正骨百健散质量标准的研究

毕 娜 詹立晶 杨思广

（吉林市食品药品检验所，吉林吉林132000）

正骨百健散质量标准的研究

毕 娜1詹立晶2杨思广3

（吉林市食品药品检验所，吉林吉林132000）

目的就正骨百健散的原材料检验方法及注意事项进行分析。方法通过显微鉴别、薄层色谱分别对白芷、红花、五加皮、山茱萸、牡蛎等中药进行鉴别，鉴别的过程进行系统剖析，并对鉴别过程中的关键环节和重点步骤做归纳和总结。结果收载红花、龙血竭、牡蛎的显微特征作为显微鉴别项。白术、山茱萸薄层色谱阴性有干扰；薄层鉴别只收载了三七、龙血竭。结论该方法简便易行，准确可靠，可用于正骨百健散的质量控制。

正骨百健散；显微鉴别；薄层色谱；三七；龙血竭

正骨百健散由白芷、红花、五加皮、山茱萸、牡蛎等组成。主药五加皮、牡蛎，用于强筋壮骨；臣药再辅以三七、龙血竭生血、养血，改善肢体血液循环；再辅以佐药百合、白术用于安神益气、健脾开胃，白芷温散结气，以山茱萸促骨痂生长，预防延迟愈合，此方多用于骨折中晚期，具有强筋壮骨之功效。为有效地控制其质量，对其十味组分进行显微、薄层色谱法定性鉴别，以确保其内在质量。

1 实验材料

1.1 样品正骨百健散批号为：20150721-1、20150721-2、20150721-3。

1.2 对照品白芷，批号：120945-201309；白术，批号：120925-201310；百合，批号：121100-200402；三七，批号：120941-201409；龙血竭，批号：121252-201303；三七皂苷R1，批号：0745-200109；人参皂苷Rb1，批号：110704-201424；人参皂苷Rg1，批号：110703-200726；熊果酸，批号：110742-200314；以上对照药材和对照品均由中国食品药品检定研究院提供。

1.3 薄层板硅胶G预制板、硅胶GF254预制板由青岛海洋化工厂分厂提供。薄层色谱所用试剂均为分析纯。

1.4 原料的来源

1.4.1 白芷系为伞形科植物白芷或杭白芷的干燥根。夏、秋间叶黄时采挖，除去须根和泥沙，晒干或低温干燥[1]105。

1.4.2 红花系为菊科植物红花Carthamus tinctorius L.的干燥花。夏季花由黄变红时采摘，阴干或晒干[1]151。主产于河南、安徽、四川、江苏和浙江等省。其他各地也多有产，新疆红花产量较大，多向内地推销。红花含红花甙、新红花甙和红花醌甙、二十九烷、β-谷甾醇、棕榈酸、肉豆蔻酸等成分[2]。

1.4.3 三七为五加科植物三七Panax notoginseng（Burk.）F.H.Chen的干燥根和根茎[1]11。

1.4.4 续断系为川续断科植物川续断Dipsacus asper Wall.exHenry的干燥根[1]329。

1.4.2 延胡索为罂粟科植物延胡索Corydalis yanhusuo W.T.Wang的干燥块茎[1]139。含近20种生物碱：D-紫堇碱（即延胡索甲素）、DL-四氢巴马亭（即延胡索乙素）、后鸦片碱（即延胡索丙素）、L-四氢黄连碱（即延胡索丁素）等[3]。

2 方法与结果

根据该品种的处方药味及制法，中药均以生药原粉入药。对处方中主药，臣药，佐药拟依次进行显微、薄层色谱法定性鉴别，列入【鉴别】（1）、（2）、（3），以确保该药的内在质量。

2.1 五加皮的鉴别实验

2.1.1 显微鉴别草酸钙簇晶直径为8～64 μm，有时候含晶细胞连接，簇晶排列成行。木栓细胞为长方形或多角形，细胞壁薄；老根皮的木栓细胞有时候壁不均匀增厚，有数量不太多的纹孔。分泌道的碎片含有无色或淡黄色的分泌物。淀粉粒多，单粒形状为多角形或类球形，直径2～8 μm；复粒是由2分粒至数十分粒组成。其中“树脂道碎片含黄色的分泌物，草酸钙簇晶”，特征和三七一致，故在正文中没有收载其显微鉴别项。

2.2 牡蛎鉴别实验

2.2.1 显微鉴别本品为粉末灰白色。珍珠层呈不规则的碎块，较大碎块呈条状或片状，表面隐约可见细小条纹。棱柱层少见，断面观棱柱状，断端平截，长29～130 μm，宽10～36 μm，有的一端渐尖，亦可见数个并列成排；表面观类多角形、方形或三角形。其中“不规则碎块，表面隐约可见细小条纹，断端平截”，特征明显，且无干扰，故在正文中未收载其显微鉴别项。

