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RP—HPLC法同时测定人血清中奥氮平和富马酸喹硫平浓度

2017-07-05刘威曹敏娟尚翔姚树永�í�

中国民族民间医药·上半月 2017年6期
关键词:奥氮平喹硫平高效液相色谱法

刘威+曹敏娟+尚翔+姚树永�í�

【摘要】目的:建立同时测定人血清中奥氮平、富马酸喹硫平浓度的高效液相色谱法。方法:血清样品以乙醚进行提取并测定,Hypersil C18反相柱 (150mm×46mm, 5μm)为色谱柱,流动相为25mmol/L磷酸盐缓冲液(pH60,内含05%三乙胺)-乙腈(65∶35,V/V),流速为10mL/min,柱温为40℃,检测波长为254nm。结果:奥氮平在100~2500μg、富马酸喹硫平在500~10000μg范围内峰面积与浓度呈良好线性关系;奥氮平、富马酸喹硫平的低、中、高3种浓度相对平均回收率分别为1033%、1008%、987% 和975%、982%、1011%,日内、日间RSD均低于10% (n=5)。奥氮平和富马酸喹硫平的检测限均为50μg/L。结论:该方法灵敏、准确,可用于临床奥氮平和富马酸喹硫平的血药浓度监测。

【关键词】高效液相色谱法;奥氮平;喹硫平;血药浓度

【中图分类号】R9141【文獻标志码】 A【文章编号】1007-8517(2017)11-0036-03

RP-HPLC Method for the Determination of Human Plasma of Olanzapine and Quetiapine Concentration

LIU WeiCAO MinjuanSHANG XiangYAO Shuyong

Suzhou Psychiatric Hospital, Suzhou 215000,China

Objective To establish a method for determination olanzapine and quetiapine in human serum by RP-HPLC.Methods The analytes were extracted after serum samples had been alkalinized. The HPLC separation of the analytes was performed on a reversed-phase Hypersil C18 column,using 25mmol·L-1 phosphat buffer (pH60,containing 05% triethylamine)-acetonitrile (65∶35, V/V) as mobile phase, with a flow-rate of 10mL·min-1 anda detective wavelength of 254nm.The temperature of the column was 40℃.Results The calibration curves were linear in the ranges of 100~2500μg·L-1 for olanzapine, 500~10000μg·L-1 for quetiapine respectively. The relation of peak area and concentration showed linear in the range of the average recoveries of olanzapine and quetiapine at high,middle and low concentrations were 1033%、1008%、987% and 975%、982%、1011% respectively. The intra-day and inter-day variations RSD were less than 10% (n=5). The minimum detectable concentration of both olanzapine and quetiapine were 50μg·L-1.Conclusion The method is accurate, sensitive and simple for routine therapeutic drug monitoring (TDM) and for the study of the pharmacokinetics of olanzapine and quetiapine.

RP-HPLC ; Olanzapine ; Quetiapine ; Serum Drug Concentration

奥氮平(Olanzapine)和富马酸喹硫平(Quetiapine Fumarate)均为新型非典型抗精神病药[1]。奥氮平属于5-羟色胺(5-Hydroxy Tryptamine,5-HT)和多巴胺(Dopamine,DA)受体拮抗剂,能改善脑内多种神经通路功能,对于改善精神分裂症的阳性和阴性症状均有明显效果[2]。富马酸喹硫平的化学结构与奥氮平相似,属二苯二氮类衍生物,为脑内多种神经递质受体拮抗剂,主要作用于中枢多巴胺D1、D2和5-HT1、5-HT2等受体[3]。临床上,奥氮平和富马酸喹硫平常联合用于治疗复杂的精神分裂症[4-5]。由于精神药物血药浓度具有个体差异性大、安全范围窄等特点,因此进行血药浓度监测是十分必要的。近年来,检测奥氮平与喹硫平血药浓度的方法主要有高效液相电化学法(HPLC-ECD)、高效液相-质谱法(HPLC-MS)等[6-8]。但尚未见采用高效液相色谱法(HPLC)同时测定奥氮平和喹硫平血药浓度的文献报道。因此,实验建立一种同时测定奥氮平和喹硫平血药浓度的高效液相色谱法,该方法灵敏、准确,为临床用药提供依据,节约分析时间。

1仪器与试剂

11仪器Agilent 1260高效液相色谱仪(包括G1314F紫外检测器、G1316A柱温箱、G1329B自动进样器、G1311C多元泵、G1322A真空脱气机、Agilent Chem32化学工作站);KS-120D型超声波清洗机(新芝仪器厂);XW-80A型旋涡混合器(上海医科大学仪器厂);电子分析天平(美国OHAUS)。

12材料奥氮平(批号:100948-201501)、富马酸喹硫平(批号:100815-201202)、阿米替林(批号100518-201303)对照品均源于中国食品药品检定研究院。奥氮平(批号:160204,江苏豪森药业股份有限公司);喹硫平(批号:B151133,湖南洞庭药业股份有限公司)。

空白血清由苏州市广济医院血站提供。甲醇、乙腈为色谱纯,水为超纯水,其余试剂均为分析纯。

2方法与结果

21色谱条件色谱柱:Hypersil ODS柱(150mm×46mm,5μm);流动相:磷酸盐缓冲液(pH60,内含05%三乙胺)-乙腈(65∶35.V/V),使用045μm微孔滤膜负压过滤;流速:10mL/min;检测波长:254nm,柱温:40 ℃;进样量:20μL。

22对照品和内标溶液配制精密称取奥氮平对照品与喹硫平对照品各1mg,分别置于10mL量瓶,加甲醇溶解并定容,得到质量浓度为 01mg/mL的对照品溶液置冰箱4℃保存。临用时用甲醇稀释成所需浓度的奥氮平与喹硫平对照品溶液。精密配制浓度为 2mg/L阿米替林甲醇溶液作为工作内标液。

