镇痛宁胶囊镇痛作用部位的实验研究

何小英，马迎春

（甘肃省药品检验研究院，甘肃 兰州 730070）

镇痛宁胶囊镇痛作用部位的实验研究

何小英，马迎春

（甘肃省药品检验研究院，甘肃 兰州 730070）

目的：探讨镇痛宁胶囊实现镇痛效果的作用部位，为临床用药提供依据。方法：采用中枢神经镇痛和末梢神经镇痛动物模型进行该药的镇痛实验。结果：大鼠脑室给药电刺激实验与空白对照组比较，低剂量组（0.38 μg/kg）有明显差异（P＜0.05）；中剂量组（0.76 μg/kg）、高剂量组（1.14 μg/kg）有非常显著性差异（P＜0.01），在给药3 h后，与空白对照组比较中剂量（0.76 μg/kg）有明显差异（P＜0.05）。大鼠脑室给药甩尾实验与空白对照组比较，给药1 h时中剂量（0.76 μg/kg）有显著性差异（P＜0.01）、高剂量组有显著性差异（P＜0.05）；给药2 h时中剂量组（0.76 μg/kg）有显著性差异（P＜0.05）；在给药3 h时中剂量（0.76 μg/kg）有显著性差异（P＜0.01）。扭体实验与空白对照组比较，低剂量组（0.19 g/kg）有显著性差异（P＜0.05），中剂量组（0.38 g/kg）、高剂量组（0.56 g/kg）有显著性差异（P＜0.01）。大鼠足跖定压实验与空白对照组比较，左、右脚趾中剂量组（0.76 μg/kg）、高剂量组（1.14 μg/kg）均有显著性差异（P＜0.01）。结论：大鼠脑室给药镇痛实验表明该药为中枢性镇痛药，并且镇痛作用延长至3 h，明显长于吗啡组；小鼠醋酸扭体试验和大鼠致炎足趾定压实验结果表明，该药对末梢神经疼痛也有明显的抑制作用。

镇痛宁胶囊；镇痛作用；实验研究

镇痛宁胶囊为纯中药复方制剂，具有祛风通络、祛痰除湿、补血活血、通络止痛的功效，有标本兼治的作用，主要用于治疗头痛，偏头痛。

1 实验材料

1.1 实验动物

昆明种小鼠，SPF级，体质量18～22 g，雌雄各半，每组10只。Wistar大鼠，SPF级，体质量150～200 g，雌雄各半，每组10只。以上动物均购于甘肃省中医药大学动物实验中心，实验动物合格证号：SCXK-（甘）2014-002。

1.2 受试药物

镇痛宁胶囊（兰州鑫科医药科技有限公司，批号：20140810）。配制方法：实验时称取胶囊内容物，以1%羧甲基纤维素钠或蒸馏水稀释至混悬液灌胃给药。剂量设计：根据新药审批办法要求，设计高、中、低3个剂量，0.56，0.38，0.19 g/kg（小鼠剂量），1.14，0.76，0.38 g/kg（大鼠剂量）。脑室给药用蒸馏水浸泡药物灭菌后备用。

1.3 阳性对照物

桂参止痛合剂（昆明益康制药厂，批号：20140611），给药剂量为0.81 g/kg（是临床用药剂量的10倍）。盐酸吗啡（沈阳第一制药厂，批号：2013990702），皮下注射给药剂量为3.33 mg/kg（是临床剂量的5倍）。

1.4 空白对照

等剂量的生理盐水给药。

1.5 仪器与试剂

仪器：GT-8402型热板仪；GJ-7906型光电记数仪；YSD-4药理生理多用仪；光辐射刺激仪（由10倍放大镜，24 V，250 W碘钨灯组成）。

试剂：醋酸，角叉菜等均为市售化学试剂。

1.6 动物管理

1.6.1 饲养环境 动物分区饲养于甘肃省药品检验研究院安评中心动物室，该动物室为洁净设施环境，环境温度：18～24℃，相对湿度40%～60%，动物使用许可证号：SYXK（甘）2011-002。

1.6.2 饲料 日常喂以兰州生物制品研究所有限责任公司动物室提供的鼠饲料。主要成分及含量：水分6.5%，粗脂肪7.8%，粗蛋白23.7%，粗纤维5.2%，粗灰分8.5%，钙1.5%，总磷0.9%，符合国家GB 14924.3-2001标准。

