.27(1H，d，J=2.0 Hz，H-2‴)，7.00(1H，d，J=8.6 Hz，H-5‴)，7.19(1H，dd，J=2.0，8.6 Hz，H-6‴)，7.70(1H，d，J=16.0 Hz，H-7‴)，6.47(1H，d，J=16.0 Hz，H-8‴)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：95.6(C-1)，142.9(C-3)，103.7(C-4)，37.8(C-5)，85.2(C-6)，60.0(C-7)，66.9(C-8)，43.7(C-9)，61.7(C-10)，Glcδ：100.1(C-1′)，75.3(C-2′)，78.1(C-3′)，72.3(C-4′)，79.0(C-5′)，63.3(C-6′)；Rhaδ：98.2(C-1″)，71.7(C-2″)，71.0(C-3″)，72.5(C-4″)，68.6(C-5″)，18.0(C-6″)，129.3(C-1‴)，112.0(C-2‴)，151.4(C-3‴)，153.8(C-4‴)，112.9(C-5‴)，124.9(C-6‴)，148.0(C-7‴)，115.9(C-8‴)，168.5(C-9‴)；172.0(OCOCH3-1)，21.0(OCOCH3-1)，172.0(OCOCH3-2)，21.0(OCOCH3-2)，56.6(OMe)，56.8(OMe′)。以上数据与文献的数据进行比较[8]，确定化合物为齿叶玄参苷A，从该植物中首次分离得到。

化合物6：白色粉末。ESI-MSm/z559 [M+Na]+，结合1H-NMR和13C-NMR可知化合物分子式为C22H32O15。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：5.40(1H，d，J=5.6 Hz，H-1)，7.50(1H，m，H-3)，3.70(1H，m，H-5)，6.11(1H，dt，J=2.0，5.5 Hz，H-6)，5.70(1H，dt，J=2.0，5.5 Hz，H-7)，3.10(1H，m，H-8)，2.50(1H，m，H-9)，3.90(1H，m，H-10a)，3.80(1H，m，H-10b)；Glcδ：4.70(1H，d，J=8.0 Hz，H-1′)，3.30(1H，m，H-2′)，3.40(1H，m，H-3′)，3.37(1H，m，H-4′)，3.32(1H，m，H-5′)，3.92(1H，m，Ha-6′)，3.75(1H，m，Hb-6′)；Glc 4.36(1H，d，J=7.0 Hz，H-1″)，3.27(1H，m，H-2″)，3.40(1H，m，H-3″)，3.33(1H，m，H-4″)，3.30(1H，m，H-5″)，3.90(1H，dd，J=2.0，12.0 Hz，Ha-6″)，3.70(1H，dd，J=8.5，12.0 Hz，Hb-6″)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)Aglyconeδ：97.7(C-1)，153.3(C-3)，112.1(C-4)，40.7(C-5)，136.0(C-6)，131.8(C-7)，48.9(C-8)，45.3(C-9)，72.5(C-10)，171.0(C-11)；Glcδ：100.3(C-1′)，74.9(C-2′)，78.0(C-3′)，71.9(C-4′)，78.6(C-5′)，62.9(C-6′)；Glcδ：103.9(C-1″)，75.5(C-2″)，78.0(C-3″)，71.7(C-4″)，78.3(C-5″)，62.8(C-6″)。以上数据与文献的数据进行比较[9]，确定化合物为大花木巴戟苷C，从该植物中首次分离得到。

化合物7：白色粉末。ESI-MSm/z543 [M+Na]+，结合1H-NMR和13C-NMR可知化合物分子式为C22H32O14。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：5.50(1H，d，J=2.0 Hz，H-1)，7.60(1H，s，H-3)，3.09(1H，m，H-5)，1.68(2H，m，H-6)，3.85(1H，m，Ha-7)，4.37(1H，m，Hb-7)，5.51(1H，m，H-8)，2.70(1H，m，H-9)，5.30(1H，m，Ha-10)，5.28(1H，m，Hb-10)；Glcδ：4.70(1H，d，J=7.0 Hz，H-1′)，3.22(1H，m，H-2′)，4.45(1H，m，H-3′)，3.30(1H，m，H-4′)，3.21(1H，m，H-5′)，3.60(1H，m，Ha-6′)，3.55(1H，m，Hb-6′)；Glc 4.56(1H，d，J=7.0 Hz，H-1″)，3.30(1H，m，H-2″)，3.32(1H，m，H-3″)，3.40(1H，m，H-4″)，3.29(1H，m，H-5″)，3.66(1H，m，Ha-6″)，3.57(1H，m，Hb-6″)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：98.3(C-1)，154.5(C-3)，105.5(C-4)，28.8(C-5)，26.0(C-6)，70.0(C-7)，133.8(C-8)，44.0(C-9)，121.0(C-10)，169.2(C-11)；Glcδ：100.1(C-1′)，74.6(C-2′)，87.8(C-3′)，70.3(C-4′)，78.0(C-5′)，62.9(C-6′)；Glcδ：105.0(C-1″)，75.8(C-2″)，78.3(C-3″)，71.8(C-4″)，78.6(C-5″)，62.6(C-6″)。以上数据与文献的数据进行比较[10]，确定化合物为3′-O-β-D-吡喃葡萄糖基獐牙菜苷，从该植物中首次分离得到。

