血红蛋白电泳在婴儿地中海贫血筛查中的应用价值和临床研究

肖 贞

(中山市小榄人民医院 儿科，广东 中山528415)

血红蛋白电泳在婴儿地中海贫血筛查中的应用价值和临床研究

肖 贞

(中山市小榄人民医院 儿科，广东 中山528415)

目的 血红蛋白电泳在婴儿地中海贫血筛查中的应用价值和临床研究。方法 选取我院从2012年1月到2015年12月儿科做儿童保健的1255例3月龄婴儿做为研究对象。应用全自动电泳分析系统对所有婴儿静脉血行血红蛋白电泳测定。对于测定结果地中海贫血阳性病例实施基因分析。结果 1255例3月龄婴儿静脉血样本中，血红蛋白异常病例共91例，其中疑似α-地中海贫血57例，疑似β-地中海贫血22例，疑似异常血红蛋白12例。基因测定结果提示α-地中海贫血51例，筛查符合率为89.47%；β-地中海贫血19例，筛查符合率为86.36%；9例异常血红蛋白，3例HbE型，2例HbQ型，2例HbD型，Hb New York型、Hb J及Hb G型各1例。α-地中海贫血基因构成中--SEA/αα、-α3.7/αα及-α4.2/αα 3种类型占比最多，分别为2.39%、0.56%及0.48%；β-地中海贫血基因构成中βCD41-42/βN、βIVS-Ⅱ-654/βN及βCD17/βN3种类型占比最多，分别为0.64%、0.39%及0.24%。结论 临床对婴儿应用血红蛋白电泳测定其静脉血中血红蛋白中各组分的含量，对婴儿中地中海贫血的进行早期筛查与分类确诊，具较高的诊断符合率，值得临床广泛推广应用。

血红蛋白电泳；婴儿；地中海贫血；筛查

(ChinJLabDiagn,2017,21:0964)

有报道指出[1]，应用血红蛋白电泳技术测定血红蛋白中HbA、HbF及HbA2占比，可对地中海贫血(thalassaemias,TM)早期分类确诊提供可靠依据；地中海贫血临床上属于单一或多种珠蛋白肽链合成功能障碍引发的，珠蛋白肽链代谢紊乱引发的一类贫血，又叫珠蛋白合成障碍性贫血，我国该病具显著地域性特点，南方省份发病率高于北方，做为遗传性疾病严重危害新生儿生存质量[1]。我院从2012年1月开始研究血红蛋白电泳在婴儿地中海贫血筛查中的应用价值和临床研究，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取我院从2012年1月到2015年12月儿科做儿童保健的1255例3月龄婴儿做为研究对象。男婴621例，女婴634例，年龄均为3月龄。所有婴儿本次研究前由监护人签署知情同意书，研究项目报本院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 脐血采集与检测 对1255例儿科儿童保健婴儿常规采集静脉血2 ml，抗凝处理[2]。应用美国HELENA LABORATORIES INC.公司SPIFE4000型全自动血红蛋白电泳分析仪，严格按照仪器使用说明书进行操作，试剂盒为全自动血红蛋白电泳分析仪配套试剂盒，点样电泳20-25 min后，由仪器自动完成分离区带、染色、脱色、透明及烘干等操作[2]。

1.2.2 脐血血红蛋白电泳筛查诊断标准 健康婴儿血红蛋白电泳结果显示：无异常Hb区带；HbA组分占比为30%、HbF组分占比为70%；HbA2组分占比0.1-1%[3]。α-地中海贫血：有异常Hb Bart′s区带、Hb CS区带；β-地中海贫血：HbA低于12%且HbF高于88%，另需考虑新生婴儿家族遗传基因中是否存在β-地中海贫血基因序列。异常血红蛋白：检出异常Hb区带[4]。

1.3 地中海贫血基因分型测定 应用血红蛋白电泳技术检测后阳性样本实施基因测序分型评估，应用GAP-PCR法对缺失型α-地中海贫血进行基因分型测序，缺失型α-地中海贫血基因构成主要为--SEA/αα、-α3.7/αα及-α4.2/αα三类[5]。其他类型α-地中海贫血及β-地中海贫血基因分型应用PCR联合反向斑点杂交法测序[6]，所有DNA序列测定由市卫生局指定单位检测。

