杏花药材的鉴别研究

闫伟伟，罗慧玉，陈军娟，韩慧琴，牛慧娟

·药学研究·

杏花药材的鉴别研究

闫伟伟1，罗慧玉1，陈军娟2，韩慧琴1，牛慧娟3

目的 建立杏花药材鉴别方法，为其质量标准制定提供科学依据。方法 对杏花药材进行性状、粉末显微鉴别，同时采用高效液相色谱法(HPLC)建立特征图谱鉴别方法。结果 性状、粉末显微鉴别专属性强。以芦丁为参照峰，建立了由11个特征峰组成的杏花药材HPLC特征图谱。结论 所用方法准确、稳定、可行，可用于杏花药材的鉴别研究。

杏花；性状；显微鉴别；特征图谱；高效液相色谱法；芦丁

0 引言

杏花为蔷薇科植物杏PrunusarmeniacaL.或山杏PrunusarmeniacaL.var.ansuMaxim.的干燥花，其味苦、性温，3～4月采花，阴干备用。杏花具有丰富的药用和食疗价值，文献记载杏花有活血补虚的功效。现代研究证明，其含有杏花精油[1]、苦杏仁苷[2]、植物激素[3]及总黄酮[4]等多种物质。近年来杏花以花茶、药材等不同形式被广泛使用，而其质量控制方法却鲜有研究，不能有效控制此药材的质量。本实验立足于杏花药材真伪的鉴别，以性状、粉末显微鉴别与高效液相(HPLC)特征图谱为技术手段，为其质量控制提供依据。

1 仪器与试药

岛津LC 2010A HT高效液相色谱仪(岛津公司)，SPD-M10A VP二极管阵列检测器(岛津公司)，LC solution色谱管理系统，AS10200A超声波清洗器(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)，Sartorius CPA225D分析天平，BX53型显微镜(奥林巴斯公司)，Milli-Q Integral 纯水/超纯水机(美国Millipore公司)。

芦丁对照品(批号：100080-201408，含量：90.2%)，阿魏酸对照品(批号：110773-201012，含量：99.6%)，异槲皮苷对照品(批号：111809-201403，含量：92.9%)均购自中国食品药品检定研究院；甲醇、乙腈(色谱纯)，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。杏花药材10批，由河北省药品检验研究院段吉平老师鉴定。鉴定结果见表1。

表1 杏花样品来源

2 鉴别

2.1 性状的鉴别 杏花呈类球形，直径0.2～0.8 cm，花梗极短或无梗。萼筒钟形，基部疏被短柔毛，棕色。萼片5，卵圆形或椭圆形；花瓣多皱缩，展平后5枚离生，卵形至倒卵形，白色或粉红。雄蕊多数，短于花瓣。子房被柔毛。气清香，味苦。山杏花较小，直径0.1～0.5 cm，多为粉红色。雄蕊多数，与花瓣近等长或稍长。见图1。

图1 杏花、山杏花药材图注：A.山杏花，B.杏花

2.2 粉末显微鉴别 取药材粉末，过四号筛，以水合氯醛制片观察，结果显示：粉末浅棕色。花粉粒无色、淡黄色或棕黄色，类圆形，极面观呈类圆三角形，直径10～50 μm，3孔沟。非腺毛较少，无色或黄棕色，单细胞，平直或稍弯曲，长短不一，长50～250 μm。草酸钙簇晶存在于薄壁细胞中或单个散在，直径10～50 μm。萼片表皮细胞表面观类方形、长方形或不规则多角形，垂周壁略呈连珠状增厚。花粉囊内壁细胞多见，具细密网状增厚纹理。见图2。

图2 杏花粉末显微图注：A.花粉囊内壁细胞，B.花粉粒细胞，C.非腺毛，D.草酸钙簇晶，E.萼片细胞

3 高效液相特征图谱研究

3.1 色谱条件 色谱柱为YMC-Pack ODS-A C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液(125∶105∶770)；检测波长：328 nm；体积流量：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。

3.2 参照物溶液的制备 取芦丁、阿魏酸与异槲皮苷对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成每1 mL各含0.15 mg、7 μg、7 μg的混合溶液，即得。

3.3 供试品溶液的制备 取杏花粉末(过四号筛)约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇20 mL，称定重量，超声处理(功率250 W，频率50 Hz)20 min，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3.4 方法学考察

3.4.1 精密度试验 精密称取编号8(陕西旬邑)的杏花样品0.5 g，按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.3.1”项下色谱条件进行测定，重复进样6次，测定峰面积。各特征峰相对保留时间的RSD为0.15%～0.57%，相对峰面积的RSD为0.20%～0.99%，结果表明精密度良好。

3.4.2 稳定性试验 精密称取编号8(陕西旬邑)的杏花样品0.5 g，按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.3.1”项下色谱条件进行测定，分别在0、2、4、8、12、24、48 h进样，测定峰面积。各特征峰相对保留时间的RSD为0.18%～0.62%，相对峰面积的RSD为0.25%～0.82%，结果表明供试品溶液在常温48 h内稳定。

3.4.3 重复性试验 精密称取编号8(陕西旬邑)的杏花样品0.5 g，按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.3.1”项下条件色谱条件进行进样，测定峰面积。各特征峰相对保留时间的RSD为0.14%～0.70%，相对峰面积的RSD为0.24%～0.92%，结果表明该方法重复性良好。