化合物8：白色粉末。ESI-MSm/z683 [M+Na]+，结合1H-NMR和13C-NMR可知化合物分子式为C29H40O17。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：5.55(1H，d，J=2.6 Hz，H-1)，6.30(1H，dd，J=6.0，2.6 Hz，H-3)，5.00(1H，dd，J=6.0，3.0 Hz，H-4)，3.00(1H，dd，J=9.0，2.0 Hz，H-5)，5.10(1H，m，H-6)，2.31(1H，m，Ha-7)，2.10(1H，m，Hb-7)，2.63(1H，dd，J=10.0，2.6 Hz，H-9)，1.46(3H，s，H-10)；Glcδ：4.66(1H，d，J=8.0 Hz，H-1′)，3.20(1H，dd，J=9.0，8.0 Hz，H-2′)，3.38(1H，t，J=9.0 Hz，H-3′)，3.28(1H，m，H-4′)，3.30(1H，m，H-5′)，3.90(1H，m，Ha-6′)，3.68(1H，m，Hb-6′)；7.70(1H，d，J=2.0 Hz，H-2″)，7.22(1H，d，J=8.6 Hz，H-5″)，7.70(1H，dd，J=8.6，2.0 Hz，H-6″)，3.88(1H，s，OMe)；Glcδ：5.08(1H，d，J=7.2 Hz，H-1‴)，3.53(1H，dd，J=9.0，8.0 Hz，H-2‴)，3.50(1H，t，J=9.0 Hz，H-3‴)，3.39(1H，t，J=9.0 Hz，H-4‴)，3.45(1H，m，H-5‴)，3.88(1H，m，Ha-6‴)，3.69(1H，m，Hb-6‴)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：93.6(C-1)，141.5(C-3)，104.7(C-4)，39.8(C-5)，81.0(C-6)，47.9(C-7)，79.6(C-8)，52.0(C-9)，26.2(C-10)；Glcδ：99.6(C-1′)，75.0(C-2′)，78.7(C-3′)，72.0(C-4′)，78.1(C-5′)，62.9(C-6′)；125.8(C-1″)，114.4(C-2″)，150.7(C-3″)，152.6(C-4″)，116.6(C-5″)，124.6(C-6″)，167.8(C-7″)，56.9(OMe)；Glcδ：101.3(C-1‴)，74.8(C-2‴)，78.3(C-3‴)，71.6(C-4‴)，78.0(C-5‴)，62.6(C-6‴)。以上数据与文献的数据进行比较[11]，确定化合物为地黄新苷B，从该植物中首次分离得到。

化合物9：白色粉末。ESI-MSm/z697 [M+Na]+，结合1H-NMR和13C-NMR可知化合物分子式为C30H42O17。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：5.55(1H，d，J=2.6 Hz，H-1)，6.30(1H，dd，J=6.0，2.6 Hz，H-3)，5.00(1H，dd，J=6.0，3.0 Hz，H-4)，3.00(1H，dd，J=9.0，2.0 Hz，H-5)，5.10(1H，m，H-6)，2.31(1H，m，Ha-7)，2.10(1H，m，Hb-7)，2.63(1H，dd，J=10.0，2.6 Hz，H-9)，1.46(3H，s，H-10)；Glcδ：4.66(1H，d，J=8.0 Hz，H-1′)，3.20(1H，dd，J=9.0，8.0 Hz，H-2′)，3.38(1H，t，J=9.0 Hz，H-3′)，3.28(1H，m，H-4′)，3.30(1H，m，H-5′)，3.90(1H，m，Ha-6′)，3.68(1H，m，Hb-6′)；7.70(1H，d，J=2.0 Hz，H-2″)，7.22(2H，s，H-2″和H-6″)，3.88(6H，s，OMe)；Rhaδ：5.35(1H，d，J=1.2 Hz，H-1‴)，4.15(1H，m，H-2‴)，3.90(1H，m，H-3‴)，3.45(1H，m，H-4‴)，4.25(1H，m，H-5‴)，1.20(3H，d，J=6.0 Hz，H-6‴)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：93.6(C-1)，141.5(C-3)，104.7(C-4)，39.8(C-5)，81.0(C-6)，47.9(C-7)，79.6(C-8)，52.0(C-9)，26.2(C-10)；Glcδ：99.6(C-1′)，75.0(C-2′)，78.7(C-3′)，72.0(C-4′)，78.1(C-5′)，62.9(C-6′)；125.8(C-1″)，114.4(C-2″)，150.7(C-3″)，152.6(C-4″)，116.6(C-5″)，124.6(C-6″)，167.8(C-7″)，56.9(OMe)；Rhaδ：101.3(C-1‴)，72.8(C-2‴)，72.3(C-3‴)，73.6(C-4‴)，71.5(C-5‴)，18.0(C-6‴)。以上数据与已知文献的数据进行比较[11]，确定化合物为地黄新苷C，从该植物中首次分离得到。

