改良保存液对兔标本固定效果的观察*

祖文轩 蒋邦红 杨俊松 刘 山 郭梁影 王玉华 赵 晨

(1.蚌埠医学院解剖教研室，安徽 蚌埠 233000；2.蚌埠医学院第一附属医院整形外科，安徽 蚌埠 233000；3.蚌埠医学院制药工程系，安徽 蚌埠 233000；4.蚌埠医学院口腔医学系，安徽 蚌埠 233000)

改良保存液对兔标本固定效果的观察*

祖文轩1蒋邦红2杨俊松3刘 山3郭梁影4王玉华4赵 晨4

(1.蚌埠医学院解剖教研室，安徽 蚌埠 233000；2.蚌埠医学院第一附属医院整形外科，安徽 蚌埠 233000；3.蚌埠医学院制药工程系，安徽 蚌埠 233000；4.蚌埠医学院口腔医学系，安徽 蚌埠 233000)

目的 探索一种低刺激性且能保证对组织固定效果的新型保存液及配置方法。方法 用福尔马林、丙酸、酒精配置改良液，与传统福尔马林相较，从抗菌效果；大体观标本形态，镜下肌肉组织结构及液体刺激性三个方面，对比两种保存液的固定效果。结果 改良液与传统福尔马林对比，溶液的抗菌效果及对组织的固定效果相当，但改良液较具传统福尔马林相比，能标本色泽更接近原色，且刺激性小等优点。结论 改良保存液具有良好的标本固定效果，且刺激性小，是一种较为理想的标本保存液。

保存液；丙酸；酒精；福尔马林

在临床解剖学教学中，对尸体需进行保存处理，以达到使实验用标本保存较长时间、固定蛋白质和脂肪等目的。而目前应用较为广泛的尸体保存液仍是福尔马林。甲醛能使组织硬化且使组织固定均匀，对组织的穿透性强[1]。但在医学逐渐发展的条件下，传统保存液逐渐暴露出其不足：易挥发；在实验中对实验人员的皮肤黏膜刺激极大；浸泡后的标本颜色灰白，弹性低；此外甲醛能够诱发许多疾病，甚至具有一定的致癌性[2]。综上所述，一种具有传统保存液对组织的固定效果，对人体皮肤黏膜刺激性小，而且能够使标本形态、色泽、质地保持较好的新型保存液的研制，有十分重要的意义。本次实验在标本整体的基础上，通过临床口腔医学与化学制药工程的学科交叉，从化学方面角度，从新审视改良液的组分与配比，配制出一种符合要求的改良保存液。对其验证实验如下。

1 材料与方法

1.1 材料

取家兔20只，随机分为两组，分别为改良保存液组和传统保存液组，每组10只。其中改良保存液配置方法为：福尔马林2500 ml，丙酸2500 ml，酒精4500 ml，加水配置成50000 ml。其中福尔马林占4%，丙酸6%，酒精90%。传统保存液的配置方法为：10%福尔马林50000 ml。

1.2 观察指标及实验方法

随机选取20只健康新西兰兔，雌雄不限，体重为2.0～2.5 kg，本实验用兔由蚌埠医学院实验动物中心提供。将兔用3%戊巴比妥20 ml快速静推，待兔死亡后用棉线绑至兔架上，取仰卧位固定，在胸骨上缘处切开皮肤，钝性分离至肌层，分离胸乳突肌内测，暴露颈总动脉。每只兔子于颈总动脉内推注本组对应保存液20 ml，后浸泡于本组对应液体4980ml中。

1.2.1 细菌培养实验 为了更好的观察改良液的防腐抗菌情况，本研究设计阴性对照组，将标本放入纯水中与两组保存液对比，在不同的时间节点，通过细菌培养实验，分别将改良组、传统组、对照组取10ml与1ml放凉肉汤混合，于培养皿中培养记录，一旦发现霉菌立即停止记录，对比两种保存液的抗菌能力。

1.2.2 组织固定效果观察 沿腹正中线切开皮肤及皮下组织，暴露肌肉及腹腔，肉眼观察肌肉颜色及体内器官位置，对比两种保存液对组织的固定效果。取两组标本的股四头肌，肱二头肌做HE染色，镜下为观察肌肉固定情况，

1.2.3 保存液刺激性的对比实验 本实验运用兔眼刺激试验，取健康无眼疾大白兔15只，体重2～3 kg，雌雄不限，随机分为3组，每组5只，分别置于3个相互隔离的实验室中。对照组：实验台上不放标本；改良保存液组：实验台上放有经改良保存1年以上的标本；传统保存液组：在实验台上放有经福尔马林保存1年以上的标本。然后测量兔上下睑裂距、记数1分钟的瞬目次数，每隔30 min 1次，连续进行3次，取其平均值[3]。

1.3 数据统计

2 结 果

2.1 细菌培养实验结果

本实验按时间梯度观察了9个月，改良组的抗菌防腐效果与传统组大致一致，至9个月时，两种保存液颜色清澈(见图1)，都未培养出细菌及霉菌，且纯水中则于第7天时便出现大量霉变，及细菌污染。说明改良组具有良好的抗菌能力。结果如表1。

表1 保存液细菌培养结果

注：-为未发现可见霉菌，+为有可见细菌及霉菌生成。

图1 第9个月时，两种保存液颜色。

2.2 组织固定效果观察

改良保存液中，标本肌肉色泽红润，质地柔软，弹性佳，肌纤维保存完好；腹部脏器位置固定，无臭嗅，未见污染灶，组织无溶解。结果见图2。

对两种保存液中的上下肢肌肉进行HE染色，镜下观察肌纤维条索完整，细胞结构清晰，高倍镜下横纹存在，两种保存液的组织切片难以区分，肌肉固定效果相仿。结果见图3。

图2 改良保存液组织固定效果大体观

图3 两种保存液兔标本肌肉组织HE染色

2.3 兔眼实验的评分结果

改良组中上下睑间距及瞬眼次数与对照组无明显差异，而传统组中保存液散发的气体使兔眼泪液分泌增加，睑距变小，瞬眼次数增加，与对照组相比，差异有统计学意义。结果见图4。

