大肠癌组织中Galectin-3与MMP-2的表达及临床意义

2017-08-09季伟涛王晓磊展鹏远

中国疗养医学 2017年8期

季伟涛王晓磊展鹏远

季伟涛王晓磊展鹏远

目的探讨大肠癌组织中Galectin-3与MMP-2的表达水平及临床意义。方法收集60例结肠癌组织标本及28例癌旁正常肠黏膜组织标本，同时收集大肠腺瘤标本31例。采用免疫组化(SP)法测定标本中的Galectin-3、MMP-2的表达水平，分析两组的相关性。结果大肠癌、大肠腺瘤中的Galectin-3、MMP-2阳性表达水平明显高于正常大肠黏膜(P＜0.05)，大肠癌组织Galectin-3、MMP-2阳性表达水平明显高于大肠腺瘤(P＜0.05)。低分化、有淋巴结转移、浸润程度达肌层或浆膜层的大肠癌组织表达水平明显高于中高分化、无淋巴结转移、浸润未超肌层者(P＜0.05)。两者呈正相关。结论大肠癌组织中存在MMP-2、Galectin-3表达升高，两者高表达与大肠癌的浸润、转移、分化有关，故MMP-2、Galectin-3的测定可能为判断大肠癌的进展有一定的临床意义。

大肠癌；Galectin-3；MMP-2

大肠癌是目前常见的一种恶性肿瘤。浸润和转移是其重要特性之一，也是某些实体肿瘤不能治愈的原因。基质金属蛋白酶(MMP-2)对细胞外基质有降解作用，这一作用利于肿瘤血管的形成，因此其参与了肿瘤的浸润和转移过程[1-2]。β-半乳糖苷结合蛋白-3(Galectins-3)属凝集素家族的重要成员之一，它可作为MMP-2的底物，故被认为在肿瘤浸润和转移中同样发挥着重要作用[3]。本研究通过对大肠癌组织中的Galectin-3和MMP-2表达水平进行测定，探讨两者在大肠癌发生和进展中的作用。

1 材料和方法

1.1 材料收集2015-01—2016-11在河南大学第一附属医院外科行手术切除术治疗的患者60例，均经手术病理确诊。共收集60例大肠癌标本及癌旁正常黏膜组织28例作为对照，同时选择同期行外科手术切除的大肠腺瘤标本31例。排除标准：术前行放化疗治疗者；其他部位的恶性肿瘤者；伴有免疫性疾病者。60例患者中男31例，女29例，年龄30～74岁，中位年龄54.8岁；原发病灶部位：结肠23例，直肠37例；分化程度：低分化16例，中高分化44例；浸润程度：达肌层或浆膜层43例，未超肌层17例；伴有淋巴结及远处转移34例。

1.2 方法采用免疫组化(SP)法测定标本中的Galectin-3、MMP-2的表达水平，兔抗人Galectin-3多克隆抗体、兔抗人MMP-2多克隆抗体均由上海领成生物技术有限公司提供；免疫组化MaxVision试剂盒羊抗鼠/兔由上海将来实业股份有限公司提供。取3μm石蜡切片，脱蜡至水，以3%过氧化氢室温孵育10 min，消除内源性过氧化物酶活性，蒸馏水冲洗，磷酸缓冲盐溶液(PBS)浸泡5 min，微波炉加热柠檬酸钠缓冲液(0.01 mmol/L)至沸腾后，取标本切片置入其中，抗原热修复15 min，室温下静置4 min，磷酸缓冲盐溶液冲洗5 min，共冲洗3次。滴加Ⅰ抗50μL(Galectin-3 1∶80工作液，MMP-2 1∶80工作液)，置于4℃冰箱过夜。磷酸缓冲盐溶液冲洗5 min，共冲洗3次。滴加Ⅱ抗(快捷型酶标羊抗鼠、兔IgG聚合物)，室温孵育15 min。磷酸缓冲盐溶液冲洗5 min，共冲洗3次。DAB显色5 min，终止显色，蒸馏水冲洗。苏木素复染，透明、封片，于高倍镜下观察。

