荆防除湿茶薄层色谱鉴别研究

周涓，杨瑜珍，陈华杏，刘廷利，彭镇耀

（广东省湛江市第一中医医院，广东湛江524043）

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荆防除湿茶薄层色谱鉴别研究

周涓，杨瑜珍，陈华杏，刘廷利，彭镇耀

（广东省湛江市第一中医医院，广东湛江524043）

目的建立鉴别荆防除湿茶的薄层色谱（TLC）法。方法通过TLC法对荆防除湿茶中的荆芥和枳壳进行鉴别。结果在荆防除湿茶中检出荆芥和枳壳，斑点明显，色谱带清晰，阴性无干扰。结论该方法重复性好，温度、相对湿度对TLC鉴别的效果无明显影响，可用于荆防除湿茶的质量控制，但处方中其他成分的鉴别还需继续研究。

荆防除湿茶；荆芥；枳壳；薄层色谱鉴别

荆防除湿茶是湛江市第一中医医院根据荆防冲剂改进剂型而成的医疗机构制剂[批准文号粤ZB20112354(Z)]。荆防冲剂收录于卫生部颁药品标准，可发汗解表，散风祛湿，具有解表、祛风、透疹的功效，临床主要用于治疗风寒感冒、头痛身痛、恶寒、无汗、鼻塞流涕、咳嗽等外感风寒[1]。荆防除湿茶中，羌活、独活辛湿发散，一上一下，通治用周身风寒湿邪而止头身疼，为君药；荆芥、防风祛风散寒除湿力较强，柴胡辛散解肌，川芎活血祛风，善止头痛，共为臣药；桔梗宣肺，枳壳降气，一升一降，宽胸利气，前胡化痰，茯苓渗湿，四药合用，调气肌，利肺气，除痰湿，止咳嗽，共为佐药；甘草调和诸药，兼益气和中为佐使之用。诸药合用，共奏解表、祛风、透疹，治外感风寒之功效。荆防除湿茶在我院经历了几十年临床使用和检验，疗效显著，深受患者欢迎。为进一步规范荆防除湿茶质量标准，参考相关标准[2－3]和文献[4－15]，对处方中荆芥和枳壳进行薄层色谱（TLC）法鉴别，对原有质量标准进行了全面修订增补。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

ZF－20D型暗箱式紫外分析仪，SHZ－D(Ⅲ)型循环水式真空泵，旋转蒸发器，ZKSY－10S型电子恒温不锈钢水（油）浴锅，均购于巩义市予华仪器有限责任公司；电热鼓风干燥箱（北京中兴伟业仪器有限公司）。

1.2 试药

荆防除湿茶（医院自制，批号分别为141021，141127，150119），原料药材均购于北京同仁堂（集团）有限责任公司；荆芥对照药材（批号为1104－20012），枳壳对照药材（批号为981－9301），均购于中国食品药品检定研究院；硅胶G（青岛海洋化工厂，批号为0131106），预制板（青岛海洋化工厂分厂，批号为20131118），规格均为10 cm×20 cm，厚0.20～0.25mm；玻璃点样毛细管（华西医科大学仪器厂，规格为0.3mm）；香草醛（分析纯），三氯化铝（分析纯），硫酸（含量为98%），均购于国药集团化学试剂有限公司；其他试剂（市售）均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 处方与制备

处方：枳壳、川芎、甘草各1 000 g，防风、羌活和茯苓各1 500 g，荆芥、防风、羌活、独活、柴胡、前胡、川芎、枳壳、茯苓、桔梗、甘草各1 200 g。

制法：按处方工艺，将荆芥、独活、枳壳粉碎成粗粉备用，其他药材水煮提取2次，每次1.5 h，合并2次药液，滤过，滤液浓缩至稠膏状，加入3味药材粗粉，混匀，低温干燥，粉碎，分装，即得。共制1 000包，每袋含药粉12 g。

制剂质量控制：成品为黄棕色粗粉及粉末，气微香，味苦，水分含量不超过12%，符合2010年版《中国药典（一部）》茶剂项下各项有关规定。贮存条件为密闭干燥环境。

2.2 溶液制备

荆芥供试品溶液：取3批荆防除湿茶，各5 g，置50m L单口烧瓶，加入石油醚(60～90℃)20mL，密塞，振荡搅拌使药粉充分浸润，静置过夜；分别滤过，浓缩滤液至1m L，即得。