2 实验方法

2.1 大鼠脑室给药电刺激实验

Wistar大鼠60只，SPF级，雌雄各半，体质量150～200 g，随机分为6组，每组10只，按给药前痛阈值分层随机分成灌胃给药镇痛宁胶囊低、中、高3个剂量组，分别为0.38，0.76，1.14 g/kg；桂参止痛合剂组给药剂量为0.81 g/kg。吗啡组脑室给药剂量为3.33 mg/kg﹑空白对照组给等体积溶剂的生理盐水（NS），以上6组给药方式均为脑室给药。实验前预测，用YSD-4药理生理多用仪两电极刺激小鼠尾部（条件为5 V，0.04 ms，1 Hz，1/0.125 s），连续3次，每次间隔5 min，3次内有2次嘶叫为合格。选合格大鼠进行实验。脑室给药方法为：切开大鼠颅顶皮肤，暴露颅骨，然后用注射器针头插入右侧脑室给药，于给药10 min，1 h，2 h，3 h后进行实验，记录出现第一次嘶叫的时间[1]。

2.2 大鼠脑室给药甩尾实验

Wistar大鼠60只，SPF级，雌雄各半，体质量150～200 g，随机分为6组，每组10只，给药方法及动物分组同大鼠脑室给药电刺激试验。辐射仪由10倍放大镜和24 V，250 W碘钨灯组成，灯产生一定强度的光束，经透镜聚焦照射大鼠尾部致痛，大鼠甩尾作为疼痛反应指标。将大鼠分别置于特制的固定圆筒内，使其不能自由活动而鼠尾由筒后盖的中心孔处穿出，任其自然下垂，大鼠稍经训练即能保持安静以备实验。测痛时漏斗外口紧贴鼠尾，借电子秒表记录从照射开始至出现甩尾的时间作为痛阈值，连测2次，取其平均值作为基础痛阈值[2-3]。选用5 s左右引起甩尾的大鼠供实验用，＜3 s或＞10 s表示动物反应过敏或迟钝，舍弃不用。给药后每隔1 h测定1次，记录引起甩尾的照射时间，连续3次，若照射12.5 s仍不甩尾时，中断照射，以免局部烫伤，并以12.5 s计算。

2.3 小鼠扭体实验

昆明种小鼠60只，SPF级，雌雄各半，体质量18～22 g随机分为6组，每组10只，按给药前痛阈值分层随机分成灌胃给药镇痛宁胶囊高、中﹑低剂量组、桂参合剂组﹑等体积溶剂空白对照组，吗啡皮下注射给药组，给药剂量见表3，各组动物给药后1 h，每鼠腹腔注射 0.6%醋酸溶液0.2 mL/20 g，记录20 min内小鼠扭体次数。

2.4 大鼠足趾定压实验

Wistar大鼠60只，SPF级，雌雄各半，体质量150～200 g，随机分为6组，每组10只，给药剂量及动物分组同小鼠扭体实验。给药30 min后，大鼠右脚注射1%角叉菜、0.1 mL/只，于给药1 h后，用游标卡尺测定大鼠足跖压痛值。（先用游标卡尺测定脚的厚度，再推动卡尺加压，直到大鼠嘶叫为止，计算两次游标卡尺的差值）同时对大鼠未致炎的左脚进行测定，并对各组动物分别于1 h后进行测定[4-7]。

2.5 统计学方法

所有实验结果采用SPSS 10.0统计软件统计数据。计量资料以“±s”表示，采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 大鼠脑室给药电刺激实验

表1 镇痛宁胶囊对大鼠脑室给药电刺激法的镇痛实验结果

表1结果表明，镇痛宁胶囊3个剂量在给药10 min，1 h，2 h后均有明显镇痛作用，与空白对照组比较，低剂量组（0.38 μg/kg）有明显差异（P＜0.05）;中剂量组（0.76 μg/kg）、高剂量组（1.14 μg/kg）有非常显著性差异（P＜0.01），在给药3 h后，与空白对照组比较中剂量（0.76 μg/kg）有明显差异（P＜0.05），提示镇痛时间长于吗啡组。

3.2 大鼠脑室给药甩尾试验

表2 镇痛宁胶囊对大鼠脑室给药甩尾法的镇痛实验结果

表2结果表明，镇痛宁胶囊中剂量组对辐射热所致大鼠尾部疼痛有明显的抑制作用，其给药1 h和2 h后的镇痛作用与吗啡组相当。与空白对照组比较，给药1h时中剂量（0.76 μg/kg）有非常显著性差异（P＜0.01）、高剂量组有显著性差异（P＜0.05）；给药2 h时中剂量组（0.76 μg/kg）有显著性差异（P＜0.05）；在给药3 h时中剂量组（0.76 μg/kg）有非常显著性差异（P＜0.01），结果提示该药中剂量组能延长镇痛时间，其镇痛时间长于吗啡组。