1.4 统计方法 数据以均数±标准差表示,采用SPSS18.0统计软件进行分析。

2 结果

2.1 血红蛋白电泳筛查结果

本次研究中应用全自动血红蛋白电泳系统检测的1255例3月龄婴儿静脉血样本中，血红蛋白异常病例共91例，占样本总数的7.25%，疑似α-地中海贫血57例，占样本总数的4.54%，疑似β-地中海贫血22例，占样本总数的1.75%，疑似异常血红蛋白12例,占样本总数的0.96%。

2.2 筛查疑似样本基因确诊结果 通过对91例电泳检测阳性病例实施基因测定。结果α-地中海贫血51例，血红蛋白电泳筛查符合率为89.47%；β-地中海贫血19例，血红蛋白电泳筛查符合率为86.36%；疑似异常血红蛋白12例，应用PCR技术联合反向斑点杂交与DNA序列测定，结果9例异常血红蛋白，3例HbE型，2例HbQ型，2例HbD型，Hb New York型、Hb J及Hb G型各1例。

2.3 α-地中海贫血与β-地中海贫血基因构成 α-地中海贫血基因构成中--SEA/αα、-α3.7/αα及-α4.2/αα 3种类型占比最多，分别为2.39%、0.56%及0.48%；β-地中海贫血基因构成中βCD41-42/βN、βIVS-Ⅱ-654/βN及βCD17/βN3种类型占比最多，分别为0.64%、0.39%及0.24%，见表1、2。

表1 α-地中海贫血基因分型构成(n,%)

表2 β-地中海贫血基因分型构成

3 讨论

有报道称[7]，地中海贫血临床上属于珠蛋白生成障碍性贫血，由于常染色体遗传缺陷致病，全世界范围内均有该病患者，在我国两广地区成年人中发病率较高，地中海贫血在新生儿婴儿中患病率亦较高。

有学者实验结果显示[8]，我国两广地区地中海贫血主要类型中α与β-地中海贫血患者患病率在8-10%；临床上确诊地中海贫血的所选措施中基因诊断是诊断准确度最高的，由于基因检测技术不易掌握，检测花费多，无法广泛在基层医院开展，目前基层医院普遍采用的血红蛋白电泳测定血红蛋白各成分组成来筛查地中海贫血患者；通过血红蛋白电泳技术筛查出的地中海贫血疑似病例，通过基因检测与家族遗传情况分析来确诊是否为地中海贫血[9]。

有报道指出[10]，地中海贫血患者其珠蛋白链合成功能障碍，导致贫血性病理表现。地中海贫血主要分为两大类：即α-地中海贫血与β-地中海贫血；其中α-地中海贫血由于患者α基因合成功能障碍导致珠蛋白生成障碍性贫血，此类患者α链合成受抑制或合成减少，患者血红蛋白中的β链集聚产生HbH;若患者血红蛋白中α链处于缺失状态，则β链集聚产生Hb Bart′s，导致血红蛋白中HbA、H bA2、HbF水平降低。有学者实验结果提示[10]，α-地中海贫血患者中，HbA及HbA2水平降低，血红蛋白电泳测定中出现HbH区带，HbA2水平显著低于健康人群。β-地中海贫血由于患者β基因合成功能障碍导致珠蛋白生成障碍性贫血，患者β链合成受抑制或合成减少，患者血红蛋白中的α、γ链集聚产生HbA2与HbF;患者血红蛋白中HbA2与HbF水平增高；HbF水平显著高于健康人群[10]。有学者实验结果显示[11]，临床应用血红蛋白电泳筛查新生婴儿的地中海贫血，其与基因诊断符合率中：α-地中海贫血与β-地中海贫血检测符合率分别为85-88%、83-85%。本次研究结果中，α-地中海贫血基因构成中--SEA/αα、-α3.7/αα及-α4.2/αα 3种类型占比最多；β-地中海贫血基因构成中βCD41-42/βN、βIVS-Ⅱ-654/βN及βCD17/βN3种类型占比最多。

有学者研究结果显示[11]，血红蛋白电泳技术筛查地中海贫血通过测定血红蛋白中正常与异常蛋白组分构成来初步诊断与病例分型，由于血红蛋白各组分电位差异，电荷量多少，将其划分分为多个区带。全自动血红蛋白电泳可以测定血红蛋白中HbA、HbF及HbA2构成比例；依据上述组分构成比例，对疑似地中海贫血病例实施分型，即α-地中海贫血或β-地中海贫血[11]。

大量实验结果提示[12]，Hb Bart′s做为新生儿脐血中特有的血红蛋白，新生儿出生3个月至1年将消失，是被普遍认可的新生婴儿α-地中海贫血筛查指标，在α-地中海贫血携带者的新生儿脐血样本中Hb Bart′s含量不同[12]。