枳壳供试品溶液：取3批荆防除湿茶，各5 g，置50m L单口烧瓶，加入甲醇20m L，超声处理30min，分别滤过，滤液蒸干，残渣各加甲醇5m L，溶解，即得。

荆芥对照品溶液：取荆芥对照药材5 g，粉碎，置50m L单口烧瓶，加入石油醚（60～90℃）20 mL，密塞，振荡搅拌使药粉充分浸润，静置过夜，滤过，浓缩滤液至1m L，即得。

枳壳对照品溶液：取枳壳对照药材5 g，粉碎，置50mL单口烧瓶，加甲醇20mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5m L溶解，即得。

缺荆芥阴性对照溶液：取处方中除荆芥之外的10味药，按处方比例及制法制成缺荆芥药材的阴性对照样品。取相当于供试品的量，置50mL单口烧瓶，加入石油醚（60～90℃）20m L，密塞，振荡搅拌使药粉充分浸润，静置过夜，滤过，浓缩滤液至1m L，即得。

缺枳壳阴性对照溶液：取处方中除枳壳之外的10味药，按处方比例及制法制成缺枳壳药材的阴性对照样品。取相当于供试品的量，置50mL单口烧瓶，加甲醇20m L，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5m L溶解，即得。

2.3 预试验

2.3.1 TLC色谱条件选择

荆芥：取荆芥供试品溶液和对照品溶液，点在同一薄层板上，取3个相同的薄层色谱板，采用石油醚(30～60℃)－甲酸乙酯（9∶1），正己烷－乙酸乙酯（9∶1），正己烷－乙酸乙酯(17∶3)展开体系分离。喷以5%香草醛硫酸溶液，105℃下加热显色。结果，正己烷－乙酸乙酯(17∶3)展开效果较佳，斑点分离良好，色谱清晰，斑点无拖尾现象。荆芥的TLC鉴别以正己烷－乙酸乙酯(17∶3)作为展开剂，以5%香草醛硫酸溶液为显色剂，105℃加热检视。

枳壳：取枳壳供试品溶液和对照品溶液，点在同一薄层板上，取3个相同的薄层色谱板，采用乙酸乙酯－丁酮－甲醇－水(10∶7∶1∶1)、甲苯－乙酸乙酯－甲醇(13∶7∶2)和三氯甲烷－甲醇－水(32∶17∶5)下层溶液展开体系分离。喷以3%三氯化铝乙醇溶液，105℃下加热5min，紫外光灯(365 nm)下检视。结果，三氯甲烷－甲醇－水(32∶17∶5)下层溶液展开效果较佳，斑点分离良好，色谱清晰，斑点无拖尾现象。枳壳的TLC鉴别以三氯甲烷－甲醇－水(32∶17∶5)的下层溶液作为展开剂，以3%三氯化铝乙醇溶液为显色剂，105℃加热后，置紫外灯（365 nm）下检视。

2.3.2 TLC鉴别

荆芥：2010年版《中国药典（一部）》附录ⅥB照薄层色谱法试验，分别用点样毛细管吸取供试品溶液、对照品溶液和阴性对照溶液各10μL，点于同一硅胶G薄层板的同一水平位置上；以正己烷－乙酸乙酯(17∶3)为展开剂，上行展开至距离薄层板上缘约5 mm处；取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至显色清晰。观察可见，在与对照药材溶液色谱相应位置上，供试品溶液色谱中显相同颜色的斑点，阴性对照溶液色谱中无对应斑点。其色谱图见图1 A。

枳壳：照2010年版《中国药典（一部）》附录ⅥB薄层色谱法试验，分别用点样毛细管吸取供试品溶液、对照品溶液和阴性对照溶液各8μL，点于同一硅胶G薄层板的同一水平位置上，以三氯甲烷－甲醇－水(32∶17∶5)下层溶液为展开剂，上行展开至距离薄层板上缘约5mm处，取出，晾干，喷以3%三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热约5 min，置紫外光灯(365 nm)下检视。可见，在与对照药材溶液色谱相应位置上，供试品溶液色谱中显相同颜色的斑点，阴性对照溶液色谱中无对应斑点，其色谱图见图1 B。

1－3.供试品溶液（批号分别为141021，141127，150119）4.阴性对照溶液5.对照药材溶液A.荆芥（T＝25℃，RH＝70%）B.枳壳（T＝25℃，RH＝50%）图1样品薄层色谱图