2.3 三七鉴别实验2.3.1显微鉴别淀粉粒较多，单粒圆形、半圆形或圆多角形，直径4～30 μm；复粒由2～10余分粒组成。树脂道碎片含有黄色分泌物。梯纹导管、网纹导管及螺纹导管直径15～55 μm。草酸钙簇晶不多见，直径50～80 μm。其中“树脂道碎片含有黄色分泌物，草酸钙簇晶”，特征同五加皮，故在正文中未收载其显微鉴别项。

2.3.2 薄层色谱供试品溶液的制备：取本品10 g，加甲醇50 ml，超声处理1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水30 ml使其溶解，用水饱和的正丁醇提取3次，每次20 ml，合并正丁醇液，用1%氢氧化钠溶液洗涤2次，每次15 ml，弃去1%氢氧化钠溶液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20 ml，弃去水洗液层，将正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1 ml使其溶解，作为供试品溶液。

对照药材溶液的制备：另取三七对照药材0.3 g，加甲醇30 ml，同法制成对照药材溶液。

对照品溶液的制备：再取人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1及三七皂苷R1对照品，加甲醇制成每1 ml各含1 mg的混合溶液，作为对照品溶液。

阴性对照溶液的制备：取阴性对照（不含三七的样品），照供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。

点样量：上述四种溶液各5 μl；薄层板：硅胶G板；展开剂：氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水（15∶40∶22∶10）10℃以下放置的下层溶液；显色：喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光和紫外光灯（365 nm）下检视。

供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点和荧光斑点。

三批样品按上述方法检测，结果重现性良好，如图1。

图1 三七薄层鉴别图像

2.4 龙血竭鉴别实验

2.4.1 显微鉴别不规则块片血红色，周围液体呈鲜黄色，渐变红色。其中“不规则块片血红色，周围液体呈鲜黄色，渐变红色”，特征比较明显，且无其它干扰，在正文中收载其显微鉴别项。

2.4.2 薄层色谱供试品溶液的制备：本品5 g，加乙醚20 ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。

对照药材溶液的制备：取龙血竭对照药材0.3 g，同法制成对照药材溶液。

阴性对照溶液的制备：取阴性对照（不含龙血竭的样品），同供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。

点样量：上述三种溶液各10 μl；薄层板：硅胶G；展开剂：环己烷-乙酸乙酯（5∶1）；显色：置紫外光灯（365 nm）下检视。

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显示相同颜色的荧光斑点。

三批样品按上述方法检测，结果重现性良好，如图2。

图2 龙血竭薄层鉴别图像

2.5 百合鉴别实验

2.5.1 显微鉴别淀粉粒单粒，类圆形，长圆形；表皮细胞垂周壁薄波状弯曲；气孔副卫细胞为3～4个。百合经过粉碎同其它药粉混合后，其显微特征被破坏，几乎无法观察，故在正文中未收载其显微鉴别项。

2.6 白术鉴别实验

2.6.1 显微鉴别草酸钙针晶细小，长10～32 μm，存在于薄壁细胞中，少数针晶直径到4 μm。纤维黄色，大多成束，长梭形，直径约到40 μm，壁甚厚，木化，孔沟明显。石细胞为淡黄色，类圆形、多角形、长方形或少数纺锤形，直径为37～64 μm。薄壁细胞含有菊糖，表面显放射状纹理。导管分子短小，为网纹导管及具缘纹孔导管，直径到48 μm。白术经粉碎同其它药粉混合后，其显微特征被破坏，几乎无法观察，故在正文中未收载其显微鉴别项。

2.6.2 薄层色谱供试品溶液的制备：取本品10 g，加石油醚（30～60℃）20 ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1 ml使溶解，作为供试品溶液。

对照药材溶液的制备：另取白术对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。

阴性对照溶液的制备：取阴性对照（不含白术的样品），同供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。

点样量：上述三种溶液各5 μl；薄层板：硅胶G；展开剂：石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（19∶1）；显色：喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热直至斑点显色清晰。

供试品色谱和阴性对照色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性有干扰。故在正文中未收载其薄层鉴别项。

三批样品按上述方法检测，结果重现性良好，如图3。

图3 白术薄层鉴别图像

2.7 白芷鉴别实验

2.7.1 显微鉴别淀粉粒较多，单粒圆球形、多角形、椭圆形或盔帽形，直径为3～25 μm，脐点点状、裂缝状、十字状、三叉状、星状或人字状；复粒大多由2～12分粒组成。网纹导管、螺纹导管直径10～85 μm。木栓细胞形状为多角形或类长方形，淡黄棕色。油管多已破碎，含淡黄棕色分泌物。白芷经粉碎同其它药粉混合后，其显微特征被破坏，几乎无法观察，故在正文中未收载其显微鉴别项。

2.8 山茱萸鉴别实验

2.8.1 显微鉴别果皮表皮细胞呈橙黄色，表面观察为多角形或类长方形，直径为16～30 μm，垂周壁连珠状增厚，外平周壁颗粒状角质增厚，胞腔含淡橙黄色物。中果皮细胞橙棕色，多皱缩。草酸钙簇晶数量少数，直径12～32 μm。石细胞形状为类方形、卵圆形或长方形，纹孔明显，胞腔大。山茱萸经粉碎同其它药粉混合后，其显微特征被破坏，几乎无法观察，故在正文中未收载其显微鉴别项。