3.5 耐用性试验 取三批杏花样品进行耐用性试验，分别采用不同品牌的色谱柱(YMC-Pack ODS-A C18柱、热电BOS HYPERSIL C18柱、Waters SunFire C18柱，规格均为250 mm×4.6 mm，5 μm)测定，相对保留时间重现性较好；分别采用不同品牌的液相色谱仪(岛津LC 2010A HT、Waters e 2695-2998)测定，相对保留时间重现性较好。表明仪器、色谱柱耐用性良好。

3.6 特征图谱的建立与结果判定 按“3.1”项条件同时测定参照物溶液与10批样品的供试品溶液，记录色谱图，得杏花药材特征图谱(见图3)。通过考察不同产地样品的特征图谱，发现共呈现11个共有特征峰，依次标为1～11号，虽然各特征峰相对峰面积有一定差异，但其特征图谱基本一致。对比参照物溶液色谱图(见图4)，其中4号为阿魏酸峰，6号为芦丁峰，7号为异槲皮苷峰。由于芦丁峰较其他峰出峰时间适中，含量较高，且与其他成分分离良好，故将其作为参照峰，确定其他特征峰相对保留时间的规定值。规定值为：0.36(峰1)，0.39(峰2)，0.56(峰3),0.70(峰5)，1.37(峰8),1.84(峰9),2.17(峰10)，2.51(峰11)。其中4、6、7号峰应分别与参照物溶液中阿魏酸、芦丁、异槲皮苷峰保留时间一致，其余各特征峰的相对保留时间在规定值的±5%之内。

图3 杏花药材特征图谱

图4 参照物溶液色谱图

4 讨论

野外调查发现,杏花为植物杏或山杏的花，二者在性状方面略有差异：杏花个体较山杏花大；杏花颜色多以白色、浅粉红色为主，山杏花较杏花颜色深且鲜艳，以粉红色为主；杏花雄蕊短于花瓣；山杏花雄蕊长于花瓣。观察到的二者粉末显微特征基本相似且鉴别特征明显。

对样品溶液在200～400 nm进行光谱扫描，结果表明，在328 nm波长处各色谱峰能实现基本分离，且峰信号较强，故选择328 nm作为检测波长。实验考察了甲醇-0.1%磷酸(35∶65)、乙腈-0.1%磷酸(15∶85)、甲醇-乙腈-0.1%磷酸(115∶115∶770)、甲醇-乙腈-0.1%磷酸(125∶105∶770)等流动相系统，结果显示，当采用甲醇-乙腈-0.1%磷酸(125∶105∶770)时，特征图谱中各色谱峰能完全分离，且基线平稳，峰形良好。

实验考察了超声提取、浸泡过夜及回流提取等不同的提取方式，结果表明,3种方式特征图谱基本一致，考虑到超声提取操作简便易行，省时省力，故选择超声方式提取。同时对不同的提取时间进行考察，确定超声时间超过20 min时，各峰峰面积不再有变化，故选择超声20 min。

特征图谱利用一组特征峰从整体上对中药实现质量控制，强调其特征性成分而非全部，近年来在中药材中广为应用[5-7]。本研究对药材的性状、粉末显微及特征图谱等鉴别方法进行研究，为其质量控制提供了科学有效的依据。

[1] 耿明江,董丽,尚校军,等.正交实验法优选杏花精油的提取工艺[J].时珍国医国药,2008,19(2):464-465.

[2] 张红城,尹策,董捷,等.杏花花粉中苦杏仁苷的提取工艺的研究[J].食品科学,2007,28(7):236-241.

[3] 杨途熙,魏安智,郑元,等.高效液相色谱法同时分离测定仁用杏花芽中8种植物激素[J].分析化学,2007,35(9):1359-1361.

[4] 于佳佳,克热木·伊力,李焕荣.微波辅助提取杏花总黄酮工艺的研究[J].新疆农业科学,2010,47(3):577-582.

[5] 姚建标,金辉辉,何厚洪,等.西红花特征图谱研究及真伪鉴别[J].中草药,2015,46(9):1378-1380.

[6] 颜美秋,陈素红,吕圭源,等.铁皮石斛HPLC特征图谱研究[J].中国中药杂志,2013,38(4):516-519.

[7] 张敏,董慧.五味子药材特征图谱质量标准研究[J].中国药业,2014,23(1):25-26.

Research on identification of apricot blossom

YAN Wei-wei1，LUO Hui-yu1，CHEN Jun-juan2，HAN Hui-qin1，NIU Hui-juan3

(1.Zhangjiakou Food and Drug Inspection Center，Zhangjiakou 075000，China;2.Zhangjiakou Vocational and Technical College，Zhangjiakou 075000，China;3.Xuanhua Iron and Steel Company Worker Hospital，Zhangjiakou 075100，China)

Objective To establish a method for identification of apricot blossom,and to provide scientific basis for its quality standard formulation.Methods The characters and powder of apricot flower were microscopically identified,and the characteristic chromatogram identification method was established by HPLC.Results The microscopic identification of character and powder was specific.The HPLC characteristic chromatogram of apricot blossom was constructed with 11 common characteristic chromatogaphic peaks,including rutin as a reference peak.Conclusion The method is accurate,stable and feasible.It can be used to identify apricot blossom.

Apricot blossom；Character；Microscopic identification；Characteristic chromatogram；HPLC；Rutin

2016-11-16

1.张家口市食品药品检验中心，河北 张家口 075000；

2.张家口职业技术学院，河北 张家口 075000；3.宣化钢铁公司职工医院，河北 张家口 075100

10.14053/j.cnki.ppcr.201707023