2.4 试验条件选择

薄层板选择：按拟订方法进行试验，于温度（T）为25℃、相对湿度（RH）为70%条件下，分别取手铺板和预制板，结果两者对鉴别无影响，其色谱图见图2。

温度选择：取点样后的薄层板，分别于6℃和30℃中展开，显色，检视。结果两者对鉴别无影响，其色谱图见图3。

湿度选择：取点样后的薄层板，分别在用硫酸调节RH为32%和88%的层析缸中展开，显色，检视。结果两者对鉴别无影响，其色谱图见图4。

3 讨论

3.1 方法学考察

由图1可见，3批供试品溶液均在荆芥对照药材溶液的相同位置显相同斑点，同时缺荆芥的阴性对照溶液在对应位置无斑点，表明该斑点系荆芥特有组分，且该组分存在于受试制剂中，实现了对荆防除湿茶中荆芥的定性鉴别；3批供试验的荆防除湿茶中都在枳壳对照药材的相同位置显示相同斑点，同时缺枳壳的阴性对照溶液在对应位置无斑点。表明该斑点系枳壳特有组分，从而实现了对处方中枳壳的定性鉴别。由图2可知，本研究中建立的薄层色谱鉴别方法在手铺硅胶G板与预制板上的分离效果无明显差异。图3表明，在6～30℃条件下，对鉴别无明显影响；图4表明，RH为32%～88%时，对鉴别无明显影响。

1－3.供试品溶液（批号分别为141021，141127，150119）4.对照药材溶液A.荆芥（T＝25℃，RH＝70%）B.枳壳（T＝25℃，RH＝70%）图2薄层板影响因素考察薄层色谱图

3.2 色谱板、展开剂选择

B1（T＝30℃，RH＝70%）1－3.供试品溶液（批号分别为141021，141127，150119）4.对照药材溶液A.荆芥B.枳壳图3温度影响因素考察薄层色谱图

由预试验可知，不同的展开剂分离效果不同。荆芥和枳壳适宜展开剂分别是正己烷－乙酸乙酯(17∶3)和三氯甲烷－甲醇－水(32∶17∶5)下层溶液；显色剂分别以5%香草醛硫酸溶液和3%三氯化铝乙醇溶液为佳；显色时均需加热至105℃；而枳壳的TLC图置紫外灯（365 nm）更为清晰可辨。由图1可知，3批供试品溶液的色谱重复性良好。

B1（T＝25℃，RH＝88%）1－3.供试品溶液（批号分别为141021，141127，150119）4.对照药材溶液A.荆芥B.枳壳图4相对湿度影响因素考察薄层色谱图

综上所述，本研究中建立的TLC鉴别方法，可在不同温度、湿度和不同薄层板上适用，且对鉴别效果无明显影响。本研究中参考了2010年版《中国药典(一部)》中相关处方中相关组分的TLC鉴别方法，经过反复试验，探究出了对荆防除湿茶中荆芥和枳壳二味药材组分的TLC定性鉴别方法，展开剂选择得当，谱图清晰，特征鉴别组分明显，方法重复性好，可对荆防除湿茶进行质量控制，为相应指标的建立和相关其他制剂的TLC鉴别提供了参考。不足之处在于，对本处方中其他药材进行薄层色谱研究时，均表现出阴性干扰大或色谱斑点不清晰等状况，仍有待进一步研究。

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TLC Identification of Jingfang Elim inating Dam pness Tea

Zhou Juan,Yang Yuzhen,Chen Huaxing,Liu Tingli,Peng Zhenyao
(Zhanjiang First Traditional Chinese Medicine Hospital,Zhanjiang,Guangdong,China 524043)

Ob jective To establish a TLC method for the identification of Jingfang Eliminating Dampness Tea.M ethods The TLC method was used to distinguish the Nepeta Cataria and Fructus Aurantii in Jingfang Eliminating Dampness Tea.Results The Nepeta Cataria and Fructus Aurantii were identified by TLC,the spots were clear and the bands were clear,the negative results were with no disturbance.Conclusion The method has good reproducibility,the temperature and humidity has no significant effect on TLC,it can be used for the quality control of Jingfang Eliminating Dampness Tea.However,the identification of other ingredients in the prescription needs to be further studied.

Jingfang Eliminating Dampness Tea;Nepeta Cataria;Fructus Aurantii;TLC

R284.1

A

1006－4931(2017)09－0022－05

2017－01－06；

2017－02－16)

10.3969/j.issn.1006－4931.2017.09.007

周涓，女，副主任药师，研究方向为医院药学，（电子信箱）zzqqzzqq83＠163.com。