4.2 体外抑制肿瘤细胞增殖活性结果

仅化合物1、4、5、8对人源肝癌细胞HepG2增殖呈现出一定的抑制活性，其IC50值分别为13.6、12.0、7.5、9.0 μmol·L-1，阳性药紫杉醇IC50值为0.003 μmol·L-1。

5 结果和讨论

本文对条叶龙胆进行化学成分和生物活性研究，并且首次从该植物中分离得到9个环烯醚萜苷类化合物，其中4个化合物具有选择性抑制HepG2增殖活性。本研究结果对于从条叶龙胆中寻找抗肿瘤先导化合物具有一定的参考意义。

[1] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志[M].北京：科学出版社，1988：107.

[2] Bakuridze A D, Dargaeva T D, Nikolaeva G G, et al. Iridoids of plants of the genus Gentiana, from the family Gentianaceae[J]. Chem Nat Compd, 1987, 23(1):1.

[3] Pan Y，Zhao Y L，Zhang J，et al.Phytochemistry and pharmacological activities of the genus Gentiana(Gentianaceae)[J].Chem Biodivers，2016，13(2)：107.

[4] Yang J L，Liu L L，Shi Y P.Phytochemicals and biological activities of Gentiana species[J].Nat Prod Commun，2010，5(4)：649.

[5] Malich G，Markovic B，Winder C.The sensitivity and specificity of the MTS tetrazolium assay for detecting the in vitro cytotoxicity of 20 chemicals using human cell lines[J].Toxicology，1997，124(3)：179.

[6] Liu Y F，Shi G R，Wang X，et al.Bioactive iridoid glycosides from the whole plants of Rehmannia chingii[J].J Nat Prod，2016，126(2)：143.

[7] Manguro L O，Ogur J A，Okora D M，et al.Further flavonol and iridoid glycosides from Ajuga remota aerial parts[J].J Asian Nat Prod Res，2007，9(6-8)：617.

[8] Zhang L，Zhu T，Qian F，et al.Iridoid glycosides isolated from Scrophularia dentata Royle ex Benth.and their anti-inflammatory activity[J].Fitoterapia，2014，98：84.

[9] Cuong N M，Huong T T，Son N T，et al.Morinlongosides A-C，two new naphthalene glycoside and a new iridoid glycoside from the roots of Morinda longissima[J].Chem Pharm Bull，2016，64(8)：1230.

[10] Tian X Y，Wang Y H，Liu H Y，et al.On the chemical constituents of Dipsacus asper[J].Chem Pharm Bull，2007，55(12)：1677.

[11] Liu Y F，Liang D，Luo H，et al.Hepatoprotective iridoid glycosides from the roots of Rehmannia glutinosa[J].J Nat Prod，2012，75(9)：1625.

IridoidsfromGentianamanshuricaandTheirAnti-tumorActivity

ZHOU Yanli，ZHANG Yan*，LI Shuoxi，LI Yingqin，LI Boqian，WANG Aili

(JiamusiCollege，HeilongjiangUniversityofChineseMedicine，Jiamusi154007，China)

Objective:To study the iridoids inGentianamanshuricaand their cytotoxic activity aiming at the new anti-tumor drug discovery.MethodsPhytochemical investigation and cytotoxic activity were carried out.ResultsNine iridoids were obtained and elucidated as rehmachingiioside A (1)，rehmachingiioside E (2)，6-keto-8-acetylharpagide (3)，6，7-dehydro-8-acetylharpagide (4)，scrodentoside A (5)，morinlongoside C (6)，3′-O-β-D-glucopyranosyl sweroside (7)，rehmaglutoside B (8)，and rehmaglutoside C (9).Among them，compounds 1，4，5，and 8 exhibited anti-tumor activity against HepG2 cell with IC50values of 13.6，12.0，7.5，and 9.0 μmol·L-1，respectively.ConclusionThe compound 1-9 were isolated fromG.manshuricafor the first time.

Gentianamanshurica；iridoid；anti-tumor activity

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.9.006

黑龙江中医药大学校基金(201736)

*

张艳，讲师，研究方向：中草药微量活性成分；Tel：(0545)6103257；E-mail:tonyyan20081982@163.com

2017-01-14)