2.8.2 熊果酸供试品溶液的制备：取本品10 g，加乙酸乙酯20 ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。

对照品溶液的制备：另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每1 ml各含1 mg的溶液，作为对照品溶液。

阴性对照溶液的制备：取阴性对照（不含山茱萸的样品），同供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。

点样量：上述三种溶液各5 μl；薄层板：硅胶G；展开剂：甲苯-甲酸-乙酸乙酯（20∶0.5∶4）；显色：喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光和紫外光灯（365 nm）下检视。

供试品色谱和阴性对照色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点和荧光斑点。阴性有干扰。故在正文中未收载其薄层鉴别项。

三批样品按上述方法检测，结果重现性良好，如图4。

图4 熊果酸薄层鉴别图像

2.9 红花鉴别实验

2.9.1 显微鉴别花冠、花丝、柱头碎片较多见，有长管状分泌细胞经常位于导管旁，直径约至66 μm，含黄棕色至红棕色分泌物。花冠裂片顶端表皮细胞外壁突起呈现短绒毛状。柱头和花柱上的部表皮细胞分化成圆锥形单细胞毛，先端尖或稍钝。花粉粒类圆形、椭圆形或橄榄形，直径约至60 μm，具有3个萌发孔，外壁有齿状突起。草酸钙方晶存在于薄壁细胞中，直径为2～6 μm。其中“分泌细胞直径约至66 μm，含黄棕色至红棕色分泌物。花粉粒类圆形、椭圆形或橄榄形，直径约至60 μm，具有3个萌发孔，外壁有齿状突起”特征较为明显，且无其它干扰，在正文中收载其显微鉴别项。

2.10 续断鉴别实验

2.1 0.1显微鉴别草酸钙簇晶甚多，直径15～50 μm，散在或存在于皱缩的薄壁细胞中，有时数个排列成紧密的条状。纺锤形薄壁细胞壁稍厚，有斜向交错的细纹理。具缘纹孔导管和网纹导管直径约至72(90)μm。木栓细胞淡棕色，表面观类长方形、类方形、多角形或长多角形，壁薄。其显微特征“草酸钙簇晶”同三七和五加皮；“纺锤形薄壁细胞壁稍厚，有斜向交错的细纹理”经粉碎同其它药粉混合后，其显微特征被破坏，几乎无法观察，故在正文中未收载其显微鉴别项。

3 讨论

3.1 显微鉴别收载红花、龙血竭、牡蛎的显微特征作为显微鉴别项，见图5。

图5 红花、龙血竭、牡蛎（日光）牡蛎（偏光）显微鉴别图像

分泌细胞直径约至66 μm，含黄棕色至红棕色分泌物。花粉粒类圆形、椭圆形或橄榄形，直径约至60 μm，具3个萌发孔，外壁有齿状突起（红花）。不规则块片血红色，周围液体显鲜黄色，渐变红色（龙血竭）。不规则碎块，表面隐约可见细小条纹，断端平截（牡蛎）。

3.2 薄层色谱五加皮、百合、白术、等阴性有干扰；白芷、红花样品中无斑点；牡蛎因无对照药材，未做薄层鉴别。薄层鉴别只收载了三七、龙血竭。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京:中国医药科技出版社，2015:105.

[2]中国科学医学院药物研究所.中药志（第五册）[M].北京：人民卫生出版社，1994：20.

[3]张贵君.常用中药鉴定大全[M].哈尔滨：黑龙江科学技术出版社，1993：351.

Study on Quality Criteria of Zhenggu Baijian Powder

BI Na,ZHAN Lijing,YANG Siguang
(Jilin City Institute of Food and Drug Administration,Jilin Province,Jilin 132000,China)

Objective Toanalyze the raw materials testing methods and precautions of Zhenggu Baijian powder.Methods TLD method was established for the identifications of Angelica,Safflower,Wu Chia Pee,Dogwood,Oyster,Atractylodes,Lily,Pseudo-Ginseng, Sanguis Draconis and Himalayan Teasel Root though microscopic identification.The paper made systematic analysis of the identification process and summarized the key links and key steps in the identification process.Results The microscopic features of Safflower, Sanguis Draconis and Oyster were taken as the microscopic identifications.The TLC results of Atractylodes and Dogwood are negative with interference.Therefore,the TLC results only include Pseudo-Ginseng and Sanguis Draconis.Conclusion The method proposed in this paper is simple,accurate and reliable that makes it perfect for the quality control of Zhenggu Baijian powder.

Zhenggu Baijian powder;microscopic identification;TLC;Pseudo-Ginseng;Sanguis Draconis

10.3969/j.issn.1672-2779.2017.14.063

1672-2779（2017）-14-0142-04

：杨杰本文校对：李玉冬

2017-04-27）