HPLC法测定感冒止咳膏中黄芩苷的含量

许庆+何继祥+安艳苏�í�

【摘要】目的：建立高效液相色谱法（HPLC）测定感冒止咳膏中黄芩苷含量的方法。方法： 采用BDS HYPERSIL C18色谱柱（250mm×46mm，5μm）；以甲醇（A）-0.2%磷酸溶液（B）为流动相，梯度洗脱（0～11min，55%B；11～12min，55%B→20%B；12～19min， 20%B；19～20min，20%B→55%B；20～25min，55%B）；流速为10mL/min；柱温：30℃；检测波长：280nm。结果：黄芩苷浓度在570～9112μg范围内与峰面积呈良好线性关系，r=09999，平均回收率为9788%（RSD为116%）。结论：该方法准确、快速、简便可靠，结果稳定，可用于感冒止咳膏中黄芩苷的含量测定。

【关键词】感冒止咳膏；黄芩苷；高效液相色谱法

【中图分类号】R2841【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2017）11-0043-03

Dtermination of the Content of Baicalin in Cold Cough Relieving Ointment by HPLC

XU QingHE JixiangAN Yansu

Qujing Food and Drug Inspection Test Center of Yunnan，Qujing 655000，China

Objective To establish an HPLC method for the determination of Baicalin in cold cough relieving plaster （HPLC）. Methods Using BDS HYPERSIL C18 column （250mm×46mm， 5μm）； （A） in methanol -02% phosphoric acid solution （B） as mobile phase， gradient elution （0～11min， 11～12min， 55%B； 55%B， 20%B； 20%B； 12～19min， 19～20min， 20%B， 55%B； 20～25min. 55%B）； the flow rate was 10mL/min； column temperature： 30 C； detection wavelength： 280nm. Results Baicalin concentration in the range of 570～9114μg and peak area showed a good linear relationship， r=09999， the average recovery was （RSD=11%）. Conclusion The method is accurate， rapid， simple， reliable and stable. It can be used to determine the content of Baicalin in cold cough relieving ointment.

Cold Cough Ointment； Baicalin； HPLC

感冒止咳膏为曲靖市第一人民医院制剂室研制的制剂，由黄芩、南沙参、柴胡、款冬花、百部、荆芥、紫菀等十六味中药制成。该品具有解表驱邪、清热润肺、止咳化痰的作用，主要用于伤风感冒引起的喉咙肿痛，咳嗽、痰多等症。其中黄芩为制剂中的君药，来源于唇形科黄芩属植物黄芩（ Scutellaria baicalensis Georgi） 的干燥根，是常用中药之一。黄芩药用历史悠久，始列于《神农本草经》。性寒、味苦； 归肺、心、肝、大肠经，能清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎，为清热燥湿常用药[1]。黄芩中主要药理活性成分为黄芩苷，已被证明有广泛的药理活性，具有消炎、解热、抗病毒、抗菌的作用[2-4]。但有研究发现不同产地、不同栽培年限及不同部位的黄芩药材中的黄芩苷含量差别较大[5]。感冒止咳膏为多味药材制成的膏状液体制剂，其中所含成分较为复杂，现行质量标准[6]中仅以薄层色谱来鉴别其中的金荞麦、桔梗两种药材，质量标准滞后，急需建立一些对制剂中君药成分定量控制的方法。笔者参照文献[1，7]，以黄芩中黄芩苷为定量控制指标，采用高效液相色谱法对黄芩苷进行含量测定，为有效控制“感冒止咳膏”质量提供可靠且简便易行的方法。

1仪器与材料

11仪器Agilent1260型高效液相色谱仪（包括G1311C系列四元泵，G1314F VWD检测器，G1316A柱温箱，G1329B自动进样器）；KQ-300UDB型雙频数控超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；METTLE MS205DU电子天平（上海梅特勒-托利多仪器有限公司）；PURELAB Flex 3一体式超纯水仪（英国ELGA公司）

12材料黄芩苷对照品（批号：110715-201318，中国食品药品检定研究院，含量为933%）；磷酸（分析纯，批号：2015071401，成都市科龙化工试剂厂）；甲醇（色谱纯，CAS号：67-56-1，赛默飞世尔科技（中国）有限公司）；乙醇（分析纯，批号：20160708，成都市科龙化工试剂厂）；水为纯化水。感冒止咳膏（批号：20160714、20160806、20160923，曲靖市第一人民医院制剂室）。阴性样品用药材南沙参、柴胡、款冬花、百部、荆芥、紫菀等十六味中药来源于曲靖市食品药品检验检测中心中药标本室经检验合格的留样标本。

2方法与结果

21色谱条件色谱柱：BDS HYPERSIL C18色谱柱（250mm×46mm，5μm）；流动相：甲醇（A）-02%磷酸溶液（B），梯度洗脱（0～11min，55%B；11～12min，55%B→20%B；12～19min，20%B；19～20min，20%B→55%B；20～25min，55%B）；流速：10mL/min；柱温：30℃；检测波长：280nm；进样量：10μL。