3.3 扭体实验

表3 药物对小鼠冰醋酸致痛作用的影响

表3结果表明，镇痛宁胶囊高、中、低剂量组及桂参组，吗啡组均对醋酸所致的小鼠扭体反应有明显的抑制作用，与空白对照组比较，低剂量组（0.19 g/kg）有显著性差异（P＜0.05），中剂量组（0.38 g/kg）、高剂量组（0.56 g/kg）有非常显著性差异（P＜0.01），结果提示镇痛宁胶囊中剂量组镇痛作用相当于吗啡组。

3.4 大鼠足跖定压实验

表4 镇痛宁胶囊对大鼠足跖定压镇痛实验结果

表4结果表明：镇痛宁胶囊高、中剂量给药组在给药1 h后，对左脚未致炎症足跖压痛有明显抑制作用，与空白对照组比较，左、右脚趾中剂量组（0.76 μg/kg）、高剂量组（1.14 μg/kg）均有非常显著性差异（P＜0.01），结果提示该药对末梢神经疼痛有抑制作用，抑制疼痛作用同于吗啡。

4 讨论

4.1 镇痛宁胶囊经大鼠脑室给药可明显抑制电刺激和辐射热产生的尾部疼痛，说明该药为中枢性镇痛药。

4.2 镇痛宁胶囊小鼠扭体实验和大鼠足跖定压实验说明该药能抑制醋酸扭体反应和致炎症的大鼠足趾压痛，说明该药对末梢神经疼痛也有抑制作用。

两种镇痛动物模型实验结果表明：镇痛宁胶囊对中枢神经疼痛和末梢神经疼痛均有明显的抑制作用；其中、高剂量镇痛作用相当于5倍临床剂量的吗啡组，并且持续时间长于吗啡组。

[1] 李仪奎.中药药理实验方法学[M].上海科学技术出版社,1991:351-356.

[2] 徐叔云,卞如濂,陈修.药理实验方法学[M].3版.北京:人民卫生出版社,2002:883-886.

[3] 陈奇.中药药理研究方法学[M].北京:人民卫生出版社,2000:484.

[4] 刘小河,周平,孙大定,等.温胆片对高架十字迷宫实验小鼠的抗焦虑作用[J].中药新药与临床药理杂志,2012,23(5):519.

[5] 张仲林,臧志和,钟玲,等.六君子汤对脾虚证大鼠胃肠激素影响的实验研究[J].中成药,2010,32(4):659-661.

[6] 陈奇.中药药理实验[M].贵阳:贵州人民出版社,1988:81-84.

[7] 药理学实验编写组.药理学实验[M].成都:成都中医药大学出版社,1983:102.

本文编辑：鲁守琴

Experimental Study on Analgesic Site of Zhentongning Capsules

He Xiao-ying, Ma Ying-chun
(Gansu Institute for Drug Control, Gansu Lanzhou 730000, China)

Objective：To investigate the analgesic site of zhentongning capsules, a traditional Chinese medicine compound preparation, and to provide a basis for clinical medication.Methods：Analgesic test was performed in animal models of central nerve analgesia and peripheral nerve analgesia.Results：In electrical stimulation test on rats after intraventricular administration, the result in low dose group (0.38 μg/kg) showed significant difference (P＜0.05), while those in moderate (0.76 μg/kg) and high (1.14 μg/kg) dose groups showed remarkable difference (P＜0.01), with those in blank control group. The result in moderate dose group 3 h after administration showed significant difference with that in blank control group (P＜0.05). In tail-flick test on rats after intraventricular administration, the result in moderate dose group (0.76 μg/kg) 1 h after administration showed remarkable difference (P＜0.01), while that in high dose group showed significant difference (P＜0.05), with that in blank control group. The result in moderate dose group (0.76 μg/kg) showed significant difference with that in blank control group 2 h (P＜0.05), while showed remarkable difference 3 h (P＜0.01), after administration. In writhing test, the result in low dose group (0.19 g/kg) showed significant difference (P＜0.05), while those in moderate (0.38 g/kg) and high (0.56 g/kg) dose groups showed remarkable difference (P＜0.01), with that in blank control group. However, in plantar pressure test on rats, all the results of left and right foot pads in moderate (0.76 μg/kg) and high (1.14 μg/kg) dose groups showed remarkable differences with those in blank control group (P＜0.01).Conclusion：The analgesic tests in rats by intraventricular administration proved the preparation as a central analgesic drug, of which the analgesic effect was prolonged to 3 h, significantly longer than that of morphine. The writhing test in mice and plantar pressure test in rats showed significantly inhibitory effect of the drug on peripheral nerve pain.

Zhentongning Capsules; Analgesic Effect; Experimental Study

R285.5

A

10.3969/j.issn.2096-3327.2017.05.012

2017 - 04 - 10

何小英，女，职称：主管药师。研究方向：药品检验与药物分析。通讯作者E-mail：1165715940@qq.com