熊胆粉和猪胆粉干预脂肪肝大鼠的实验研究

李晔曾建伟欧余航娄云云汤锦周

（1福建医科大学附属龙岩第一医院龙岩 364000；2福建中医药大学中西医结合研究院福州 350122；3福建中医药大学附属第三人民医院福州 350122；4福建中医药大学药学院福州 350122）

熊胆粉和猪胆粉干预脂肪肝大鼠的实验研究

李晔1曾建伟2#欧余航3娄云云4汤锦周4

（1福建医科大学附属龙岩第一医院龙岩 364000；2福建中医药大学中西医结合研究院福州 350122；3福建中医药大学附属第三人民医院福州 350122；4福建中医药大学药学院福州 350122）

目的：探讨熊胆粉和猪胆粉干预高脂饮食引起脂肪肝大鼠的差异，为替代使用提供实验依据。方法：32只SD大鼠随机分为四组（每组8例）：空白对照组、高脂饮食模型组、熊胆粉干预组和猪胆粉干预组，分别记录体重和肝脏重量的变化，HE染色法检测肝脏组织的形态变化，并检测每组血清的谷草转氨酶、碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶和总胆固醇四个生化指标分析对比肝功能的变化情况。结果：熊胆粉和猪胆粉对高脂饮食引起的大鼠体重和肝脏重量的非正常升高均有下降趋势，但熊胆粉有统计学意义；HE染色观察熊胆粉和猪胆粉对脂肪肝大鼠肝损伤病理状态的影响，发现熊胆粉能有效改善肝组织的损伤情况，而猪胆粉对脂肪肝引起的肝损伤变化没有作用；肝功能生化指标的检测结果发现，熊胆粉能有效降低脂肪肝引起的谷草转氨酶、碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶和总胆固醇指标的升高，而猪胆粉只对乳酸脱氢酶有影响。结论：对脂肪肝大鼠的干预效果，熊胆粉优于猪胆粉。

脂肪肝；熊胆粉；猪胆粉；实验研究

脂肪肝是一种常见的肝功能代谢紊乱引起的肝细胞中脂质积累过多引起的病变[1]。它正严重威胁人们的健康，在我国成为仅次于病毒性肝炎的第二大肝病[2]。中医药多途径、多层次、多靶点的治疗肝损伤的优势日益明显，故值得深入研究[3～5]。熊胆作为传统名贵药材具有清热解毒，提高免疫力、利湿、退黄、利胆、保肝、抗病毒等作用，在临床上已经广泛应用于各种肝病，主要包括慢性乙型肝炎、慢性肝病残留黄疸、慢乙肝并胆囊炎、黄疸型肝炎、高黄疸慢性乙型肝炎等[6]。由于熊胆来源的特殊性，使得熊胆粉极为珍贵。同样含有天然胆汁酸成分，并且来源广泛的猪胆是否也具有治疗慢性肝病的药效作用，能否替代熊胆，有待进一步研究。本研究以高脂喂养诱导脂肪肝大鼠为模型，用熊胆和猪胆对其进行干预治疗，比较两种胆汁对慢性肝损伤的治疗作用，为临床用药提供实验依据。现报道如下：

1 材料与方法

1.1 实验材料供试样品熊胆粉为市面上购买的熊胆冻干粉，猪胆粉为猪胆汁高速减压离心干燥得到的胆汁晶体；实验动物和高脂饲料购自上海斯莱克实验动物有限公司。

1.2 实验动物模型32只6周龄清洁级SD大鼠（实验动物和高脂饲料购自上海斯莱克实验动物有限公司），按体重随机分成四组：空白对照组，模型组，熊胆粉干预组和猪胆粉干预组，每组8例。动物自由进食、饮水，基础饲料，温度20～24℃，湿度40%～70%[（50±5）%]，风速0.1～0.2m/s，气流≥28次/m in。自然光照环境中饲养，常规观察1周后实验。造模时，除空白对照组以基础饲料外，其余各组饲料以高脂饲料（猪油10%、胆固醇2%、猪胆盐0.7%、基础饲料87.3%），饲养6周，自由饮水。6周后脂肪肝模型制备完成[7]。从第7周起，干预组分别用熊胆粉和猪胆粉[0.05 g/（kg·d）]对造模大鼠进行灌胃干预4周，空白对照组灌等体积的生理盐水。每周称体重，4周后取材，主动脉采血，取全肝组织。

1.3 实验方法

1.3.1 一般情况观察大鼠体重称量，观察不同胆粉对大鼠一般状态的影响。

1.3.2 肝脏形态学变化取10%甲醛溶液中固定的肝组织，通过常规脱水、石蜡包埋进行切片，后经HE染色，光镜下观察肝组织病理改变。

1.3.3 生化指标检测全自动生化分析仪分析大鼠血清肝生化指标：谷草转氨酶、碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶和总胆固醇。