有学者实验结果提示[13]，异常血红蛋白属于珠蛋白一级结构出现变异，影响血红蛋白中珠蛋白链分子结构与构成，此类患者临床症状非典型性，无特异性表现；临床应用血红蛋白电泳筛查新生婴儿脐血样本，测定异常血红蛋白病例，应用PCR联合反向斑点杂交与DNA序列对比进行确诊分型[13]。在我国HbE属于临床多见的异常血红蛋白，患者血红蛋白β链上第26位密码子基因突变，氨基酸发生替代效应,赖氨酸替代谷氨酸[13]。

有报道指出[14]，在我国地中海贫血发病率南北差异显著，两广地区及海南省是此类遗传性溶血性病症的重点防治区域，临床患病率高；随着血红蛋白电泳检测技术的临床应用日益广泛，其对于地中海贫血临床筛查应用通过测定HbA、HbF及HbA2各构成占比，对患者初步分型，并结合家族遗传基因进行分型确诊[14]。另血红蛋白电泳检测对于异常血红蛋白中少数类型进行准确判定，HbE型、 HbQ型、 HbD型、Hb New York型、Hb J及Hb G型等[14]。应用血红蛋白电泳检测技术初步分型后，进一步联合基因检测可大大提高地中海贫血的检出率，有利于尽早确诊与干预治疗[14]。

有报道称[15]，应用血红蛋白电泳筛查的优势在于成本低于直接基因检测，基层医院即可实施，虽然其技术要求低于基因检测，但日常应用其检测过程中仍需注意以下几个方面：检测时尽量有两位以上专业医师联合判定，防止漏诊与误诊出现；对于血红蛋白电泳仪要定期维护与保养，确保设备运行状态良好，所用检测试剂定期查看有无过期，对于检验科室医务人员定期培训学习，检测结果为临界点时需再次测定以便明确诊断[15]。

我院对1255例3月龄婴儿静脉血样本进行血红蛋白电泳测定，结果电泳检测筛查出血红蛋白异常病例共91例，其中疑似α-地中海贫血57例，疑似β-地中海贫血22例，疑似异常血红蛋白12例。基因测定结果提示α-地中海贫血51例，筛查符合率为89.47%；β-地中海贫血19例，筛查符合率为86.36%；9例异常血红蛋白，3例HbE型，2例HbQ型，2例HbD型，Hb New York型、Hb J及Hb G型各1例。

综上所述,临床对婴儿应用血红蛋白电泳测定其静脉血中血红蛋白中各组分的含量，对婴儿中地中海贫血的进行早期筛查与分类确诊，具较高的诊断符合率，值得临床推广应用。

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Value and clinical application in infant hemoglobin electrophoresis thalassemia screening

XIAOZhen．

(XiaolanPeople'sHospitalofZhongshan,Zhongshan528415,China)

Objective To study the value and clinical application in infant hemoglobin electrophoresis thalassemia screening.Methods Our hospital from January 2012 to December 2015 do pediatric child health 1255 cases of 3-month-old baby as a research object.Application of automatic electrophoresis system for all infants blood hemoglobin electrophoresis line.For the determination of genetic analysis results of thalassemia positive cases.Results 1255 cases of 3-month-old baby blood samples,91 cases of abnormal hemoglobin cases,including 57 cases of suspected α- thalassemia,β- thalassemia suspected in 22 cases,12 cases of suspected abnormal hemoglobin.Measurement results prompted α-thalassemia gene in 51 cases,the screening rate was 89.47%;β- thalassemia in 19 cases,the screening rate was 86.36%;9 cases of abnormal hemoglobin,3 HbE type 2 cases HbQ type 2 Example HbD type,Hb New York type,Hb J and Hb G type 1 case.α- thalassemia gene constitution --SEA/αα,-α3.7/αα and -α4.2/ αα three types accounting for most,were 2.39%,0.56% and 0.48%;β- thalassemia genetic makeup the βCD41-42/βN,βIVS-Ⅱ-654/βNand βCD17/βNthree types accounting for most,were 0.64%,0.39% and 0.24%.Conclusion The clinical application of baby hemoglobin electrophoresis to determine the contents of hemoglobin in the blood of each component of infants thalassemia screening for early diagnosis and classification,with high diagnostic accuracy,worthy of wider application.

hemoglobin electrophoresis;baby;thalassemia;Screening

1007-4287(2017)06-0964-04

R556

A

肖贞(1970-)，女，副主任医师，现主要从事儿科工作。

2016-05-07)