图4 兔眼实验的评分结果 与对照组相比，改良组兔的上下睑距和瞬目次数差异均无统计学意义，而与传统的上下睑距和瞬目次数差异有明显的统计学意义。ns:无统计学意义，**P<0.01

3 讨 论

本实验通过多方面角度观察，验证改良保存液是否如实具有上述优点。为此，本次实验设置三组进行实验，其中除改良保存液外，另外两组为传统保存液和对照组水。在实验中，为使明确的表现出改良液具有以上特点，按照标准方法，制作组织切片以观察固定分层情况；并逐层解剖改良液浸泡后的兔标本观察肌肉组织色泽及固定效果。同样，为验证改良液的刺激性和防腐抗菌能力，本实验亦将改良液的兔眼刺激实验与细菌培养实验加入其中。对改良液的这些实验中，都在各方面表现出，其确实具有使标本保持良好色泽、质地和防腐抗菌能力、刺激性低及组织结构清晰等特点。本研究以解剖学为基础，辅以化学、微生物学，在前人的基础上，组合调配出改良保存液，

本研究中的改良保存液配比原则，旨在保持标本原有的柔软度且降低液体挥发而产生的刺激。我们将传统保存液中的福尔马林的配比浓度从10%降低到4%，添加90%酒精，二者混合可以使组织较快脱水，且达到蛋白质及脂肪固定的效果[4]。丙酸是一种理想的防腐剂，是低毒性的微生物生长抑制剂，对细菌、酵母及霉菌都有一定的抑制作用[5]。丙酸可防止蛋白分解和由于微生物作用引起的腐烂变质，从而延长保存时间[6]。而在解剖学中，酒精能加快固定，添加一定量的酒精避免了短时间内保存不佳而导致腐烂的后果。但在使用中要将标本完全浸没，由于酒精易于挥发，所以在使用中要将容器盖紧，另一方面要随时补充保存液，使其将标本完全浸没[7]。

综上所述，改良保存液在临床方面确实有巨大的应用空间，对之后保存液的继续改良提供了实验依据。

[1] 王子健，杨静波，李光谱，等.低浓度甲醛对多肽和蛋白化学修饰的质谱研究[J].分析化学，2016，8:1193-1199.

[2] Bourdin D,Mocho P,Desauziers V,Plaisance H. Formaldehyde emission behavior of building materials:On-site measurements and modeling approach to predict indoor air pollution[J].Journal of Hazardous Materials， 2014,280:164-173.

[3] 梁欣冬，马文霞，张优，等. 新型保存液对家兔皮肤、眼的刺激性及标本保存的实验研究[J].局解手术学杂志， 2015，4:376-379.

[4] 季景秀，司道文.人体解剖标本保存液的选择[J]. 临床医药文献电子杂志[J]. 2016,3(27):5513-5514.

[5] 赖建平，顾采琴，朱冬雪，等. 香蕉果皮黄酮及与丙酸、茶多酚复配剂的抑菌防腐作用[J]. 食品科学， 2012，13:53-57.

[6] 周纯海，黄科林，宁红，等. 丙酸的合成进展和应用以及市场前景[J]. 化工技术与开发， 2006,35(7):11-13.

[7] 陈国伟，蒋裕芸，陈凌枫，等. 生物标本保存方法的改进[J].解剖学研究， 2008,30(3):238-239.

Observation on the effect of modified preservation fluidon rabbit

ZU Wen-xuan1JIANG Bang-hong2YANG Jun-song3LIU Shan3HE Rui-xue3GUO Liang-ying4WANG Yu-hua4ZHAO Chen4

(1.Dept. of Anatomy, Bengbu Medical College, Bengbu 233000, China； 2. Dept. of Plastic surgery，The First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College，Bengbu 233004，China，3.Dept. of Pharmaceutical Engineering,Bengbu Medical College, Bengbu 233000, China；4.Dept. of oral medicine, Bengbu Medical College, Bengbu 233000, China)

Objective:Toexplore a new type of preservative solution withthe effect of tissue fixation and low irritation. Methods： The modifiedpreservative fluidwas consist of formalin;propionic acid; ethyl alcohol;the traditionalpreservative fluid was consist of formalin only.The effects of two kinds of preservationfluidwere compared from the following three aspects: the antibacterial effect, the morphology of the specimen, the musclestructure and the liquid irritation.Results： Compared with the traditionalpreservative fluid, the modified preservation fluid could keep the tissue softerand less irritating.The antibacterial effect and its effect on tissue fixation were almost the same. Conclusion： The modified preservation fluidhas good effect on specimen fixation, and it is a kind of ideal sample preservation solution with less irritation.

preservative fluid glacial; propionic acid; ethyl alcohol; formalin

蚌埠医学院自然科学基金面上项目(BYKY1654)；2016年国家级大学生创新创业训练计划项目(201610367019)。

祖文轩(1987—)，男，安徽蚌埠人，助理实验师，本科，主要从事人体解剖学实验技术。

杨俊松(1975—)，博士，副教授，E-mail：3109335584@qq.com。

R-33

A

1004-7115(2017)08-0856-03

10.3969/j.issn.1004-7115.2017.08.006

2017-05-19)