22溶液制备

221供试品溶液制备取本品内容物10g，精密称定，置50mL烧杯中，加入70%乙醇搅拌使溶化，再转移至50mL量瓶中，用70%乙醇洗涤烧杯，洗液并入量瓶中，超声（频率：45KHz，功率：300W）15min，取出，放冷，用70%乙醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

222对照品溶液的制备精密称取黄芩苷对照品（含量933%）1221mg置50mL量瓶中，加70%乙醇溶解并稀释至刻度，即得黄芩苷质量浓度为02278mg/mL的对照品溶液。

223阴性样品溶液的制备按感冒止咳膏处方比例，分别称取除黄芩外的其它药材，依感冒止咳膏工艺制备不含黄芩的阴性样品，并按“221”项下制备阴性样品溶液。

23线性关系的考察分别精密吸取“222”项下黄芩苷对照品溶液0625、125、25、50、100mL，分别置25mL量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，制得含黄芩苷570、1039、2278、4556、9112μg/mL的系列对照品溶液。在“21”项下色谱条件进样分析，以对照品浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），计算线性回归方程，得黄芩苷的回归方程Y=354007X-60126（r=09999）。结果表明：黄芩苷浓度在570～9112μg范围内具有良好线性关系。

24精密度试验精密吸取同一黄芩苷对照品溶液（含黄芩苷4556μg/mL）在“21”项下色谱条件连续进样6次，测定峰面积值，RSD为08%，表明仪器的精密度良好。

25重复性试验取同1批感冒止咳膏（批号：20160714）6份，按“221”项下的方法处理，记录峰面积，计算含量，结果每1g样品中平均含黄芩苷166mg，RSD为12%，表明该方法的重复性良好。

26稳定性试验取同1份供试品溶液（批号：20160714），分别于0、2、8、12、16、24h按“21”项下色谱条件进行分析，记录峰面积。结果黄芩苷的RSD为11%，表明供试品溶液在24h内质量稳定。

27加样回收率试验分别取已知含量的同一批感冒止咳膏（批号：20160714）约05g，精密称定，共6份，分别精密加入对照品溶液（濃度为02278mg/mL）4mL，按“221”项下的方法处理，制备供试液，分别测定，计算回收率。平均回收率为9788%，RSD为116%。见表1。

28专属性试验将阴性样品溶液按“21”项下色谱条件进样分析，记录色谱图，见图1。结果色谱图中在黄芩苷相应出峰位置未出现干扰峰。

29样品含量测定取不同批号的供试品3批按“221”项下的方法处理，制备供试品溶液，按“21”项下色谱条件进样测定，按上述色谱条件测定峰面积积分值，以外标法计算黄芩苷含量。见表2。

3讨论

31流动相的选择研究先后试用文献中[1，7]甲醇-水-磷酸、甲醇-水-冰乙酸为流动相的等度分析，由于样品中成分复杂，黄芩苷峰后仍还有一些强保留的杂质峰出现，整个分析时间较长，考虑到分析时间及黄芩苷峰的分离效果，笔者采用了甲醇-02%磷酸为流动相并采取梯度洗脱，结果能得到对称性、分离度均较好的黄芩苷峰，且能把强保留杂质较快的洗脱出来，缩短了分析时间，提高了分析效率。故选用甲醇-02%磷酸为流动相梯度洗脱。

32供试品取样方法的选择取样时先采用量取样品体积，但发现由于供试品为粘稠的膏状液体，精密量取体积较难操作，故笔者针对制剂特点采用称取样品质量，并先于烧杯中溶化样品再转移至量瓶中溶解定容，整个取样过程简单、易行。

33提取条件的选择超声时间的确定：精密称取样品（批号20160714）5份，每份约10g，按“221”项下的方法处理，5份样品分别超声（频率：45KHz；功率：300W）处理5、10、15、20、25min，结果超声10min后黄芩苷含量基本不变，证明样品超声处理15min，能将样品中的黄芩苷提取完全，所以超声（频率：45KHz；功率：300W）时间确定为15min。

此方法准确、快速、简便可靠，结果稳定，可用于感冒止咳膏中黄芩苷的含量测定。

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2015：301.

[2]吕武清，龙新华.中成药中的药材薄层色谱鉴别[M].北京：人民卫生出版社，1996：455-468.

[3]徐丹洋，陈佩东，张丽妹，等.黄芩的化学成分研究[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（1）：78.

[4]王雅芳，李婷，唐正海，等.中药黄芩的化学成分及药理研究进展[J].中华中医药学刊，2015，1（33）：206-211.

[5]鄢长华，陈俊林，赵海涛. HPLC法对不同栽培年限及不同产地的黄芩中黄芩苷的含量测定分析研究 [J].内蒙古医学杂志，2006，38（6）：515-517.

[6]云南省食品药品监督管理局.云南医院制剂标准[S]：滇ZJGF/2012-0001.

[7]刘美兰， 杨立新，万元浩，等. RP-HPLC法测定7种药用黄芩中黄芩苷和汉黄芩苷的含量[J]. 药物分析杂志，2002， 22（2）： 99-102.

（收稿日期：2017-04-05编辑：梁志庆）