1.4 统计学分析采用SPSS18.0软件分析数据，实验数据以（±s）表示，多组均数间比较采用单因素方差分析检验，P＜0.05表示有统计学意义。

2 结果

2.1 大鼠一般状态实验结果观察实验全程，空白组大鼠精力充沛，始终保持常规食物摄入量，毛皮白净光滑，尿液呈淡黄色。相比之下，模型组大鼠活动明显减少，同时饮食量较空白组大鼠明显减少。此外，毛皮颜色变得油腻，暗淡，而尿液变成了暗黄色。然而，接受熊胆粉和猪胆粉干预后一般状态有显著提高，包括运动恢复，毛色不油腻，尿液颜色相对模型组较淡。

2.2 熊胆粉和猪胆粉干预后对肝损伤模型大鼠体重的影响高脂饮食的大鼠体重和肝脏重量显著增加。用不同的胆粉药物干预高脂饮食大鼠在体重和肝脏重量上有不同程度的改善。值得注意的是，熊胆粉干预后的模型大鼠体重和肝重都有明显的恢复，且具有统计学意义，而猪胆粉干预的模型大鼠虽然体重和肝重都有下降，但结果并不显著。见图1，图2。

图1 熊胆粉和猪胆粉对脂肪肝大鼠体重的影响

图2 熊胆粉和猪胆粉对脂肪肝大鼠肝重的影响

2.3 病理组织学结果光镜下观察四组大鼠肝脏病理组织学改变，空白对照组可见肝小叶轮廓清晰，细胞分界清，核圆，位于细胞中央，胞质丰富，呈嗜碱性；高脂饮食模型组可见肝小叶结构破坏，肝板排列紊乱，呈点、片状坏死，肝细胞明显肿胀，胞质中可看到大小不等、数量不一的圆形脂肪空泡，散在肝细胞嗜酸性变，小叶中央静脉周围有炎性细胞浸润，有的肝细胞质中有红色颗粒状Mallory小体；熊胆粉干预组大鼠肝细胞浑浊明显减轻，肝板排列恢复，细胞内偶有小脂滴；猪胆粉干预组与模型组没有显著差别。见图3。

图3 HE染色观察熊胆粉和猪胆粉对脂肪肝大鼠肝组织病理状态的影响

2.4 生化测定结果与空白对照组相比，模型组大鼠血清谷草转氨酶、碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶和总胆固醇水平明显高于正常组（P＜0.05，P＜0.01）。与模型组比较，熊胆粉干预组四种生化指标均有显著降低（P＜0.05，P＜0.01）；猪胆粉干预组降低乳酸脱氢酶的活力有统计学意义，对谷草转氨酶和碱性磷酸酶的活力影响有下降的趋势，但无统计学意义（P＞0.05），同时，对总胆固醇含量未起到抑制作用。见表1。

表1 熊胆和猪胆对脂肪肝大鼠肝生化指标的影响（±s）

表1 熊胆和猪胆对脂肪肝大鼠肝生化指标的影响（±s）

注：与空白对照组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

组别谷草转氨酶（U/L）碱性磷酸酶（U/L）乳酸脱氢酶（U/L）总胆固醇（mmol/L）空白对照组模型组熊胆粉干预组猪胆粉干预组57.88±8.75 84.23±11.06##68.19±11.93*80.49±12.66 132.25±17.43 169.13±33.83#159.00±17.71*167.38±35.27 229.18±38.45 290.64±33.58##212.28±60.59**249.11±58.70*1.36±0.12 1.95±0.19#1.78±0.29*2.21±0.30

3 讨论

在中医临床实践中，动物胆粉常用于中药治疗各种慢性肝病。然而，对动物胆粉疗效对比的研究甚少。目前的研究表明，在高脂饮食诱导的大鼠脂肪肝模型中，不同胆汁粉对脂肪肝有不同的生物效应。熊胆粉作为一种名贵动物类中药，具有清热解毒、息风止痉、清肝明目的功效，现代药理学研究发现熊胆粉所含的胆汁酸盐能促进脂肪、类脂质及脂溶性维生素的消化吸收，因此，熊胆粉在控制脂肪肝大鼠体重、肝重、肝脏病理状态及肝生化指标上均有显著性的效果；猪胆粉对高脂模型大鼠的整体变化有降低趋势，但效果不显著。这种结果可能是由于猪胆粉所含的成分与熊胆粉不同所致。特别是熊胆粉不仅可以抑制高脂饮食引起的体重和肝脏重量的增加，而且还大大减轻肝组织中炎症细胞的浸润和脂质积累。这为临床动物胆粉的选择使用提供了实验依据。

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R285.5

B

10.13638/j.issn.1671-4040.2017.04.101

2017-03-05）

#通讯作者：曾建伟，E-mail：zjw tcm@qq.com