气相色谱法测定珍珠明目滴眼液中的乙醇残留量

冯霞，梁国强，陈伟

（1．南京医科大学附属南京脑科医院药剂科，江苏 南京 210029；2．苏州市吴门医派研究院，江苏 苏州 215003）

气相色谱法测定珍珠明目滴眼液中的乙醇残留量

冯霞1，梁国强2，陈伟2

（1．南京医科大学附属南京脑科医院药剂科，江苏 南京 210029；2．苏州市吴门医派研究院，江苏 苏州 215003）

目的：建立珍珠明目滴眼液中乙醇残留量的测定方法。方法：采用气相色谱法，键合交联聚乙二醇为固定液的毛细管柱，载气为氮气，氢火焰离子化检测器（FID），进样口温度为190℃，检测器温度为250℃，柱温采用程序升温，初始温度为50℃，保持3 min，再以50℃/min的升温速率升温至200℃，保持5 min。载气流速1.5 mL/ min，空气流量450 mL/min；氢气流量45 mL/min，分流比为30∶1。结果：乙醇浓度在21.01～105 050.48 μg/mL内具有良好的线性关系，72批样品中有18批样品的乙醇残留量超过0.5%。结论：本方法准确、可靠，灵敏度高，适用于珍珠明目滴眼液中乙醇残留量的检测。

气相色谱法；氢火焰离子化检测器；珍珠明目滴眼液；乙醇残留

珍珠明目滴眼液主要由珍珠液和冰片配伍制成，是国家食品药品监督管理局批准的二级中药保护品种，收载于《中药成方制剂》第17册，其主要功能为清热泻火、养肝明目，主要用于肝虚火旺引起视力疲劳症和慢性结膜炎，长期使用可以保护视力[1-4]。

珍珠明目滴眼液生产过程中运用到乙醇，而滴眼液属眼科用药，要求比较严谨，对制剂中乙醇残留量需要进行控制。因此，本研究采用气相色谱法鉴定不同厂家珍珠明目滴眼液中的乙醇残留量[5-10]，评价不同生产企业制剂生产工艺，为确保生产工艺的稳定性及有效控制珍珠明目滴眼液的质量提供参考依据。

1 仪器与试药

PE Clarus 680 气相色谱仪（美国PerkinElmer公司），乙醇为色谱纯（美国Sigma-Aldrich公司），无水乙醇标准品（中国药品生物制品检定研究院，批号：1612772），正丁醇标准品（中国药品生物制品检定研究院，批号：160108），水为超纯水（美国millipore公司Q3制备），色谱柱DB-WAX（30 m×0.320 mm，0.50 μm），样品为市场收集的7个厂家的72批样品。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

按照气相色谱法[《中华人民共和国药典》（2015年版）附录Ⅵ E]测定，用键合交联聚乙二醇为固定液的毛细管柱；起始温度为50℃，维持3 min，再以10℃/min的速率升温至80℃，再以50℃/min的速率升温至200℃，维持5 min；进样口温度190℃；氢火焰离子化检测器（FID）温度250℃。载气（N2）流量1.5 mL/min；空气流量450 mL/min；氢气流量45 mL/min，分流比为30∶1。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液制备 精密称取无水乙醇对照品8.429 67 g，置20 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取1 mL，置20 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.2.2 内标溶液制备 精密称取正丁醇4.7951 g，置100 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取1 mL，置100 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为内标溶液。

2.2.3 样品溶液制备 取0.50 g样品加内标溶液0.5 mL，混匀，作为供试品溶液。

3 系统适用性实验

3.1 专属性实验

在“2.1”色谱条件下，对照品溶液中乙醇、正丁醇保留时间均在13 min内，分离良好，说明上述色谱条件适用于本品的含量测定。见图1。

图1 专属性实验HPLC图

3.2 标准曲线线性范围

精密量取上述对照品溶液加内标溶液适量稀释制成每1 mL浓度分别为21.01，52.53，105.05，210.11，420.22，1050.55，2101.10和10505.48 μg浓度的溶液，各取1 μL，注入气相色谱仪，记录色谱图，以各自的峰面积（Y）对其浓度（X）进行线性回归，回归方程为：