1.3 SP结果评定Galectin-3、MMP-2蛋白主要表达于胞质，胞质内可观察到棕黄色或棕褐色颗粒，可判断为阳性细胞。以染色强度和阳性细胞所占百分比来评定。在400倍视野下，每张切片上任选4个视野进行观察，根据切片中平均阳性比及染色程度进行计分，最低0分，最高3分。无着色为0分，淡黄色为1分，黄或深黄色为2分，褐或棕褐色为3分；无阳性细胞0分，阳性细胞比低于25%为1分，25%～75%之间为2分，超75%为3分。将两项积分相加后总分进行分级，0分为阴性(－)，1～2分为弱阳性(＋)，3～4分为(＋＋)，5～6分为(＋＋＋)。

1.4 统计学方法采用SPSS 21.0统计学软件进行数据分析，采用秩和检验和Spearman等级相关分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 大肠癌、大肠腺瘤、正常大肠黏膜中的Galectin-3、MMP-2表达情况(表1)大肠癌、大肠腺瘤中的Galectin-3、MMP-2阳性表达水平明显高于正常大肠黏膜(P＜0.05)，大肠癌组织Galectin-3、MMP-2阳性表达水平明显高于大肠腺瘤(P＜0.05)。

2.2 不同临床特征结肠癌组织的Galectin-3、MMP-2阳性表达水平情况(表2～3)Galectin-3、MMP-2阳性表达水平在性别、年龄、肿瘤位置上差异无统计学意义(P＞0.05)，低分化、有淋巴结转移、浸润程度达肌层或浆膜层的大肠癌组织表达水平明显高于中高分化、无淋巴结转移、浸润未超肌层者(P＜0.05)。

表1 大肠癌、大肠腺瘤、正常大肠黏膜中的Ga lectin-3、MMP-2表达情况(n)

表2 不同临床特征结肠癌组织的Galectin-3阳性表达水平情况(n)

表3 不同临床特征结肠癌组织的MMP-2阳性表达水平情况(n)

2.3 大肠癌组织中Galectin-3、MMP-2表达的关系Pearman等级相关分析显示，大肠癌组织中Galectin-3表达与MMP-2表达呈正相关(r＝0.723，P＝0.001，表4)。

表4 大肠癌组织中Galectin-3、MMP-2表达的关系(n)

3 讨论

浸润和转移是导致恶性肿瘤患者死亡的主要原因。肿瘤组织及其间质基底膜可防御肿瘤细胞浸润和扩散，基底膜的完整性被破坏为恶性肿瘤侵袭创造了条件[4]。正常情况下，基底膜主要成分为Ⅳ型胶原，而MMP-2是MMPs家族的重要成员，可通过降解Ⅳ、Ⅴ型胶原和层黏连蛋白来破坏基底膜的完整性[5]。武雪亮等[6]研究证实，MMP-2可引起患者免疫反应，促进肿瘤血管形成，为肿瘤的转移提供了条件，故MMP-2参与了恶性肿瘤的侵袭和转移过程。有研究表明，MMP-2的表达水平与肺癌、乳腺癌等恶性肿瘤远处转移、分化程度、组织学分型等密切相关[7-8]，本研究结果与之相符，提示MMP-2的高表达在大肠癌的发生和进展中起着重要作用，且与癌细胞的浸润和转移呈正相关。

Galectin-3作为MMP-2的底物，现有研究表明，Galectin-3可能参与了肿瘤的浸润和转移，另外Galectin-3具有糖亲和性、参与炎症细胞的游走及延缓细胞凋亡等作用[9-10]，故肿瘤组织中Galectin-3高表达可促进细胞聚集和提高内皮细胞的亲和性，这为肿瘤转移提供了可能。

本研究结果显示，大肠癌组织中Galectin-3表达明显高于正常大肠黏膜和大肠腺瘤，且与肿瘤的分化程度、浸润深度、是否转移有关，其表达水平与MMP-2呈正相关，说明随着大肠癌病情的进展，Galectin-3随之增强，进而影响大肠癌侵袭能力，促进了肿瘤的分化和淋巴结转移，使患者的预后不良。

综上所述，大肠癌组织中存在MMP-2、Galectin-3表达升高，两者高表达与大肠癌的浸润、转移、分化有关，故MMP-2、Galectin-3的测定可能为判断大肠癌的进展有一定的临床意义。

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