23样品处理方法取含奥氮平和喹硫平的血清样品1mL,加内标10μL(2mg/L阿米替林),并加入25%维生素C溶液10μL及10mol/L氢氧化钠溶液02mL,快速震荡数秒。加入乙醚4mL提取,在旋涡混合器上涡旋2min,静置1h,取出醚层,置尖底试管中,于30℃水浴至干。残渣用100μL流动相复溶,取20μL进样分析。

24色谱分离情况在本实验条件下,空白血清、奥氮平与喹硫平对照品血清,以及精神病患者服药后的血清样品,经高效液相色谱分析法测定,得到的色谱图见图1。由图1可知,奥氮平、喹硫平和阿米替林内标物的色谱峰能够完全分离。奥氮平、阿米替林和喹硫平的保留时间为47min、58min、83min。

25标准曲线的制备在7个具塞的离心管中分别加入空白血清10mL,再分别加入不同浓度、相同体积的奥氮平和喹硫平对照品溶液和内标物阿米替林,振荡数秒,使血清奥氮平浓度分别为10、20、40、80、100、125、250μg/L,喹硫平为50、100、200、400、500、800、1000μg/L。然后按照“23”项处理后,经高效液相色谱分析,测得奥氮平和喹硫平峰面积 (Ai), 内标物峰面积As, 以Ai/As比值为横坐标,以血清样品所对应其各点浓度为纵坐标绘制标准曲线,经最小二乘法线性回归,得到奥氮平10~250μg,喹硫平50~1000μg范围的血清浓度标准曲线。奥氮平的标准曲线回归方程为C=03117Ai/As-32145 (r=09972),喹硫平的标准曲线回归方程为C=02066Ai/As+21861 (r=09995)。当信噪比(S/N)=3时,奥氮平与喹硫平的检测定量下限可达到5μg/L。

26回收率与精密度实验取奥氮平质量浓度为10、80、250μg/L的含药血清样品,喹硫平质量浓度为50、400、800μg/L的血清样品,经色谱分析,得到的相对回收率均大于90%。同时在1d内重复5次和2周内重复5次测定浓度,计算日内、日间误差和回收率。结果表明,该方法符合生物样品分析要求。见表1。

27[JP+1]稳定性试验按“23”项下方法配制奥氮平质量浓度为10、80、250μg/L,喹硫平质量浓度为 50、400、800μg/L的血清样品共18份(1式3份),分别考察室温放置4h、4℃冰箱放置24h、-20℃冰箱冻存1周后的稳定性,分别进行色谱分析。结果未见冻存样品的药物降解,RSD均<15%。[JP]

28样品的质量控制实验按照“23”项的方法分别配置奥氮平(10、80、250μg/L)和喹硫平(50、400、800μg/L)血清样品共36个血清样品(1式6份),置于-20℃冻存备用为质控样品。每次检测血样时同时检测质控样品,如果相对回收率均落在85%~115%之内即可认为检测正常,否则须检查整个操作过程及仪器原因。

29患者血样测定1例男性精神病患者,口服奥氮平15mg/d和喹硫平400mg/d。2周后早晨服药前空腹采血检测其血清药物浓度。结果奥氮平为613μg/L,喹硫平为3102μg/L。

3讨论

奥氮平和喹硫平结构中都有苯环,紫外吸收明显。奥氮平与喹硫平对照品溶液在190~400nm的波长范围内进行紫外扫描,发现喹硫平和奥氮平在254nm处均有强吸收峰,因此本实验选择254nm作为最佳检测波长。

本实验考察了不同柱温(25~40℃)、不同流速 (08~15 mL/min)、不同pH磷酸盐缓冲液(40、60、686)的流动相系统,结果表明柱温为40℃、流速为10mL/min、流动相为磷酸盐缓冲溶液(pH60)-乙腈(65∶35)时,柱效较高,主药峰与杂质峰能够有效地分离。实验过程中分别使用乙醚、乙酸乙酯、二氯甲烷为提取剂,发现乙醚的提取率最高,所取血清1mL,进样量20μL可达到实验要求,提高了灵敏度,避免样品杂质的干扰,可达到分析目的。奥氮平在储存和提取中易被空气氧化,因此加入维生素C作为抗氧剂。

奥氮平和喹硫平血药浓度具有治疗窗窄、个体差异大等特点,因此进行血药浓度监测是必要的[9]。单独检测奥氮平和喹硫平药物血药浓度已有报道[6-8],但还未见使用高效液相色谱法同时测定这两种药物的报道。实验建立了人血清中奥氮平和喹硫平同时测定的方法,准确、灵敏并能满足临床需要,可以用于临床药物监测。

参考文献

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[2]袁道瑞,张向荣,陆蓉,等. 精神分裂症患者血脂水平对奥氮平血浆药物浓度的影响[J].四川精神卫生,2015(4):310-313.

[3]PLOSKER GL.Quetiapine: a pharmacoeconomic review of its use in bipolar disorder[J].Pharmacoeconomics, 2012 , 30(7):611-631.

[4]张静,闽国庆. 奥氮平联合富马酸喹硫平治疗精神分裂癥的临床观察[J]. 中国药房,2016 (9): 1173-1176.

[5]付永强.奥氮平联合富马酸喹硫平治疗精神分裂症的疗效观察[J].医学理论与实践,2017, 30(2).

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[9]HIEMKE C, BAUMANN P, BERGEMANN N, et al. AGNP Consensus Guidelines for Therapeutic Drug Monitoring in Psychiatry: Update 2011[J]. Pharmacopsychiatry, 2011, 44(6): 195.

(收稿日期:2017-04-01编辑:梁志庆)

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