Y＝0.003X－0.093（R2＝0.999），

结果表明在21.01～105 050.48 μg/mL范围内乙醇色谱峰面积与其浓度成良好线性关系。

3.3 精密度

取高、中、低浓度对照品溶液，重复进样5次，计算待测组分乙醇峰面积与内标物正丁醇峰面积之比的相对标准偏差（RSD）分别为2.55 %，1.22%和3.88%，表明该方法精密度良好。

3.4 重复性

取同一批号的珍珠明目滴眼液（批号：20120119）按“2.2”项下方法制备供试品溶液6份，照“2.1”项下色谱条件进样，内标法计算乙醇含量平均值为0.22%，RSD为0.65%，表明该方法重复性良好。

3.5 稳定性

取同一批号的珍珠明目滴眼液（批号：20120119）按“2.2”项下方法制备供试品溶液，照“2.1”项下色谱条件，分别于配制后0，2，4，8，10，20 h后进样，计算待测组分乙醇峰面积与内标物正丁醇峰面积之比的RSD为2.84%，表明20 h内供试品溶液基本稳定。

3.6 加样回收率

取已知乙醇残留量的样品（批号：20120119）6份，分别加入1 050.55 μg/mL的标准溶液，按“2.1”项下色谱条件，以内标法计算回收率平均值为96.65%，RSD为3.70 %。见表1。

4 样品测定

取“2.2.3”项下样品溶液1 μL注入气相色谱仪，测定。按“2.2”项下方法制备供试品溶液6份，按“2.1”项下色谱条件进样测定迷迭香酸的色谱峰面积，内标法计算乙醇含量，测定结果见表2。

表1 乙醇加样回收率

表2 72批样品乙醇残留量

（续表）

4 结果与讨论

《中华人民共和国药典》（2015年版）二部附录Ⅷ P中规定，乙醇为第三类溶剂残留，不得超过0.5%。针对现行法定标准未设置滴眼液中乙醇残留量的检查项，建立了一种灵敏的气相色谱测定乙醇残留量的方法，该方法能将珍珠明目滴眼液中的乙醇有效分离，具有较高的灵敏度和准确性，可用于珍珠明目滴眼液的有关物质检查，对滴眼液中的第三类溶剂残留进行控制。依据上述方法检验，72批样品中有20批样品的乙醇残留量超过0.5%。从72批珍珠明目滴眼液样品乙醇残留量分布情况图中可以看出不同厂家生产的珍珠明目滴眼液样品乙醇残留量变动幅度差别较大。建议增加珍珠明目滴眼液的乙醇残留量的检查项，以进一步规范珍珠明目滴眼液的生产。

[l] 国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准:中药成方制剂[S].第17册.北京:人民卫生出版社,1998.

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本文编辑：鲁守琴

Determination of Residual Ethanol Content in Zhenzhu Mingmu Eye Drops by Gas Chromatography

Feng Xia1, Liang Guo-qiang2, Chen Wei2
(1. Department of Pharmacy, Nanjing Brain Hospital Affiliated to Nanjing Medical University, Jiangsu Nanjing 210029, China; 2. Suzhou Institute of Wumen Chinese Medicine, Jiangsu Suzhou 215003, China)

Objective：To establish a method for determination of residual ethanol content in zhenzhu mingmu eye drops.Methods：Gas chromatography (GC) was adopted by using a capillary column (DB-WAX) with FID detector, serving hehelium as carrier gas. The temperature of injection port was 190℃ and that of detector was 250℃. Programmed rising of column temperature was adopted. The initial column temperature was 50℃, which was maintained for 3 mins and raised to 200℃ at a rate of 50℃/min, then maintained for 5 mins. The flow rate of carrier gas was 1.5 mL/min, while the air flow was 450 mL/min, the hydrogen flow was 45 mL/min, and the split ratio was 30∶1.Results：The calibration curve showed a good linearity at a ethanol concentration range of 21.01～105 050. 48 μg/mL. The residual ethanol contents in 18 of 72 batches of samples were more than 0.5%.Conclusion：The method is accurate, reliable and sensitive for the determination of residual ethanol content in zhenzhu mingmu eye drops.

Gas Chromatography; Hydrogen Flame Ionization Detector; Zhenzhu Mingmu Eye Drops; Residual Ethanol Content

R286.0

A

10.3969/j.issn.2096-3327.2017.05.014

2017 - 04 - 01

冯霞，女，主管中药师。研究方向：中药学、中药药理。E-mail：1565661221@qq.com

陈伟，男，硕士，主管中药师。研究方向：中药学。E-mail：540584399@qq.com